果菠萝蛋白酶在有机溶剂中的变性与失活动力学的研究

测得果菠萝蛋白酶是由单亚基组成,分子量约为30k,pl为4.6,每个酶分子含一个游离疏基和二个硫硫键,甲醇、乙醇、乙二醇对酶活力有明显的抑制作用,甲醇、乙醇表现为非竞争性,乙二醇为竞争性,其抑制常数分别为:20％、16.5％和11％。在有机溶剂作用下,监测荧光(332nm)强度随时间的变化过程,作为变性的指标,测定酶在不同浓度有机溶剂中的变性动力学,并按邹氏法测定酶的失活动力学,对酶构象及催化活力关系进行比较,酶的失活速度大于变性速度,说明酶活性中心处于对有机溶剂较敏感的区域,酶的变性与失活过程均可分为快、慢两相的一级反应,这意味着可能存在着部分活力的中间态。

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数。

磷酸盐及其结构类似物对文昌鱼酸性磷酸酶的影响

研究了磷酸盐（ＨＰＯ￣（２－）＿４）及其结构类似物钼酸盐（ＭｏＯ￣（２－）＿４），钒酸盐（ＨｖＯ￣（２－）＿４），钨酸盐（ＷＯ￣（２－）＿４）对文昌鱼酸性磷酸酶活力的影响及其抑制机理。实验结果表明：磷酸盐对文昌鱼酸性磷酸酶的抑制作用表现为竞争性抑制类型，而其结构类似物则是通过非竞争性抑制的方式抑制酶活力．抑制常数Ｋｉ分别为：磷酸盐：３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ，钼酸盐：５．５×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ，钒酸盐：７．０×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ，钨酸盐：３．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，用酸盐对酶活力呈时间抑制过程，表明该类似物可能通过氧化—还原这种新的抑制机理来抑制酶的活力。

几种金属离子对文昌鱼酸性磷酸酶的影响

几种金属离子对酶活力的影响，Ｆｅ￣（２＋）对酶活力没有抑制，Ｆｅ￣（３＋）有激活作用，Ｍｎ￣（２＋）、Ｃｏ￣（２＋）、Ｍｉ￣（２＋）抑制甚微，Ｃｄ￣（２＋）稍有抑制，而Ｚｎ￣（２＋）、Ａｇ￣（２＋）、Ｃｕ￣（２＋）、Ｈｇ￣（２＋）对酶活力有明显的抑制作用，其抑制强度依次为Ｈｇ￣（２＋）＞Ｃｕ￣（２＋）＞Ａｇ￣＋＞Ｚｎ￣（２＋）。随着Ｈｇ￣（２＋）、Ｃｕ￣（２＋）浓度增大而抑制作用加强，其抑制表现为竞争性类型，抑制常数Ｋｉ分别为１．１２×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ和３．７０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ。金属离子影响酶活力，同时也影响了酶的构象，文中分别对荧光发射光谱和紫外－可见吸收光谱的变化加以讨论。

用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化文昌鱼酸性磷酸酶

从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶，用快速蛋白液相层析法（ＦＰＬＣ）的Ｓｕ－ｐｅｒｏｓｅ１２柱和ＭｏｎｏＳ柱对其进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２柱鉴定为单一纯的酶制剂．它的分子量为５２０００，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体．酶的提纯倍数为６１２．５２．