高容量血液滤过对多器官功能障碍综合征犬内质网应激标志蛋白Caspase-12基因水平及表达的影响

目的探讨高容量血液滤过(HVHF)治疗多脏器功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)对内质网应激相关性细胞凋亡及应激标志蛋白Caspase-12基因水平及表达的影响,并探讨高容量血液滤过(high volume hemofiltration,HVHF)治疗MODS的机制。方法经二次打击建立犬MODS模型。分HVHF组和MODS组,于术前(T1)、内毒素注射完后0h(T2)、6h(T3)、12h(T4)及24h(T5)留血标本。体内实验:应用荧光定量PCR法检测肝、肾及肺组织Caspase-12m RNA基因表达水平。体外实验:2组血清体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立内质网应激凋亡模型。测定si RNA干扰前后Caspase-12m RNA基因表达、蛋白表达及内皮细胞凋亡率。结果体内实验:与MODS组相比,HVHF组肾、肺组织Caspase-12m RNA基因表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),而肝组织Caspase-12m RNA基因表达水平无明显差异(P>0.05)。体外实验:干扰前与MODS组相比,HVHF组在T2-T5HUVECs Caspase-12m RNA基因表达水平、Caspase-12蛋白表达水平及细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。干扰后2组HUVECs Caspase-12m RNA基因表达水平、Caspase-12蛋白表达水平及细胞凋亡率均较干扰前显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论内质网应激凋亡信号通路在MODS演进过程中占重要地位,经过HVHF治疗后内质网应激(ERS)凋亡信号通路中的关键蛋白Caspase-12基因表达、Caspase-12蛋白表达水平及细胞凋亡率均明显下降,此作用有助于减轻机体细胞凋亡程度,有效地救治MODS。而RNA干扰(RNAi)技术有望成为治疗MODS新的治疗靶点。

不同血液净化治疗对多器官功能障碍犬器官功能和细胞因子的影响

目的观察连续性血液透析滤过(CVVHDF)和高容量血液滤过(HVHF)对多器官功能障碍(MODS)犬器官功能和细胞因子白细胞介素-1(IL-1)、IL-4的影响,探讨两种治疗模式对MODS的治疗效果。方法 18只Beagle犬采用失血性休克+复苏再灌注+内毒素血症建立MODS模型,随机分为CVVHDF组(n=6)、HVHF组(n=6)和MODS组(n=6)。内毒素注射完毕后CVVHDF组、HVHF组接受相应血液净化治疗24 h。测定各时间点血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、动脉血氧分压(Pa O2)及二氧化碳分压(Pa CO2),应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定IL-1和IL-4浓度。结果血液净化治疗后血浆IL-1、IL-4浓度在各时间点均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与HVHF组相比,CVVHDF组IL-1、IL-4浓度在内毒素注射完后6 h明显升高,在内毒素注射完后24 h明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。血液净化治疗后动物各器官功能均得到改善。与HVHF组相比,CVVHDF组Pa O2值在注射内毒素后12 h明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HVHF组相比,CVVHDF组Scr、BUN在注射内毒素后15 h、24 h明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与HVHF组相比,CVVHDF组ALT值在注射内毒素后15 h明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);AST值在注射内毒素后6 h、12 h明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CVVHDF与HVHF均可以改善组织缺氧,减轻肝、肾、肺功能损伤。HVHF对炎症介质的清除更优于CVVHDF。

不同血液净化模式治疗多器官功能衰竭犬对单核细胞功能影响的对比研究

目的探讨连续性静-静脉血液透析滤过(continuous veno-venous hemodiafiltration,CVVHDF)和高容量血液滤过(high-volume hemofilteration,HVHF)2种血液净化方法对多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)犬的疗效差异。方法 18只Beagle犬采用失血性休克+复苏再灌注+内毒素血症建立MODS模型,随机分为CVVHDF组、HVHF组和MODS组,每组6只。CVVHDF组和HVHF组分别给予CVVHDF、HVHF治疗24h,MODS组未给予治疗。分别于术前(T_1)、内毒素注射后0h(T_2)、6h(T_3)、12h(T_4)、24h(T_5)时,采用流式细胞术通过荧光素标记的Annexin-V检测单核细胞早期及晚期凋亡率,采用ELISA法检测培养上清中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-4水平,采用流式细胞术检测犬白细胞抗原(dog leukocyte antigen,DLA)-DR表达水平。结果CVVHDF组和HVHF组T_3~T_5时外周血单核细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显低于MODS组(P<0.05),HVHF组T_3时单核细胞早期凋亡率[(9.51±2.08)%]明显低于CVVHDF组[(11.95±1.09)%](P<0.05);CVVHDF组和HVHF组DLA-DR表达水平T_4时[(8.45±5.60)%、(7.43±3.90)%]、T_5时(13.55±2.93)%、(13.43±6.78)%]明显高于MODS组[(1.77±1.01)%、(2.37±0.90)%](P<0.05),CVVHDF组与HVHF组比较差异无统计学意义(P>0.05);CVVHDF组和HVHF组T_3时培养上清中IL-1β水平[(347.50±10.70)、(421.70±11.40)ng/L]高于MODS组[(278.18±11.66)ng/L](P<0.05),IL-4水平T_3~T_5时高于MODS组(P<0.05);HVHF组T_3时培养上清IL-4水平[(139.23±7.26)ng/L]高于CVVHDF组[(126.85±6.86)ng/L](P<0.05)。结论 CVVHDF及HVHF 2种治疗模式均可改善MODS犬单核细胞功能,HVHF模式在降低单核细胞凋亡、改善单核细胞分泌功能方面优于CVVHDF模式。

大鼠肾移植后外周血T细胞亚群动态变化

目的探讨肾移植术后大鼠T细胞亚群动态变化与急性排斥反应的关系。方法 15只健康SD大鼠为正常对照组;15只行假手术SD大鼠为假手术组;16只SD大鼠作为供者、16只SD大鼠作为受者建立同系基因移植为非急性排斥组;16只SD大鼠为受体建立异系基因移植为急性排斥组,供体为16只Wistar大鼠。监测4组大鼠术后第7天T细胞亚群及肾功能变化,并对其组织病理学急性排斥反应严重程度进行半定量评分。结果急性排斥组在术后第7天血清肌酐[(115.35±30.09)μmol/L]、尿素氮[(19.80±10.71)mmol/L]水平和急性排斥反应半定量评分[3(3,3)分]均明显高于正常对照组[(17.80±4.45)μmol/L、(4.97±0.49)mmol/L、0(0,0)分]、假手术组[(47.06±4.28)μmol/L、(5.75±1.06)mmol/L、0(0,0)分]和非急性排斥组[(55.31±8.48)μmol/L、(8.25±1.57)mmol/L、0(0,1)分](P均<0.01);急性排斥组CD4+T细胞比率[(27.98±6.07)%]和CD4+/CD8+比值(2.13±0.66)明显高于非急性排斥组[(8.23±2.63)%、0.20±0.06]、假手术组[(9.84±2.87)%、0.22±0.10]和正常对照组[(8.94±2.44)%、0.20±0.07],CD8+T细胞比率[(13.85±3.74)%]明显低于非急性排斥组[(43.08±6.26)%]、假手术组[(46.67±6.94)%]和正常对照组[(43.69±9.82)%](P均<0.01)。结论 T细胞亚群检测对评价肾移植术后免疫功能状态有一定价值,有助于肾移植术后急性排斥反应的早期诊断和治疗。