Ad36感染对维吾尔族肥胖患者progranulin表达的调节作用

目的探讨腺病毒36型(Ad36)感染对维吾尔族肥胖患者颗粒蛋白前体(progranulin)表达的调节作用。方法根据肥胖诊断标准将维吾尔族人群样本分为肥胖组(115)与非肥胖组(117),收集血清标本232份,脂肪标本102份。血清中和反应法检测样本血清中的Ad36抗体。采用实时荧光定量PCR(real time quantitative-PCR)方法检测研究对象大网膜和皮下的脂肪组织progranulin的mRNA表达水平,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清progranulin的蛋白表达水平。免疫组化方法检测脂肪组织巨噬细胞CD68蛋白表达,了解巨噬细胞浸润情况。结果 1肥胖患者Ad36感染率(54/115,47.0%)明显高于非肥胖者(38/117,32.5%),差异有统计学意义(P<0.05)。2Ad36感染的肥胖组血清progranulin的蛋白表达水平(408.45±156.92)显著高于非肥胖组(326.11±158.60),差异有统计学意义(P<0.05);两组的腹部大网膜、皮下脂肪组织progranulin mRNA表达水平差异无统计学意义(P均>0.05)。3Ad36感染的肥胖组巨噬细胞浸润(14 730.16±2 227.39)明显高于非肥胖组(10 786.50±2 772.80),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Ad36感染可能与维吾尔族肥胖发生有关,其机制可能为通过调节血清progranulin的蛋白表达水平而实现。

腺病毒36感染对人脂肪源性间充质干细胞PPARγ和adiponectin基因表达的影响

目的探讨腺病毒36感染对人脂肪源性间充质干细胞过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptor,PPARγ）和脂联素（adiponectin）基因表达的影响。方法无菌条件下获取人皮下脂肪组织、I型胶原酶消化并收集人脂肪源性间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cell,h AMSC）,细胞传至第3代（P3代）对h AMSC进行定向成脂诱导,并进行油红O染色;流式细胞仪检测h AMSC表面免疫表型;人类腺病毒36（adenouirus-36,Ad36）感染h AMSC,采用荧光实时定量PCR（Real time-PCR）方法检测Ad36感染的h AMSC PPARγ和adiponectin基因表达的变化规律。结果 （1）h AMSC在体外呈梭形生长,且能稳定传代;（2）细胞在加入成脂诱导剂后可定向分化成脂肪细胞;（3）流式细胞术检测结果显示h AMSC免疫表型：CD105（93.0±1.3）%,CD44（99.6±0.3）%,CD34（0.2±0.1）%,CD45（0.2±0.3）%,CD31（0.3±0.3）%,CD29（3.4±0.2）%;（4）Ad36感染h AMSC后细胞内脂滴逐渐增多、增大。PPARγ和adiponectin基因在Ad36感染h AMSC后的第1天开始表达,感染后第2～6天较0 MOI组显著升高（P〈0.05）,至感染后第8天10 MOI剂量组表达水平开始下降。结论 Ad36使h AMSC定向分化成脂肪细胞,并上调了PPARγ和adiponectin基因的表达。

肥胖患者脂肪组织STAU1表达变化及其在脂肪间充质干细胞成脂分化中的作用

目的探讨双链RNA结合蛋白STAU1在肥胖患者脂肪组织中的表达变化,及其在人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)成脂分化中的作用。方法选择56例慢性胆囊结石及疝气择期手术患者,根据BMI分为肥胖组27例和非肥胖组29例;术中取患者网膜及皮下脂肪组织,采用RT-qPCR及Western blotting法检测脂肪组织中的STAU1基因和蛋白,分析肥胖组患者网膜组织中STAU1基因与腰围、臀围、BMI、血压、血糖、血脂等指标的相关性。经网膜脂肪组织获取h ADSCs,分别于成脂诱导液处理0、2、4、6、8 d,油红O染色法检测细胞中甘油三酯生成情况(OD值),同法检测细胞中STAU1、过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARγ)表达水平。将h ADSCs分为3组,干扰1、2组分别转染siRNA STAU1-homo-718、STAU1-homo-923,对照组不转染;转染2、4 d,同法检测甘油三酯生成情况及STAU1、PPARγ表达水平。结果肥胖组网膜脂肪组织中STAU1基因和蛋白表达水平高于非肥胖组(P均<0. 05),而皮下脂肪组织中STAU1基因表达差异无统计学意义;肥胖组网膜脂肪组织中STAU1基因表达水平与患者的腰围、臀围、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、空腹血糖无明显相关性,与BMI、甘油三酯呈正相关(r分别为0. 777、0. 795,P均<0. 01)。随着诱导分化天数增加,h ADSCs中甘油三酯生成增多,STAU1、PPARγ表达水平逐渐升高(P均<0. 05)。与对照组比较,干扰1、2组转染2、4 d时h ADSCs中STAU1表达降低,甘油三酯生成及PPARγ表达减少(P均<0. 05)。结论肥胖患者网膜脂肪组织中STAU1表达增加,且与BMI、甘油三酯呈正相关; STAU1可能通过上调PPARγ的表达,从而促进人网膜脂肪组织及h ADSCs成脂分化中甘油三酯的生成。

腺病毒36型对PPARγ和CIDEC在脂肪细胞分化过程的调节作用

为探讨腺病毒36型在人脂肪细胞分化过程中对PPARγ及CIDEC基因表达的调节作用,利用腺病毒感染人脂肪源性间充质干细胞(h AMSC)、油红O染色和RT-q PCR鉴定Ad36诱导h AMSC分化为脂肪细胞模型;葡萄糖氧化酶法和甘油三酯终点法测定人类腺病毒36型(Ad36)诱导h AMSC分化为脂肪细胞的过程中培养基葡萄糖浓度及细胞甘油三酯含量;RT-q PCR、Western Blotting方法检测Ad36诱导的人脂肪细胞中,PPARγ和CIDEC蛋白表达水平的变化;用PPARγ特异性抑制剂GW9662抑制PPARγ表达后,Western Blotting方法检测Ad36诱导的人脂肪细胞中CIDEC蛋白质的表达。Ad36诱导的h AMSC定向分化成人脂肪细胞,分化过程中培养基葡萄糖含量较对照组显著降低(P<0.05),细胞内甘油三酯含量较对照组显著升高(P<0.05),PPARγ和CIDEC基因表达水平较对照组显著升高(P<0.05),在诱导第6天表达水平最高,在使用GW9662抑制PPARγ蛋白质表达后,CIDEC蛋白质表达水平较对照组显著降低(P<0.05)。从细胞水平证实,Ad36诱导人脂肪细胞分化过程中,Ad36通过PPARγ上调CIDEC基因的表达水平。