TRAIL基因修饰联合阿霉素对大肠癌细胞株RKO作用的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子(tumor necrsis factor,TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因联合阿霉素后,应用于人大肠癌细胞株RKO基因治疗的实验研究。方法:将重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因作用于大肠癌细胞株RKO,并联合低剂量的阿霉素协同作用。通过MTT比色法与流式细胞仪研究分析其对RKO细胞的作用效果,并以RT—PCR检测联合应用阿霉素前后TRAIL基因的表达水平。结果:病毒载体对RKO细胞的生长有轻微的抑制作用,作用4 d抑制率为11.9％,但不增加RKO细胞的凋亡率。TRAIL对RKO细胞的生长抑制率及凋亡诱导率分别为50.1％和19.8％。联合阿霉素后,TRAIL对RKO细胞株的生长抑制率及凋亡率均有显著的增强作用,分别达60.3％及49.0％。RT-PCR结果提示联合应用阿霉素后,TRAIL基因的表达并未增强。结论:TRAIL能有效抑制RKO的生长,联合阿霉素后,其对RKO的生长抑制作用及凋亡诱导作用均明显增强。阿霉素不是通过增加TRAIL基因的表达来实现上述作用的。

透明质酸钠影响大肠癌细胞生长和粘附的体外研究

目的 :研究透明质酸钠 (sodium hyaluronate)对大肠癌细胞生长和粘附的影响。方法 :用人类大肠癌细胞SW6 2 0和 Colo2 0 5与透明质酸钠溶液 (2 5～ 2 5 0 0μg/ ml)体外培养 ,然后用 MTT方法测定增殖情况。同时 ,运用流式细胞术 ,对 SW6 2 0和 Colo2 0 5细胞表面的 CD4 4表达进行检测 ,比较不同浓度透明质酸钠溶液对肿瘤粘附力的影响。结果 :MTT结果提示 ,实验组 SW6 2 0细胞生长与对照组无显著差异 ,但实验组 Colo2 0 5细胞生长与对照组有显著差异。另外 ,流式细胞术的结果显示 ,透明质酸钠可使 SW6 2 0和 Colo2 0 5细胞表面的 CD4 4表达下调。结论 :浓度为 2 5～ 2 5 0 0μg/ ml透明质酸钠对不同大肠癌细胞系生长有不同的影响 ,但可降低肿瘤细胞粘附分子的表达 ,从而影响其粘附力。

受体型酪氨酸激酶RONΔ160对NIH-3T3细胞生长和移动浸润能力的作用

目的研究受体型酪氨酸激酶RONΔ160对3T3细胞生长和移动浸润能力的作用。方法NIH-3T3细胞转染质粒pDR2-RONΔ160,建立稳定表达RONΔ160的3T3-RONΔ160细胞株;免疫沉淀法检测细胞RONΔ160的酪氨酸磷酸化;倒置显微镜观察细胞形态变化;软琼脂培养法观察RONΔ160对NIH-3T3细胞生长能力的作用;体外跨室趋化运动实验检测RONΔ160对NIH-3T3细胞移动浸润能力的作用。结果成功建立3T3-RONΔ160细胞株,western blot证明其稳定表达RONΔ160蛋白;免疫沉淀试验结果显示RONΔ160具有自身酪氨酸磷酸化;软琼脂生长实验示转染组细胞生长克隆数为146.00±3.61,而未转染组和载体对照组分别为11.67±1.15和12.67±2.52,转染组与未转染组、载体对照组分别比较,差异均有统计学意义(t分别=51.60、151.19,P均<0.05);体外跨室趋化运动实验结果示转染组穿膜细胞数为458.50±4.95,而未转染组和载体对照组分别为20.00±5.66和21.50±4.95,转染组与未转染组、载体对照组分别比较,差异均有统计学意义(t分别=58.47、437.00,P均<0.05)。结论表达受体型酪氨酸激酶RONΔ160可使NIH-3T3细胞形态明显变化,并显著增强NIH-3T3细胞的生长能力和移动浸润能力。

结肠腺癌中富含半胱氨酸61和血管内皮生长因子表达的关系

目的检测结肠腺癌术后组织中富含半胱氨酸(Cyr)61的表达,分析Cyr61与血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞分化抗原(CD)34标记的微血管密度(MVD)的关系。方法 58例结肠腺癌患者的临床资料及术后蜡块组织作为观察组,48例正常结肠黏膜组织作为对照组,应用免疫组化方法检测组织中Cyr61、VEGF和CD34的表达。结果观察组中Cyr61和VEGF表达的阳性率、MVD值均明显高于对照组,观察组中Cyr61和VEGF表达的阳性率、MVD值均与肿瘤淋巴结转移、侵出肌层和脉管浸润密切相关,Cyr61表达的阳性率与肿瘤分化程度密切相关。观察组中Cyr61和MVD、VEGF和MVD均具有正相关性。结论结肠腺癌术后组织中Cyr61和VEGF高表达,二者均可以在一定期程度上促进CD34阳性血管生成,Cyr61和VEGF高表达均对肿瘤的生物学行为有促进作用。

RON变异体RONA1-70对结肠癌细胞株HT29的抑制作用

目的研究受体型酪氨酸激酶RON的剪切变异体△170对结肠癌细胞株HT29生长和移动浸润能力的抑制作用。方法HT29细胞转染质粒pcDNA3．1-RON△170，建立稳定表达RON△170的HT29-RONA170细胞株；免疫沉淀法检测细胞RON的酪氨酸磷酸化；软琼脂培养法观察RON△170对HT29细胞生长能力的作用；体外跨室趋化运动实验检测RONA170对HT29细胞移动浸润能力的作用。结果成功建立HT29-RONA170细胞株，流式细胞仪胞膜蛋白检测法证明其稳定表达RONA170蛋白；免疫沉淀试验结果显示RONA170能抑制HT29的RON酪氨酸磷酸化；软琼脂生长实验示转染组细胞生长克隆数为33．0±6．0，而未转染组和载体对照组分别为55．7±65和49．3±87（P〈0．01）；体外跨室趋化运动实验结果示转染组穿膜细胞数为231．5±27．6，而未转染组和载体对照组分别为3845±23．3和360．0±156（P〈0.01）。结论受体型酪氨酸激酶RON的变异体RONA170可抑制HT29细胞生长，并显著抑制其移动浸润能力，具有显性抑制变异体特性。

RON变异体RONΔ170对自身酪氨酸磷酸化变异体RONΔ160的显性抑制作用

目的研究受体型酪氨酸激酶RON的变异体RONΔ170对RON的自身酪氨酸磷酸化变异体RONΔ160的作用。方法NIH-3T3和3T3-RONΔ160细胞转染质粒pcDNA3.1-RONΔ170,建立3T3-RONΔ170和3T3-RONΔ160Δ170细胞株;流式细胞仪检测RONΔ170蛋白的表达;免疫沉淀法检测RON的酪氨酸磷酸化;软琼脂培养法观察RONΔ170对3T3和3T3-RONΔ160细胞生长能力的作用。结果成功建立3T3-RONΔ170和3T3-RONΔ160Δ170细胞株,流式细胞仪胞膜蛋白检测法证明其稳定表达RONΔ170蛋白;免疫沉淀试验结果显示RONΔ170能明显抑制RONΔ160的RON酪氨酸磷酸化;软琼脂生长实验示3T3、3T3-RONΔ160、3T3-RONΔ170和3T3-RONΔ160Δ170细胞生长克隆数比较,差异有统计学意义(t=7.93,P<0.05)。结论受体型酪氨酸激酶RON的变异体RONΔ170无酪氨酸磷酸化功能,且具有显性抑制变异体特性。

端粒酶启动子肿瘤靶向TNF相关凋亡诱导配体基因抗大肠癌细胞HT-29的活性研究

目的:探讨在端粒酶(hTERT)启动子驱动下TRA IL基因在大肠癌细胞HT-29的表达及其杀细胞作用。方法:通过腺病毒载体系统将hTERT启动子驱动的TNF相关凋亡诱导配体(TRA IL)基因转入大肠癌细胞HT-29,流式细胞仪检测GFP/TRA IL的表达和HT-29细胞凋亡率。结果:端粒酶启动子驱动的GFP/TRA IL基因和CMV启动子驱动的GFP(绿色荧光蛋白)基因在HT-29内的表达率分别达31.4%和67.0%;GFP/TRA IL基因对HT-29细胞的生长抑制率和凋亡率分别达74.2%和25.8%,与PBS和A d/CMV-GFP比差异都有显著性意义(P<0.05)。结论:端粒酶启动子驱动的GFP/TRA IL融合基因能在大肠癌细胞中有效表达;TRA IL基因对大肠癌细胞HT-29有明显的抑制生长和促凋亡作用。

双吻合器法在低位直肠癌保肛手术中的应用

目的:探讨双吻合器法在低位直肠癌保肛手术中的应用价值。方法:回顾28例使用双吻合器法进行低位直肠癌保肛手术的患者资料并复习相关文献治疗。结果:双吻合器法可以明显缩短手术时间,提高低位直肠癌的保肛成功率,不增加吻合口瘘发生率。结论:双吻合器法简便、可行,并可提高保肛成功率,值得临床推广。

蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药

目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药的作用及其可能的机制。方法:在MG-132和TRAIL蛋白联合处理获得性TRAIL耐药的人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R后,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblotting检测细胞中各种凋亡相关蛋白的表达和JNK激酶的磷酸化水平。结果:MG-132联合TRAIL蛋白处理DLD1-TRAIL/R细胞后,其细胞存活率明显下降(P<0.01),而细胞凋亡率则明显增加(P<0.01)。Westernblotting检测显示,联合处理后DLD1-TRAIL/R细胞中各种凋亡信号分子包括caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bid和PARP蛋白均明显活化,线粒体中细胞色素C和Smac蛋白大量释放;进一步的Westernblotting检测显示,死亡受体DR5和凋亡诱导蛋白Bik的表达水平明显增高,而其他凋亡信号分子包括DR4、Bax、Bak、Bcl-XL、XIAP和Survivin等则无明显改变;检测结果还显示,MG-132能诱导JNK激酶发生磷酸化,使用JNK激酶抑制剂SP600125能够阻断MG-132诱导的DR5表达,但不影响Bik的表达,并且不能减弱MG-132和TRAIL蛋白联合处理对DLD1-TRAIL/R细胞的致凋亡效应(P<0.05)。结论:蛋白酶体抑制剂MG-132能逆转人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R的获得性TRAIL耐药,其机制可能与Bik蛋白上调后启动线粒体凋亡途径有关,与JNK通路激活无关。

端粒酶启动子肿瘤靶向肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因抗人肠癌细胞的活性研究

目的：探讨端粒酶(hTERT)启动子驱动下肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related Apoptosis-inducing Ligand，TRAIL)基因在大肠癌细胞 DLD1 和 HT-29的表达及其杀细胞作用。方法：通 过腺病毒载体系统将 hTERT 启动子驱动的 TRAIL 基因转入大肠癌细胞 DLD1和 HT-29，流式细胞仪检测 GFP/ TRAIL(绿色荧光蛋白和 TRAIL 融合基因)的表达和细胞凋亡率，MTT 法检测细胞生长抑制率。结果：端粒 酶启动子驱动的 GFP/TRAIL 基因和 CMV 启动子驱动的 GFP(绿色荧光蛋白)基因在 DLD1和 HT-29内的表 达平分别达41． 63%和31． 4%；GFP/TRAIL 基因对 DLD1和 HT-29细胞的生长抑制率分别达93． 5%和74． 2%， 凋亡率分别是41． 1%和25． 8%，与 PBS 和 Ad/CMV-GFP 的差异都有显著意义(P＜0． 05) 。结论：端粒酶启 动子驱动的 GFP/TRAIL 融合基因在大肠癌细胞 DLD1和 HT-29中能够有效的表达；TRAIL 基因对大肠癌细 胞 DLD1和 HT-29有明显的抑制生长和促凋亡作用。

城市综合体建筑中的人防地下室设计

城市综合体建筑因丰富的内部功能和多样化的地下空间使其人防地下室设计有别于一般民用建筑,通过从人防地下室选址、防护单元划分、口部布置等方面探讨城市综合体建筑中的人防地下室设计。

直肠孤立性髓外浆细胞瘤及文献回顾

孤立性髓外浆细胞瘤（solitary extramedullary plasmacytoma，SEP）由Schridde在1905年首先报道，临床上非常少见。多发生于淋巴组织较丰富的头颈部。而在直肠的SEP极为罕见。我院1995年2月至2005年10月共收治4例直肠SEP，结合文献回顾，探讨直肠SEP的临床特点、诊断和治疗。

肠造口周围静脉曲张出血一例

患者 男，75岁，12年前因直肠癌行经腹会阴联合切除，乙状结肠永久性造口。3年前肠造口周围反复出血，每次出血量不多，可自行压迫止血；2周前再次出血，压迫无效，到当地医院就诊，输浓缩红细胞2400ml。于2004年10月13日来我院就诊。患者既往糖尿病史3年，长期服用二甲双胍片，血糖控制良好。体格检查：脉搏86次／min，

肛周溃疡性结核一例

患者 男性，73岁，因肛周皮肤溃疡逐渐增大伴疼痛出血半年于2007年6月16日入院。病初为肛旁米粒样结节，后增大破溃伴疼痛，形成溃疡创面。皮损有黄色稀薄脓液渗出，并增大至占据肛周右侧，边缘清晰。外院活检病理为“鳞状上皮不典型增生”，被诊为“湿疹”、“感染性皮炎”。经局部清创、外用皮质激素类药物及口服抗生素治疗无效。发病来无畏寒、发热、乏力、咳嗽及腹痛、腹泻、消瘦等症状，

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因对肝癌细胞杀伤作用及旁观者效应研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)基因在诱导肝癌细胞凋亡时是否存在旁观者效应 ,以及旁观者效应的可能机制。方法 构建表达TRAIL基因的双腺病毒载体系统Ad/GT TRAIL +Ad/PGK GV16 ,通过 2 93包装细胞产生的病毒上清液将TRAIL基因转入肝癌细胞SMMC772 1细胞中 ,RT PCR检测TRAIL基因的表达 ,以MTT法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率 ;不同比例混合培养SMMC772 1/TRAIL和SMMC772 1细胞 ,检测混合细胞生长抑制率来评价TRAIL基因的旁观者效应 ,并以滤去细胞成分的转染细胞培养液培养未转染细胞 ,观测可溶性因子在TRAIL基因旁观者效应中的作用。结果 TRAIL基因对SMMC772 1细胞的生长抑制率与PBS、LacZ基因和Bax基因比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;SMMC772 1细胞的凋亡率 ,TRAIL基因与PBS、LacZ基因和Bax基因比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;混合细胞的生长抑制率 ,以SMMC772 1/TRAIL占 0 %时为 0 ,占 5 %时为 15 .9% ,占 2 5 %时为 6 7.0 % ,占 5 0 %时为 80 .2 % ,占 10 0 %时为 87.7% ;以PBS对SMMC772 1的生长抑制率为 0 ,则滤去细胞成分的转染细胞培养液对SMMC772 1的生长抑制率为 4 % ,两者差异无显著性。

直肠癌种植转移至肛瘘

患者男,61岁,2006年6月囚肛周疼痛流脓于当地医院就诊，诊断为“肛瘘”，行“肛瘘切除术”，术后病理报告示：中分化腺癌。患者当时拒绝进一步检查治疗，肛瘘切口术后5周愈合。2007年10月，因便血伴大便次数增多半年来我院，大便每天7～8次，旱糊状，有时伴少量鲜红血便；无里急后重，无肛周红肿流液。体检：肛门左前陈旧质软手术疤痕．直肠指检示：距肛6cm内未及肿块，指套无染血。

直肠基底样细胞癌一例

患者男，52岁，因“大便性状改变伴里急后重，腹痛1d”于2006年9月16日入院。近2个月大便变细，伴有暗红色血，次数增多，多时6～7次／d，体重下降，入院前1d上腹部剧烈疼痛，无放射痛，无恶心呕吐等，自觉直肠后方针刺样疼痛明显，否认肝硬化门静脉高压症史等。体检：生命体征平稳，心肺（-），皮肤巩膜轻度黄染，腹软，右上腹压痛明显．有轻微反跳痛，肝脏肋下4指，表面可及大小不等结节。直肠指检未及肿块，直肠后方骶前可及质硬结节，大小约4cm×4cm，有压痛，直肠膀胱窝触诊不满意，指套未染血。

端粒酶启动子肿瘤靶向基因抗大肠癌的研究

目的探讨端粒酶 (hTERT)启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducingligand ,TRAIL)基因在大肠癌细胞DLD1的表达及肿瘤杀伤作用。方法通过腺病毒载体系统将hTERT启动子驱动的TRAIL基因转入大肠癌细胞DLD1,流式细胞仪检测GFP/TRAIL的表达和DLD1细胞凋亡率。结果端粒酶启动子驱动的GFP/TRAIL基因和CMV启动子驱动的GFP(绿色荧光蛋白 )基因在DLD1内的表达率分别达 4 1 6 3%和 5 4 0 7% ;GFP/TRAIL基因对DLD1细胞的生长抑制率和凋亡率分别达 93 5 0 %和 5 6 97% ,与PBS和Ad/hTERT LacZ的差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论端粒酶启动子驱动的GFP/TRAIL融合基因在大肠癌细胞中能够有效地表达 ;TRAIL基因对大肠癌细胞DLD1有明显的抑制生长和促凋亡作用。

降结肠癌精索转移一例

患者男，66岁。2008年2月因“大便次数增多3年，反复便中带血1年”入院，肠镜提示“（距肛门45cm）降结肠肿物”。术前检查未见肿瘤转移，行“左半结肠癌根治术”，术中见降结肠近脾曲处肿块，约7cm×8cm大小，侵出浆膜，侵犯邻近空肠和横结肠，周围系膜可及多枚肿大淋巴结。术后病理报告：溃疡型，黏液腺癌，穿透浆膜层，累及小肠壁肌层，伴淋巴结转移（2／35），两侧切缘阴性。