海洋微生物代谢产物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性及抑制类型

[目的]了解海洋微生物代谢产物对α-葡萄糖苷酶抑制剂的能力及其抑制类型,以发现糖尿病等与糖代谢有关的疾病的新型治疗药物。[方法]42株海洋微生物经发酵和乙酸乙酯提取,获得粗提物,用比色法对粗提物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性和抑制剂动力学测定。[结果]从中发现6株菌株的代谢产物具有不同程度的α-葡萄糖苷酶抑制活性;其中菌株Act09和Act18抑制活力较强,其IC50分别为2.51μl(含粗提物276.10μg)和1.48μl(含粗提物118.4μg)。菌株Act09产生的是反竞争性抑制物,而菌株Act18产生的是非竞争性抑制物。[结论]海洋微生物代谢产物可能含有新类型的α-葡萄糖苷酶抑制剂。

淡豆豉多糖的提取及其清除自由基的活性研究

[目的]对淡豆豉中多糖进行分离提取,并研究其体外清除自由基的活性,为抗氧化剂的筛选提供科学依据。[方法]利用Fenton反应和邻苯三酚体系研究淡豆豉多糖对羟自由基和超氧阴离子的清除作用。[结果]淡豆豉多糖对化学体系产生的羟自由基和超氧阴离子有清除作用。[结论]淡豆豉多糖具有抗氧化活性。

人红细胞摄入Eu(Cit)_2^(3-)阴离子通道机制的研究

研究了Eu(Cit) 2 3- 进入人红细胞的机制。在人红细胞与含不同浓度的Eu(Cit) 2 3- 的等渗缓冲液温育后 ,用ICP MS测定胞浆及膜中Eu的含量 ,并考察了阴离子通道抑制剂DIDS、温度及pH的影响 ,制备了人红细胞膜正面向外囊泡 (ROV)和内翻外囊泡 (IOV)并研究了它们对Eu(Cit) 2 3- 的摄取及DIDS的影响。结果表明 ,Eu(Cit) 2 3- 可以与细胞膜结合并进入红细胞内 ,DIDS强烈抑制红细胞对Eu(Cit) 2 3- 的摄入 ;温度、pH对细胞摄入有显著影响 ;ROV和IOV可以摄入Eu(Cit) 2 3- ,但DIDS只抑制ROV的摄入 ,对IOV的摄入无影响。Eu(Cit) 2 3- 进入人红细胞具有阴离子通道机制的各种特征。阴离子通道是稀土柠檬酸络合物Ln(Cit) 2 3- 进入红细胞的途径之一。

HPLC法测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E的含量

[目的]建立刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E含量的测定方法。[方法]采用高效液相色谱(HPLC)法测定刺五加苷B和刺五加苷E的含量。[结果]在同一色谱条件下,刺五加苷B在2.76～43.92μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9998,回收率98.7%,RSD为1.8%;刺五加苷E在2.34～37.52μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9996,回收率为101.9%,RSD为2.0%。[结论]该分析方法简便、准确、重现性好,可用于刺五加药材中刺五加苷B和刺五加苷E的含量测定。

稀土离子及其柠檬酸配合物诱导人红细胞的溶血作用

目的 :研究稀土离子Ln3 +及其柠檬酸根配合物 [Ln(Cit) 2 ]3 - 诱导人红细胞的溶血作用。方法 :将不同浓度的Ln3 +或 [Ln(Cit) 2 ]3 - 与人红细胞温育后 ,用分光光度法测定离心上清液中的血红蛋白浓度 ,计算相对溶血率H %。用外推法确定临界溶血浓度cH0 。结果 :14种稀土离子对人红细胞的临界溶血浓度cH0 已经确定 ;发现 [Ln(Cit) 2 ]3 - 的H %～c关系曲线为非对称的“钟”型曲线 ,结论 :稀土离子Ln3 +具有较低的临界溶血浓度 ,这说明Ln3 +与红细胞有较强的作用及细胞毒性。 [Ln(Cit) 2 ]3 - 诱导的人红细胞相对溶血率H %与稀土离子在介质中的物种分布有关。

淡豆豉多糖的提取工艺研究

[目的]研究淡豆豉多糖的最佳提取工艺。[方法]以多糖提取率为指标,采用正交设计实验,以加水量,提取时间,提取温度,提取次数为因素,考察各因素对多糖提取率的影响。[结果]最佳提取工艺为回流提取0.5h,煎煮2次,温度100℃,加水12倍量。[结论]优选得到的工艺简单、可行,可用于淡豆豉多糖的提取。

Sm^(3+)及其柠檬酸配合物与人红细胞的相互作用

1目的 研究了 Sm3+ 及其柠檬酸配合物 [Sm(Cit) 2 ] 3- 与人红细胞的相互作用。 2方法 利用分光光度法测定了 Sm3+ 及其柠檬酸配合物 [Sm(Cit) 2 ] 3- 与人红细胞相互作用的相对溶血率。 3结果 稀土离子和人红细胞的作用曲线与其柠檬酸配合物的作用曲线不同。 4结果 溶血与浓度和物种有关。

磷酸苯丙哌林分散片的稳定性研究

①目的 观察磷酸苯丙哌林分散片的稳定性。②方法 通过影响因素试验、加速试验和室温留样试验,观察其质量变化情 况。③结果 磷酸苯丙哌林分散片经过上述各种试验后,其质量未见明显改变。④结论 磷酸苯丙哌林分散片室温放置2年质量稳定。

刺五加鲨烯合酶基因家族两成员的表达及其与皂苷含量的关系

为了探明刺五加鲨烯合酶(SS)基因家族2成员对皂苷含量的作用机制,以actin为内参基因,利用real time PCR技术,分析刺五加不同生长发育时期、不同器官及茉莉酸甲酯(MeJA)处理对SS1、SS2基因表达及皂苷含量的影响。结果表明:刺五加SS基因家族的SS1和SS2在整个生长期和各器官中均有表达,且表达量差异显著(P<0.05),其中,在萌芽期两者的表达量差异最大。SS1在叶片、叶柄和根器官中的表达量显著高于SS2的表达量(P<0.05)。MeJA处理可显著提高SS1和SS2基因的表达量。刺五加SS1的表达量与皂苷含量间的相关系数低,未达显著水平。SS2的表达量与皂苷含量呈显著的正相关关系(P<0.01)。SS2表达量的高低决定了皂苷含量的高低,是刺五加中三萜皂苷生物合成中的关键酶。

刺五加鲨烯合酶基因的表达及其对皂苷含量的影响

为了了解刺五加鲨烯合酶基因(squalene synthase,SS)的表达特点及其对刺五加中皂苷含量的影响情况,以GAPDH基因为内参照基因,采用实时定量PCR技术,分析了SS基因在刺五加不同生长发育时期不同器官中的表达量及茉莉酸甲酯对其表达的影响情况;还利用SPSS 17.0软件分析了SS基因的表达量与刺五加中皂苷总含量的相关性。结果表明,在刺五加的整个生长期中,SS基因的表达量呈现出"低—高—低—高—低"的变化趋势:萌芽期(4月26日)该基因的表达量最低,而盛花期(6月26日)该基因的表达量最高,为萌芽期的3.11倍;SS基因在刺五加根中的表达量显著高于茎、叶和叶柄中的表达量(P<0.05),其在茎中的表达量最低,仅为根中表达量的51.88%。茉莉酸甲酯可提高SS基因的表达量,但其与对照组的差异未达到显著水平。刺五加中的皂苷总含量与SS基因的表达量间呈现出同升同降的变化趋势,存在极显著的正相关关系(P<0.01)。文中初步判定,鲨烯合酶是刺五加皂苷生物合成的关键酶。

刺五加内生真菌对刺五加苷B和E含量的影响

[目的]分析内生真菌对刺五加中刺五加苷B、E含量的影响。[方法]以分离自不同产地的刺五加内生真菌为试材,以伤口法回接,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]结果表明,25株内生真菌中有16株为致病菌,9株为非致病菌。其中来自产地吉林省梅河口市刺五加的菌株P116-1a、P109-4、P116-1b和P312-1均不同程度地提高了刺五加茎、根茎中刺五加苷B、E的含量。[结论]刺五加内生真菌可通过产生的代谢物调节刺五加苷B、E的含量。

不同性别刺五加皂苷合成酶基因表达及其对皂苷含量的影响

为了解不同性别刺五加中3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶(mevalonate diphosphate decarboxylase,MDD)和法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的表达特点及其对皂苷含量的影响,以GAPDH基因为内参照基因,通过实时定量PCR技术分析了不同性别类型刺五加中HMGR、MDD和FPS的表达量,并利用SPSS 17.0软件分析了其与刺五加总皂苷含量的相关性。结果表明,HMGR、MDD和FPS基因的最高表达量和皂苷含量的最大值均出现在短花丝类型刺五加中,中花丝类型的次之,长花丝类型的最低。HMGR、MDD和FPS的表达量和皂苷含量间存在显著正相关关系。HMGR、MDD和FPS是决定不同性别刺五加中皂苷含量高低的关键酶。

利用随机扩增多态性DNA技术分析刺五加的遗传多样性

目的从DNA水平对收集的4个产地的刺五加进行遗传多样性分析，为更好地开发利用刺五加资源奠定基础。方法随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析遗传多样性，UPGMA进行聚类分析。结果10个随机引物扩增得到72条片段，多态性位点比率为88．89％。不同产地间的遗传相似系数在0．4693—0．7851之间，均值为0．6293，同一产地不同居群间的遗传相似系数在0.5630-0.9542之间，均值为0.7644。不同产地刺五加之间的遗传多样性高于同一产地不同居群的个体，其中产地穆棱的刺五加与产地和龙、本溪、尚志之间的相似性较低，单成一支。产地之间的相似性与地理距离呈不完全相关性。结论刺五加种群内部具有较高的遗传多样性，利用RAPD技术分析刺五加的遗传多样性是可行的。

不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定

目的建立刺五加中刺五加苷E含量的测定方法,并比较不同产地的刺五加中刺五加苷E含量,为进一步研究不同品系的刺五加中刺五加苷E的含量与其遗传学的关系奠定基础。方法刺五加苷E的提取采用超声提取法;选用YMCODS色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),检测波长220 nm,以0.1%磷酸水溶液-乙腈(89∶11)为流动相,体积流量1.0ml/min。结果超声波提取法对刺五加苷E提取率稍低于溶剂提取法,但操作简便,耗时较短。刺五加苷E的线性范围为0.625～10.004μg(r=0.999 92);平均回收率为100.64%,RSD为2.97%。结论建立的刺五加苷E提取和测定方法适合于快速准确地分析大量样品。

刺五加导管特征及其与刺五加苷B·E含量相关性的分析

[目的]分析不同产地刺五加导管特征及其与刺五加苷B、E含量的相关性。[方法]以不同产地刺五加的1年生根、茎为试材,石蜡切片法制片,测定导管周长、面积,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]刺五加根中导管平均面积、周长分别为986.89μm2、141.08μm,茎中导管平均面积、周长分别为362.48μm2、88.46μm,不同产地刺五加根、茎中导管的周长、面积差异显著。刺五加茎中刺五加苷E含量与茎中导管面积呈显著相关。[结论]导管面积、周长可以作为鉴定刺五加产地来源的指标,茎中导管面积可作为茎中刺五加苷E含量的早期鉴定指标。

体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究

目的探讨2,4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的影响,建立有利于刺五加苷B、E积累的刺五加体外培养体系。方法将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体胚,HPLC法测定培养物中刺五加苷B、E含量和培养物质量,考察培养物类型、培养基种类和激素对刺五加苷B、E生产的影响。结果体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量,但体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的能力优于愈伤组织。2,4-D对刺五加苷B、E含量影响较小,仅改变了培养物的质量。MS培养基处理中培养物的刺五加苷B、E产量优于1/2MS培养基。结论刺五加体外培养物可以生产刺五加苷B、E,其产量取决于培养物类型、培养基种类和2,4-D浓度。