抑郁症模型大鼠学习记忆能力变化研究

为探讨抑郁症发生发展过程中学习记忆能力的变化模式及其可能机制,分别采用21天慢性非预见性刺激法和嗅球切除法建立的抑郁症模型大鼠,运用旷场行为实验(open-field behavior)检测大鼠主动性活动能力,用Morris水迷宫法检测大鼠空间学习记忆能力,HPLC-UV法测定大鼠血清皮质醇含量,电生理法记录海马CA1区LTP与LTD,观察海马神经元的突触可塑性。结果显示:与对照组相比,两种模型的自主活动性、空间探索兴趣和学习能力都明显降低,而记忆的反馈功能没有明显的变化。同时,两种模型大鼠海马神经细胞的突触可塑性显著下降,血清皮质醇的含量则明显上升。提示两种建模方法均导致大鼠产生抑郁症状和学习能力障碍,但对记忆反馈功能无明显影响。

实现人源FGF-21高效可溶性表达的两种策略

采用分子伴侣协助蛋白表达的方法及乳糖自诱导的策略,实现人源FGF-21在大肠杆菌中的高效可溶性表达.结果显示,在分子伴侣Tig的协同表达下,融合蛋白TrxA-FGF-21可溶性达到92.4%.采用乳糖自诱导策略,融合蛋白TrxA-FGF-21表达量达到17.4%左右,菌体OD600达到12.4,可溶性TrxA-FGF-21相对产量是IPTG诱导发酵条件的5.5倍.该方法制备的重组FGF-21在C57BL/6小鼠体内具有降低血糖的生物学活性,甘油三酯水平与对照组相比也表现极显著差异(P<0.01).

γ-聚谷氨酸-天冬氨酸聚合物的合成表征及性质

利用微生物发酵制备γ-聚谷氨酸,降解得小分子γ-聚谷氨酸,将天冬氨酸接入小分子γ-聚谷氨酸,得γ-聚谷氨酸-天冬氨酸聚合物(GAP460)。核磁共振、红外光谱、差热扫描量热分析(DSC)等方法表征GAP460;常规方法检测GAP460的结构稳定性,免疫原性,急性毒性及血液参数值等。结果表明,成功制备了γ-聚谷氨酸-天冬氨酸聚合物,其在中性、常温及4℃条件下结构稳定;GAP460免疫小鼠,初次免疫后八周测得抗体滴度为1∶20,显示GAP460是低免疫原性;急性毒性、血液参数等生物相容性指标显示该材料无毒。

聚谷氨酸天冬氨酸顺铂复合物的体内毒性和抑瘤活性

目的:研究聚谷氨酸天冬氨酸顺铂复合物(PGA-Asp-CDDP)的体内毒性和抑瘤活性。方法:采用透析法、MMT法、昆明鼠和BALB/c裸鼠SMMC-7721肝癌模型检测PGA-Asp-CDDP的缓释作用,细胞毒性,体内毒性和抑瘤活性。结果:PGA-Asp-CDDP的10 h时顺铂累计释放率为32%,与人肝癌细胞SMMC-7721孵育72 h的IC50为(45.5±10.3),累计给药为12 mg·kg-1时体内毒性显著下降,并且对肝癌模型有显著抑瘤效果(P<0.01)。结论:聚谷氨酸天冬氨顺铂复合物有望成为治疗肝癌的一种安全有效的药物。

人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达优化

考察了在大肠杆菌中自诱导表达人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白的可行性,并对自诱导培养条件及培养基成分进行优化,以提高蛋白产量。实验结果表明,最优培养基成分为蛋白胨19.17g/L,酵母膏9.59g/L,Na2HPO45.72g/L,KH2PO45.48g/L,(NH4)2SO42.66g/L,NaCl3.33g/L,甘油2%(V/V),葡萄糖0.68g/L,乳糖6.33g/L,MgSO40.24g/L。在温度33°C、接种量1%、pH7、装瓶量20mL/100mL培养条件下,用该最优培养基自诱导表达人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白的产量可达348.6mg/L。

人酪酪肽及其衍生物的克隆、表达及活性测定

酪酪肽(peptide tyrosine tyrosine,PYY)是存在于机体肠道的肽类激素,有PYY1-36和PYY3-36两种形式,后者可以降低个体食欲并减少食物摄入。分别通过人工合成基因和PCR定点突变的方法,得到PYY3-36衍生物PYY3-36-G ly37及PYY3-36的基因,然后克隆到pET32a(+)表达载体中,转化大肠杆菌并进行诱导表达。通过亲和层析得到融合蛋白,经肠激酶酶切和二次亲和层析得到目的多肽。在昆明鼠体内检测二者生物活性,结果显示剂量为800μg/kg时PYY3-36及PYY3-36-G ly37均可抑制昆明鼠的摄食,且抑制作用可达9h,而PYY3-36-G ly37组的平均抑制率可达50%,明显高于PYY3-36。