制备性SDS—PAGE法纯化人重组IL—3

利用制备性SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)进行人重组白细胞介素—3(IL—3)的纯化,回收率可达84.3%,纯度90%以上,保持高度生物活性,并有方法简便,实验周期短的优点,已小批量供应国内实验室进行人IL—3的体外研究.

人白细胞介素－9cDNA的PCR扩增及其在大肠杆菌的表达

利用ＰＣＲ技术从人外周血Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库中扩增出人ＩＬ－９的ｃＤＮＡ，将其连入大肠杆菌表达载体后，可在大肠杆菌高效表达出人重组ＩＬ－９融合蛋白，表达量占菌体蛋白的２５％左右，有明显的刺激正常人骨髓细胞集落形成的活性。

高效表达非融合蛋白的大肠杆菌质粒载体的构建

利用基因重组技术构建了高效表达非融合蛋白的大肠杆菌质粒载体pKPL系列。它们含有PL启动子、MS-2聚合酶SD顺序、起始密码、多克隆点及rrnB终止子顺序。利用pKPL-2D构建的PL-CAT-3质粒高效表达氯霉素转乙酰酶(Cat),表达量占菌体蛋白的30％以上。用pKPL质粒还表达出有生物活性的人白细胞介素-3和人粒单集落刺激因子。

用负向选择增富法筛选人GM-CSF cDNA

用负向选择增富法成功地获得人GM-CSF cDNA克隆,筛选阳性率提高至1/170。用该cDNA转染的CDS-7细胞上清可测出集落刺激活性。经亚克隆化后在大肠杆菌表达出重组人GMCSF,可维持细胞株BMU-2的生长并促进急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者骨髓细胞的集落形成。

高效分离人白细胞介素-2cDNA克隆的新技术

白细胞介素—2是免疫应答过程中由T细胞释放的一种淋巴因子,具有较广泛的生物学作用。本文报告采用负向选择增富法处理人外周血淋巴细胞cDNA文库,用一种新型非放射标记技术制成地高辛素-dUTP-鼠白细胞介素-2cDNA片段探针,从中筛选到2个阳性克隆,使阳性率提高33倍。经限制性内切酶谱分析,所获克隆与公布的人白细胞介素-2cDNA顺序相符。该cDNA转染CoS-7细胞后表达的重组人白细胞介素-2可维持小鼠白细胞介素-2依赖株FI-2生长。