大黄对小鼠水通道蛋白3、4及血管活性肠肽的影响

灌胃大黄建立小鼠腹泻模型,通过测定小鼠血清中和结肠组织中水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)、水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)及血管活性肠肽(vasoactive intestine polypeptide, VIP)的含量变化,探究大黄致泻下的作用机制。选取40只健康昆明种小鼠,随机分为4组,每组10只,B、C、D组灌胃不同浓度的大黄混悬液(B组1 g/kg、C组2 g/kg、D组4 g/kg),A组给予等体积的生理盐水,连续灌胃5 d。采用ELISA、免疫组织化学法和荧光定量PCR检测血清及结肠组织中AQP3、AQP4、VIP的含量及表达情况。结果显示,大黄组小鼠体重显著减轻,采食量减少,随给药剂量的增加,腹泻逐渐加剧,C组、D组小鼠血清中AQP3、AQP4含量较A组显著降低,结肠组织中AQP3、AQP4与VIP表达量较A组显著降低(P<0.05),与B组无明显差异。结果表明,大黄可通过降低AQP3、AQP4表达量来影响结肠对水的吸收,增加肠道含水量,通过降低VIP表达量使肠蠕动增加,从而使小鼠排便增加,引起腹泻。

母鼠孕期和哺乳期连续染毒双酚A对子代雄鼠睾丸发育的影响

旨在探究双酚A (BPA)对子代雄鼠睾丸发育的影响。本研究将8周龄体重18～22 g的SPF级母鼠随机分为7组,每组4个重复,每个重复5只,A组每天给予普通蒸馏水,B组每天饮水给予0.05 mg·kg^(-1) BPA,C组每天饮水给予0.5 mg·kg^(-1) BPA组,D组每天饮水给予5 mg·kg^(-1) BPA,E组每天饮水给予10 mg·kg^(-1) BPA,F组每天饮水给予20 mg·kg^(-1) BPA,G组每天饮水给予50 mg·kg^(-1) BPA。F0代母鼠自怀孕起直至F1代子鼠断奶止饮水染毒BPA,F1代雄鼠于断奶(21日龄)处死。ELISA结果显示,母鼠染毒BPA剂量5 mg·kg^(-1)以上时,子代血清和睾丸组织BPA含量显著增加(P<0.05)。睾丸器官指数测定结果证明,染毒BPA剂量大于等于20 mg·kg^(-1)可导致子代雄鼠睾丸指数显著增大(P<0.05)。H&E染色显示,母鼠染毒BPA剂量大于等于10 mg·kg^(-1)可导致睾丸生精小管萎缩,小管间隙变大。彗星试验结果证明,染毒BPA大于等于5 mg·kg^(-1)可使子代睾丸细胞核DNA损伤显著上升(P<0.05)。免疫组化结果显示,母鼠染毒BPA剂量大于等于20 mg·kg^(-1)时子代睾丸雄激素受体(AR)表达量显著减少(P<0.05)。转录组测序结果显示,母鼠染毒50 mg·kg^(-1)BPA后子代雄鼠睾丸剪切体代谢通路U5 snRNA亚基编码基因Snrnp40上调,剪切体通用蛋白组件编码基因Hnrnpu下调,导致mRNA转录后修饰第一步受阻,荧光定量PCR结果与转录组测序结果一致,证实了转录组结果。结果表明,母鼠暴露于低剂量BPA可以引起子代睾丸发育异常,其分子机制可能与剪切体进行mRNA转录后修饰第一步反应受阻有关。

桃金娘提取物体外抑菌试验

检测桃金娘不同部位水提物及醇提物对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用。采用琼脂扩散药敏法测定抑菌圈直径,微量倍比稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)。结果显示,桃金娘叶、果的醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌和沙门菌均有一定的抑菌效果,并且醇提液效果优于水提液,其中桃金娘叶醇提液的抑菌效果最好,对金黄色葡萄球菌和沙门菌的MIC分别为0.125 g/mL、0.25 g/mL。桃金娘叶、果的醇提液和水提液对大肠杆菌均无抑菌效果。

马齿苋提取物对热应激小鼠胃肠道运动功能及抗氧化能力的影响

为了探讨马齿苋提取物对热应激小鼠胃肠道运动功能及抗氧化能力的影响,将32只昆明系小鼠随机分为4组,包括对照组、热应激组、马齿苋水提组、马齿苋醇提组。马齿苋水提组和马齿苋醇提组分别灌服2 g/mL的水提马齿苋和醇提马齿苋0.2 mL/20 g·bw,其余两组灌服生理盐水,0.2 mL/kg·bw,连续灌胃7 d后,除对照组外,其余各组置于(40±1)℃恒温箱内热应激1 h,连续热应激7 d,应激期间上午持续给药。观察马齿苋对小鼠体重和体温变化、肠推进率和胃排空率、免疫器官指数、血清中抗氧化指标的影响。结果显示,马齿苋提取物可使小鼠在热应激后体温下降速度加快,且醇提物效果优于水提物;可以显著提高小鼠的胃排空率及小鼠的抗氧化能力。表明马齿苋提取物可有效改善热应激对小鼠造成的胃肠道运动功能的降低,并可显著提高小鼠的抗氧化能力。

甘草多糖缓解妊娠期暴露代森锰锌致仔鼠肾脏损伤的保护作用

为了探讨甘草多糖(Glycyrrhiza polysaccharide,GP)对妊娠期暴露代森锰锌(mancozeb,MCZ)致45日龄(d)仔鼠肾脏损伤的保护作用。将50只孕0 d昆明小鼠随机分为5组,空白对照组(K组)灌服生理盐水,MCZ对照组(M组)早上灌服150 mg/kg的MCZ、晚上灌服生理盐水,GP低(D组)、中(Z组)、高(G组)剂量组早上灌服150 mg/kg的MCZ、晚上分别灌服50,100,200 mg/kg的GP。在仔鼠45 d时处死,收集血液和肾脏,观察肾脏组织形态变化;计算肾脏指数;检测血清中肾脏损伤经典指标肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平,肾脏组织中抗氧化相关因子总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,铁死亡相关因子谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、铁死亡抑制蛋白1(FSP1)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白水平,氧化相关因子NADPH氧化酶4(NOX4)、核转录因子NF-κB(NF-κB)p65 mRNA转录水平变化。结果显示,与MCZ组相比,GP能降低血清中Cr、BUN和肾脏组织中MDA、TGF-β1蛋白、NOX4 mRNA、NF-κB p65 mRNA水平;升高肾脏组织中肾脏指数、T-AOC、SOD、GSH-Px、GPX4 mRNA、GPX4蛋白、FSP1蛋白水平。结果表明,GP可以提高妊娠期暴露MCZ诱导的45 d仔鼠的抗氧化能力和对铁死亡的耐受力,从而减轻肾脏损伤对机体带来的影响,其中以GP中剂量组(100 mg/kg)对45 d仔鼠肾脏损伤的保护作用最明显。

母子两代连续双酚A暴露对子鼠睾丸发育的影响

双酚A(BPA)是一种无处不在的环境雌激素,长期暴露或接触会影响动物的生殖功能。为了探究持续低剂量暴露BPA对雄鼠生殖器官和功能的影响,将妊娠0 d孕鼠随机分为7组,每组20只,分别为空白对照组,0.05 mg·kg^-1·d^-1 BPA组,0.50 mg·kg^-1·d^-1 BPA组,5.00 mg·kg^-1·d^-1 BPA组,10.00 mg·kg^-1·d^-1 BPA组,20.00 mg·kg^-1·d^-1 BPA组, 50.00 mg·kg^-1·d^-1 BPA组。自母鼠怀孕0 d起持续饮水染毒BPA至哺乳期结束,仔鼠21 d断奶后直接以继续饮水染毒至45日龄性成熟期,共染毒63 d。子代雄鼠于45 d处死。结果显示,染毒BPA剂量大于等于10.00 mg·kg^-1·d^-1时雄鼠血清BPA含量显著高于空白对照组(P<0.05),染毒BPA剂量大于等于20.00 mg·kg^-1·d^-1时睾丸组织BPA含量显著高于空白对照组(P<0.05)。H&E染色和睾丸器官指数测定结果显示染毒BPA剂量10.00 mg·kg^-1·d^-1以上导致睾丸生精小管萎缩,小管间隙变大,50.00 mg·kg^-1·d^-1以上导致子代雄鼠睾丸指数显著增大(P<0.05)。染毒BPA剂量在0.50 mg·kg^-1·d^-1以上时睾丸精子活力与密度相较于空白对照组均显著减少(P<0.05),而各染毒组精子畸形率均显著大于空白对照组(P<0.05)。染毒BPA剂量在0.50 mg·kg^-1·d^-1以上时睾丸生殖细胞核DNA损伤显著大于空白对照组(P<0.05)。染毒BPA剂量在0.05 mg·kg^-1·d^-1以上时睾丸雄激素受体(AR)表达量显著减少(P<0.05)。转录组测序结果显示染毒BPA可导致雄鼠睾丸剪切体U1亚基蛋白质C合成基因Snrpc和剪切体通用载体组件编码基因Hnrnpu均显著下调,使得mRNA的转录后修饰第一步即无法进行,剪切体功能受阻可能是BPA影响睾丸发育的重要原因。荧光定量PCR证实了转录组结果,并进一步证明了Hnrnpu对BPA的敏感性大于Snrpc。

5种中药多糖通过Keap1-Nrf2通路缓解代森锰锌氧化和卵巢毒性

为了探究中药多糖对代森锰锌(MCZ)诱导雌性小鼠氧化及卵巢毒性的缓解作用,将70只小鼠随机分为7组,每组10只。空白组每天分2次灌服0.2 mL去离子水,MCZ模型组每天灌服100 mg/kg MCZ和0.2 mL去离子水,中药多糖处理组每天灌服100 mg/kg MCZ及分别灌服200 mg/kg枸杞多糖(LBP)、黄芪多糖(APS)、甘草多糖(GP)、菟丝子多糖(CCP)和山药多糖(CYPS)。用药30 d后处死,收集血液、子宫和卵巢。统计子宫和卵巢指数;HE染色观察卵巢组织形态学变化;可见光法、TBA法和WST-1法分别检测血清中过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;放射性免疫法检测血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测子代雌鼠卵巢内雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)含量;实时荧光定量PCR检测卵巢内NQO1、GcLc、Gstt2、HO1和GPx2 mRNA转录水平。结果显示,MCZ可以降低CAT、SOD活力和MDA、FSH、LH含量及ERα、ERβ表达,升高E2含量,下调NQO1、GcLc、Gstt2、HO1 mRNA转录水平,上调GPx2 mRNA转录水平;LBP、APS、CCP、CYPS和GP可在一定程度上缓解MCZ的影响。本研究表明,MCZ可通过Keap1-Nrf2通路对小鼠造成损伤,而中药多糖干预Keap1-Nrf2通路缓解MCZ毒性,其中GP效果最佳。

胎儿期至性成熟期持续暴露双酚A影响雌鼠卵巢核糖体功能

双酚A(BPA)是一种常见的环境类雌激素,对动物产生生殖毒性。为了探究长期双酚A暴露对卵巢发育的影响,将孕0 d昆明小鼠(8周龄,体质量25~30 g,SPF级)随机分为7组,每组4个重复,每个重复5只。A组每天饮水给予蒸馏水(0.00 mg/kg BPA)作为对照组,B组每天饮水给与0.05 mg/kg BPA,C组每天饮水给与0.50 mg/kg BPA,D组每天饮水给与5.00 mg/kg BPA,E组每天饮水给与10.00 mg/kg BPA,F组每天饮水给与20.00 mg/kg BPA,G组每天饮水给与50.00 mg/kg BPA。BPA饮水自母鼠孕0 d到仔鼠45 d性成熟,共计63 d。结果显示,BPA剂量≥0.50 mg/kg时,仔鼠血清和卵巢中BPA含量显著增加(P<0.05),但仔鼠卵巢器官指数均无显著变化和病理损伤。TUNEL结果显示,染毒BPA≥10.00 mg/kg时卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡(P<0.05)。当染毒BPA剂量≥0.50 mg/kg时仔鼠卵巢ERα表达量显著增多(P<0.05);低剂量BPA (0.05~10.00 mg/kg)显著降低ERβ表达,较高剂量(20.00~50.00 mg/kg)显著增加ERβ表达。转录组测序结果显示,BPA影响了卵巢核糖体通路,其中核糖体蛋白L21、Sa表达基因显著下调,核糖体蛋白L3、S2、L7a、S26、L26表达基因显著上调。这些基因的改变可能会导致胚胎生殖系统发育受阻和卵巢早熟。荧光定量PCR验证了转录组结果。本研究证实长期低剂量BPA暴露不会导致性成熟期小鼠卵巢器官指数变化和明显病理损伤,但会导致卵巢细胞凋亡和ER表达异常,BPA的生殖毒性可能与核糖体功能蛋白表达异常有关。

AILTV临床分离株鸡肝癌细胞培养特性及黏附因子测定

禽传染性喉气管炎病毒(avian infectious laryngotracheitis virus,AILTV)引起鸡上部呼吸道传染病,危害养鸡业的发展。2017年冬季至2018春季,本实验室从河北地区各发病鸡场病死鸡分离鉴定得到8株AILTV,分别编号为AILTV-HB-1~AILTV-HB-8。将病毒进行鸡胚传代后,与标准强毒王岗株和河北地区使用的2株疫苗分别接种于鸡肝癌细胞(LMH),检测LMH增殖速度。ELISA方法检测鸡整合素和鸡层黏连蛋白/板层素(LN),分析二者与AILTV致病力关系。结果显示:所分离的鸡传染性喉气管炎病毒中AILTV-HB-2不会导致LMH细胞贴壁力下降,其他毒株可导致LMH细胞贴壁力下降。AILTV-HB-1可导致LMH细胞LN蛋白降解,从而降低LMH细胞贴壁力,使其游离性增加,增强其增殖速度,推测温和型AILT病症气管中的干酪样堵塞物的产生可能与病毒降解LN有关。

妊娠期暴露代森锰锌对子代小鼠肝脏的损伤作用

为探究母鼠妊娠期暴露代森锰锌(mancozeb,MCZ)对子代小鼠的肝脏损伤作用,将50只妊娠母鼠随机分为5组,每组10只。孕1~17 d,对照组母鼠每天灌服0.2 mL去离子水,其余4组每天分别灌服0.2 mL不同剂量(50,100,150,200 mg/kg)的MCZ。在仔鼠出生21 d时,每组随机选取10只仔鼠,麻醉后处死,收集血液和肝脏,统计仔鼠肝脏指数;组织病理学观察子代小鼠肝脏形态学变化;检测子代小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测子代小鼠血清中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时荧光定量PCR法检测子代小鼠肝脏内Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达水平。结果显示,与对照组相比,MCZ处理组子代小鼠体质量和肝脏指数显著增大,且出现空泡变性,子代小鼠血清中ALT、AST、IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高,肝脏组织中Bcl-2/Bax比值降低,Caspase-3 mRNA表达水平升高。结果表明,妊娠期母鼠暴露MCZ通过炎症反应和细胞凋亡导致子代小鼠发生肝脏损伤。

枸杞多糖对妊娠期暴露全氟辛酸致子代雌鼠卵巢损伤的保护作用

为了探究枸杞多糖(LBP)对妊娠期暴露全氟辛酸(perfluoro octanoic acid,PFOA)致子代雌鼠初情期生殖损伤的保护作用,将60只妊娠母鼠随机分为6组,每组10只。妊娠期1~17 d,空白对照组灌服0.2 mL去离子水;LBP对照组灌服80 mg/kg LBP;其余各组上午灌胃3.5 mg/kg的PFOA,下午灌胃不同剂量(40,80,120 mg/kg)的LBP。21日龄时断乳,将子代雌雄分笼饲养,子代雌鼠正常饲养到35日龄,眼球采血,颈椎脱臼处死。统计子代雌鼠体质量及卵巢质量;ELISA检测血清中促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌激素(E_(2))、促性腺激素释放激素(GnRH)的含量及卵巢组织中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)水平;检测卵巢组织中氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、活性氧(ROS)水平;实时荧光定量PCR检测卵母细胞减数分裂通路关键基因的表达水平。结果显示,母鼠妊娠期暴露3.5 mg/kg PFOA极显著降低子代雌鼠体质量,血清激素GnRH、LH、FSH含量,卵巢组织中SOD、CAT、T-AOC水平(P<0.01)。极显著升高卵巢指数,血清中E_(2)含量,卵巢组织中ERα、ERβ,卵巢组织中MDA、ROS水平(P<0.01)。显著下调卵母细胞减数分裂通路关键基因smc1α、smc1β、smc3、rec8的mRNA表达。研究表明,PFOA对子代雌鼠的生殖系统具有损伤作用,而不同剂量的LBP均对PFOA所致的生殖损伤有不同程度的缓解作用,其中80和120 mg/kg效果较好。