宫颈癌肿瘤微环境中MDSC与HMGB1检测及相关性分析

目的检测HMGB1和髓系来源的免疫抑制性细胞(MDSC)在宫颈癌肿瘤微环境中的表达水平,分析它们在宫颈癌发生、发展中的作用及相互关系。方法用人宫颈癌Hela细胞系建立裸鼠皮下瘤模型,成瘤后取荷瘤小鼠的脾脏、肿瘤组织及外周血制成单细胞悬液,通过流式细胞术检测脾脏、外周血中MDSC细胞的百分比。分别采用Western blot、RT-q PCR方法检测肿瘤组织中HMGB1蛋白和m RNA的表达水平。结果与正常对照组相比,荷瘤鼠外周血和脾脏中CD11b+Gr-1+MDSC的比例明显增高(P<0.05)。与癌旁组织对照组相比,荷瘤鼠肿瘤组织中HMGB1呈明显高表达,具有统计学意义(P<0.05)。荷瘤鼠脾脏中CD11b+Gr-1+MDSC增高与肿瘤组织中HMGB1的高表达呈正相关。结论宫颈癌肿瘤微环境中HMGB1可能通过调控MDSC参与宫颈癌的发生、发展。

重组人血管内皮抑素联合低氧诱导HeLa细胞自噬和凋亡

目的观察重组人血管内皮抑素(rhES)联合低氧对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响。方法取对数生长期HeLa细胞在低氧的基础上分别给予以下处理:PBS、rhES、rhES联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)。处理24 h后,Hochest33528染色及annexin V-FITC/PI染色集合流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC-3)、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 Hochest33528染色提示低氧联合rhES组可以诱导细胞出现核碎裂;Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测发现3组细胞的凋亡率分别为:(2.94±0.45)%、(21.38±0.92)%、(6.87±0.58)%,低氧联合rhES诱导细胞凋亡比率明显高于其他2组;Western blot法检测结果显示,与其他2组比较,低氧联合rhES处理HeLa细胞后LC-3Ⅱ及Bax表达水平明显升高,而Bcl-2明显降低。结论 rhES联合低氧可以促使HeLa细胞发生自噬和凋亡。

乳腺癌肿瘤微环境中HMGB1、miRNAs的检测及相关性分析

目的检测mi R-21-5p、mi R-155-5p、mi R-218-5p、mi R-222-3p、mi R-494-3p和HMGB1在乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤微环境中的表达水平,分析它们在乳腺癌发生、发展中的作用。方法收集乳腺癌MCF-7荷瘤小鼠手术标本;实时荧光定量PCR检测18只乳腺癌荷瘤小鼠手术标本中mi R-21-5p、mi R-155-5p、mi R-218-5p、mi R-222-3p、mi R-494-3p和HMGB1的m RNA的表达水平;Western blot法检测HMGB1在癌组织及癌旁组织中蛋白表达情况。结果与癌旁组织相比,肿瘤组织中mi R-21-5p、mi R-222-3p表达上调(P<0.05),mi R-155-5p、mi R-218-5p、mi R-494-3p表达下调(P<0.05);与癌旁组织相比,HMGB1在癌组织中高表达(P<0.05)。相关性分析发现,mi R-21-5p、mi R-222-3p与HMGB1的表达成正相关,而mi R-155-5p、mi R-218-5p、mi R-494-3p与HMGB1的表达成负相关。结论肿瘤微环境中mi R-21-5p、mi R-155-5p、mi R-218-5p、mi R-222-3p、mi R-494-3p和HMGB1可能在乳腺癌的发生、发展中起一定作用。

荷瘤小鼠卵巢癌细胞miRNA和髓源性抑制细胞的检测及相关性分析

目的检测卵巢癌荷瘤小鼠癌组织miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平和外周血和脾脏中髓源性抑制细胞(MDSC)的数量,并分析它们的相关性。方法 12例卵巢癌荷瘤小鼠的癌组织和癌旁组织,实时荧光定量PCR检测癌组织和癌旁组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平,流式细胞术检测上述荷瘤小鼠中外周血和脾脏中MDSC的表达。采用Spearman法分析MDSC和microRNA的相关性。结果与正常小鼠相比,荷瘤小鼠外周血和脾脏中的MDSC明显增加。miR-21a-5p、miR-218-5p和miR-222-3p在癌组织中含量高于癌旁组织,相反miR-155a-5p和miR-494-3p在癌组织中的表达低于癌旁组织。miR-222-3p与MDSC的数量无相关性,miR-494-3p的水平与MDSC的数量负相关,miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p在癌组织与癌旁组织的表达差值与MDSC的数量呈正相关。结论卵巢癌荷瘤小鼠癌组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-494-3p水平和外周血及脾脏中MDSC的数量有一定的相关性。

4T1乳腺癌细胞培养上清液促进ANA-1巨噬细胞精氨酸酶1分泌

目的通过模拟体内乳腺癌微环境,探讨4T1小鼠乳腺癌细胞培养上清液在体外对ANA-1巨噬细胞中精氨酸酶1(Arg-1)含量的影响。方法用添加或不添加4T1培养上清液培养ANA-1巨噬细胞,分别在6、8、10、24 h用光学显微镜观察ANA-1细胞形态变化。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、Arg-1 mRNA水平,免疫荧光染色、Western blot法检测i NOS、Arg-1蛋白水平。结果实时荧光定量PCR结果显示,添加4T1上清液的巨噬细胞i NOS mRNA表达水平较对照组减少,Arg-1 mRNA水平较对照组显著升高,且在8 h最显著。与对照组相比,免疫荧光染色和Western blot实验也发现Arg-1表达增强,但添加或不添加4T1培养上清液的细胞i NOS的表达差异不明显。结论 4T1乳腺癌细胞培养上清液诱导ANA-1细胞Arg-1分泌增加。