沙眼衣原体转录激活因子GrgA与RNA聚合酶β'亚基的相互作用

目的研究沙眼衣原体基因转录调控过程中转录激活因子GrgA与RNA聚合酶(RNAP)β'亚基相互作用的关系。方法制备沙眼衣原体RNA聚合酶(cRNAP)NH-β'(N末端携带His标签)质粒:根据GenBank中的基因序列设计特异性引物,以衣原体基因组DNA(gDNA)为模板,聚合酶链式反应技术(PCR)扩增cRNAPβ'亚基的基因片段;采用同源重组法将基因片段插入到目的载体上构建表达质粒,同样方法制备β'亚单位和缺失亚单位质粒;cRNAPβ'亚基蛋白(包括亚单位和缺失亚单位)的表达:将构建的质粒转化ArcticExpress表达菌中,采用考马斯亮蓝染色法鉴定蛋白表达情况;cRNAPβ'亚基及其亚单位蛋白的纯化:采用固定化离子亲和层析法(IMAC)纯化得到相应蛋白;借助体外蛋白结合实验(Pull-down技术)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)分析鉴定出GrgA与cRNAPβ'亚基两者间相互结合的较为详细的某一段氨基酸序列。结果GrgA能与cRNAP的β'亚基结合;GrgA与cRNAP的β'亚基N端的(1-731)氨基酸序列有结合,与C端的(671-1396)氨基酸序列无结合。GrgA与β'亚基的(1-240)和(181-417)氨基酸序列有结合;与β'(360-598)、β'(533-731)氨基酸序列无结合。GrgA与β'△(1-180)和β'△(241-417)有结合,与β'△(1-417)无结合。结论GrgA能与cRNAP的β'亚基结合;cRNAP的β'亚基与GrgA的结合存在2个结合位点,分别位于β'亚基N末端的1-180和241-417位氨基酸序列。

含微囊藻毒素的蓝藻水华提取物对小鼠抗氧化酶的毒性作用(英文)

在世界范围内发生的富含营养的废水中生长蓝藻水华已经造成了严重的水污染。已有报道显示水华中的有毒成分是一类单环七肽微囊藻毒素,它们对人和家畜有严重的毒害作用,本文所使用的蓝藻水华采集于我国的太湖地区。我们采用三个亚致死计量(16、32、64 mg冻干藻细胞/kg体重,相当于4.97、9.94、19.88μg藻毒素/kg体重)的蓝藻水华提取物(CBE),分析它们对小鼠肝脏抗氧化酶的影响。经过连续14d每天腹腔注射CBE,小鼠分别在第3、5、7、9、11、13、15天处死并检测三种主要的抗氧化酶:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽巯基转移酶(GST)的活性。SOD和CAT的活性均呈现了抑制效应,GST的活性也发生了明显的变化。为了进一步确定过氧化的程度,我们又通过检测丙二醛的含量分析了脂质过氧化的程度。经过14d CBE处理后脂质过氧化表现出了明显的浓度依赖性的上升趋势。我们的结果表明,CBE对小鼠的抗氧化酶有严重毒害作用,并且能够引起脂质的过氧化。

基于血红蛋白-蒙脱土膜的修饰电极在三氯醋酸检测中的应用(英文)

三氯醋酸产生于工业废弃物及水的氯化过程 ,是重要的环境污染物 .对于它的检测 ,常用的方法比较繁琐 .应用血红蛋白 -蒙脱土膜修饰热解石墨电极 ,将血红蛋白包埋于修饰在热解石墨电极上的蒙脱土内 ,进行循环伏安实验 ,可以得到血红蛋白的直接电化学响应 ,在pH 4.0 0 .1mol/L柠檬酸缓冲液中 ,于- 0 .2 92V处出现一对准可逆的氧化还原峰 (相对于饱和甘汞电极 ,VS.SCE) .经紫外 -可见光谱和傅利叶红外光谱测定 ,包埋在蒙脱土膜内的血红蛋白仍保持与其天然状态相似的二级结构 ,而且将三氯醋酸加入上述体系中 ,发现该修饰电极对三氯醋酸具有催化功能 .表观米氏常数的测定结果显示 ,该参数可作为这种电极与底物三氯醋酸作用的酶性质的表征 .同时血红蛋白 -蒙脱土膜修饰热解石墨电极性质稳定 ,对于三氯醋酸 ,显示出了酶样的催化作用特性 ,特异性高 .因此水中虽然存在一些浓度高于三氯醋酸三倍的相关干扰物质的同时 ,该电极仍显示出了良好的选择性 ,并具有方便、快捷的特点 .还从电化学的角度出发 ,探讨了血红蛋白

N末端Strep蛋白标签表达载体的构建和应用

目的构建携带N末端Strep(NS)蛋白标签的表达载体;在表达载体中构建衣原体RNA聚合酶亚基重组蛋白并表达。方法采用PCR的方法,通过引物引入NS蛋白标签和新的多克隆位点替代p ET21c-DH质粒中原有的T7蛋白标签和多克隆位点,选择新引入的Not I酶切位点进行PCR产物的环化自连,转化DH-5α细菌后筛选阳性菌株,PCR法和基因测序法鉴定新构建的表达载体;在新构建表达载体的Bam H I和Sal I位点之间分别插入衣原体RNA聚合酶核心酶的α、β、β'亚基,获得表达NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表达载体,转化表达菌株Arctic Express,筛选阳性表达菌株,并用考马斯亮蓝染色、Western blot等法鉴定融合蛋白的表达情况。结果成功构建了携带NS蛋白标签的p ET21c-NSMCS载体,并成功将其应用于衣原体RNA聚合酶核心酶亚基融合蛋白的构建及表达。结论获得稳定表达NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表达载体,为研究衣原体基因转录调控奠定了良好的基础。

β淀粉样蛋白寡聚体毒性环境下Bryostatin-1对神经突触活性的影响和潜在机制

在原代海马神经元上建立通过外加Aβ寡聚体所导致的突触毒性模型,并使用蛋白印迹、激酶活性、激光共聚焦显微成像和电生理等技术检测PKC激酶的非选择性激动剂Bryostatin-1是否可以保护Aβ寡聚体导致的突触毒性。结果显示,在Aβ毒性模型中,Bryostatin-1可以改善树突棘的形态,并促进树突棘成熟。此外,电生理结果显示Bryostatin-1可以显著改善突触后的微型兴奋性突触后电流频率,AMPA受体与NMDA受体的比例并没有发生显著改变。蛋白印迹结果显示Bryostatin-1可以上调突触生物标记物水平。蛋白印迹试验结果表明,Bryostatin-1可以上调mTOR-S6K1信号通路的活性。通过在神经元中转染GFP-RFP-LC3质粒并进行激光共聚焦显微观察,结果提示Aβ寡聚体可以抑制神经元内自噬通量,而Bryostatin-1可以提高被Aβ寡聚体所抑制的自噬通量。结果提示,Bryostatin-1激活mTOR-S6K1信号通路,并随后调节细胞自噬功能可能是其在Aβ寡聚体毒性环境下保护神经元突触功能的分子机制。

小檗碱的体外抗衣原体活性研究

研究旨在阐明天然产物小檗碱的体外抗衣原体活性。首先,通过测定小檗碱对沙眼衣原体L2和鼠衣原体MoPn包涵体形成数量和感染性子代滴度的影响,发现小檗碱对两种衣原体均呈浓度依赖性抑制。其次,采用CCK-8试剂盒测定化合物对细胞活力的影响,显示浓度不高于8μmol/L时小檗碱无明显宿主细胞毒性。借助宿主细胞和衣原体预处理实验,发现小檗碱不能直接作用于宿主细胞,仅能微弱地直接作用于衣原体而影响衣原体的感染过程。最后,分析小檗碱对衣原体增殖过程的影响。后加药和撤药实验结果显示,小檗碱主要作用于2~12 h的EB→RB转化阶段;长期耐受实验结果表明,小檗碱可以延缓衣原体的生长周期,但不能完全杀死衣原体。综上,小檗碱具有广谱的体外抗衣原体活性,对衣原体增殖过程的干扰作用强于对感染过程的影响。

鄂尔多斯高原盐沼湿地底栖动物多样性特征与遗鸥繁殖期觅食的相关性研究

遗鸥是蒙古高原荒漠-半荒漠生态条件下的特有鸟种，是国际公认的濒危鸟种，具4个相对独立的繁殖种群，遗鸥鄂尔多斯种群的春、夏季主要栖息、繁殖地是鄂尔多斯高原盐沼湿地，2006年遗鸥的繁殖地在湿地的红碱淖尔湖，所以4月-10月对鄂尔多斯高原盐沼湿地的红碱淖尔底栖动物的组成和分布及月动态变化进行调查，并且对水生昆虫的成虫和幼虫的蜕皮壳数量进行调查，以及对遗鸥在春、夏季繁殖期的觅食特点进行调查。结果表明：红碱淖尔的底栖动物种类少，只有9种，且都是水生昆虫，豆娘和摇蚊是优势种，占底栖动物总生物量的90％以上。遗鸥食物种类少，繁殖地生态环境脆弱，典型相关和多元线形回归分析显示，豆娘幼虫是遗鸥繁殖期间的主要食物，5—7月高峰期的摇蚊幼虫是遗鸥重要的食物补充来源。遗鸥与豆娘幼虫、遗鸥与摇蚊幼虫是捕食与被捕食关系，种群数量存在着消长关系。

二氢苯并呋喃醇化合物体外抗衣原体活性研究

目的分析前期合成的5个二氢苯并呋喃醇类化合物的抗衣原体活性及其作用机制,为寻找新型抗衣原体活性物质提供参考。方法通过免疫荧光染色和测定感染性子代滴度的方法,评估化合物对沙眼衣原体L2(Chlamydia trachomatis L2,C t L2)和肺炎衣原体AR39(Chlamydia pneumonia,Cpn AR39)的抑制作用,并计算子代滴度的半数抑制浓度(IC_(50))值。通过Evans Blue细胞形态染色、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)细胞核染色和增殖细胞计数,评估化合物对宿主细胞活力的影响。通过细胞和衣原体预处理实验,检测化合物对衣原体感染过程的影响;通过后加药和撤药实验,检测化合物对衣原体增殖过程的影响。结果5个化合物均能浓度依赖性抑制C t L2和Cpn AR39生长,其抑制感染性子代滴度的IC_(50)均在5μmol·L^(-1)附近,同时在16μmol·L^(^(-1))时没有明显的细胞毒性。5个化合物均对衣原体感染过程没有影响;化合物1,3,5对衣原体的增殖全过程均具有较强的抑制作用,化合物2,4的抑制作用较弱且需要全过程的持续作用。结论5个二氢苯并呋喃醇类化合物均具有广谱抗衣原体活性,其作用机制与衣原体的感染过程无关,主要作用于衣原体的增殖过程。

初论引黄工程对桃-阿海子湿地生境恢复的作用与影响——兼谈泊江海子采矿区地表沉降成塘的例示

桃力庙-阿拉善湾海子(桃-阿海子)是鄂尔多斯遗鸥国家级保护区核心区暨全球第1148号国际重要湿地,干涸10余年后,在各方的协调努力下,引黄济湖工程于2018年5月中旬正式开通放水。至8月下旬,在桃-阿海子栖居的水鸟总量近1万只,其中白鹭和普通翠鸟为桃-阿海子的鸟种新纪录,灰雁、赤嘴潜鸭、白骨顶为繁殖新纪录,秋季桃-阿海子栖居的水鸟总量逾2万只。补水使冬季上冻前桃-阿海子拥有面积超过5km^2的明水水面和大于2km^2且发育良好的芦苇沼泽。另外,在桃-阿海子天然注入河上游附近,由于采矿区地表沉降,出现一处面积约0.6km^2的水塘,夏季吸引了20余种水鸟栖居,其中7种水鸟有见繁殖。

平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎98例的疗效观察

目的:分析平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎的临床效果。方法:收治慢性浅表性胃炎患者98例,运用平胃散加减治疗,观察临床效果。结果:98例患者中有效81例,显效16例,无效1例,总有效率达到98.97%。结论:平胃散加减治疗慢性浅表性胃炎,效果确切,症状消失明显,食欲明显改善。

几何画板在初中数学教学中的实践与探索

几何画板是现代化科技在教学中应用而得的产物,是一款优质的信息化教学辅助软件.初中数学知识难度加大,因此几何画板在初中数学教学中的应用也最为广泛.基于此,本文阐述了几何画板的教学功能及其特点,结合现阶段初中数学教学中几何画板的实际应用情况,重点介绍了其在实践中的教学功能,并提出了加强其辅助教学功能的几点策略,以供参考.

1,2-二取代吡咯类化合物的体外抗衣原体活性研究

目的评估16个1,2-二取代吡咯类化合物的体外抗衣原体活性。方法通过测定化合物对沙眼衣原体L2、鼠衣原体MoPn和肺炎衣原体AR39感染性子代滴度的抑制效果,计算IC50值评估其抗衣原体活性。采用WST-1法测定细胞活力,评估化合物的细胞毒性作用。最后,借助EB预处理实验检测化合物对EB感染能力的影响,通过改变化合物处理时间评估其对衣原体增殖过程的影响。结果大部分化合物具有抗衣原体作用,其中化合物8的作用最强,其对三株衣原体的IC_(50)值在1.76-8.23μmol·L^(-1)之间。大部分化合物在16μmol·L^(-1)时具有明显的细胞毒性,8μmol·L^(-1)时细胞毒性明显降低。这些化合物主要通过干扰衣原体增殖的早中期来抑制衣原体的生长,同时也可以通过降低EB感染能力抑制衣原体的感染。结论1,2-二取代吡咯类化合物具有广谱抗衣原体活性,其抗衣原体作用与降低EB感染能力和干扰早中期RB增殖有关。

成县建立孕产妇保健告知制度的结果分析

地处甘肃东南部,经济交通欠发达,开展助产服务的乡镇卫生院仅20%,村级妇幼保健人员男性95%以上,且年龄在45岁以上的居多,开展孕产妇保健工作具有很大的局限性。为此,成县积极探索,勇于创新,从2006年开始,在乡、

药理学双语教学的实施与评价

药理学(Pharmacology)是多门学科交叉的桥梁课程,双语教学是培养具有国际竞争力及高素质医药学生的一种创新型药理学教学模式。教学内容选取、课堂教学组织、教学效果评价构成了双语教学最重要的部分。本文在南通大学药学院药理学双语教学工作基础上,对以上部分进行简要小结,以便交流及进一步提高教学质量,促进药理学双语教学在本院更好开展。

针刺配合药离子导入治疗颈椎病68例疗效分析

颈椎病是由于颈椎及其软组织退变引起脊柱内外平衡失调,压迫或刺激颈部血管、交感神经和脊髓,而引起颈、肩、上肢、头胸部疼痛、麻木、眩晕等症状,影响正常生活和工作的一种常见疾病,

司替戊醇及其自纳米乳在大鼠血浆和脑组织中的药物浓度比较

目的:建立测定大鼠血浆和脑组织中司替戊醇(STP)质量浓度的方法,并比较STP及其自纳米乳在血浆、脑组织中的药物浓度。方法:以占吨酮为内标,采用高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLR)测定。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为乙腈-25 mmol/L KH2PO4水溶液[44∶56(V/V),pH 2.6],流速为1.5 mL/min,激发波长为210 nm,发射波长为400 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。将36只大鼠随机分为两组,每组18只,分别灌胃STP自纳米乳和STP混悬液(40 mg/kg,均以STP计)。于给药后0.5、1、2 h时采集大鼠血液和脑组织样品(各时间点每组各6只),经乙腈沉淀蛋白(脑组织需先进行匀质)等处理后,采用上述色谱条件检测STP的质量浓度并比较。结果:STP在血浆、脑组织中药物浓度检测的线性范围均为0.02~8.00μg/mL(r分别为0.9996、0.9994),定量下限均为0.02μg/mL;日内、日间RSD均小于5%,提取回收率和方法回收率均不低于90%。与STP混悬液组比较,STP自纳米乳组大鼠各时间点的血药浓度(给药后1 h除外)、脑组织中药物浓度(给药后2 h除外)均显著升高(P<0.05),且两者(以STP自纳米乳为对象)具有明显的线性关系。结论:所建HPLC-FLR法的灵敏度、精密度较高,可用于研究STP及其自纳米乳在大鼠血浆和脑组织中的分布情况;将STP制成自纳米乳后,其在血浆、脑组织中的药物浓度明显提高。

环索奈德通过靶向HIV-1衣壳蛋白六聚体调节其体外装配

多肽CAI在HIV-1衣壳蛋白(CA)C末端的结合口袋可用来筛选CA蛋白装配调节剂。采用均相时间分辨荧光技术(HTRF)筛选399个化合物,发现1个小分子化合物环索奈德(ciclesonide)能够竞争性抑制十二肽CAI与CA蛋白C末端的结合,其半数抑制浓度IC_(50)值为6.06μmol/L。生物膜干涉技术(BLI)测量环索奈德与CA蛋白(单体和六聚体)的结合,环索奈德与CA六聚体的亲和力为159 nmol/L,远远大于其与CA单体的亲和力(K_(D)=1.68 mmol/L)。衣壳蛋白体外装配实验表明,环索奈德能促进CA蛋白的装配,且具有浓度依赖性。分子模拟分析环索奈德与CA蛋白的结合模式,显示环索奈德与CA六聚体的相互作用发生在六聚体相邻亚基N末端-C末端的界面上,并与H67和L211两个残基形成氢键。研究表明,环索奈德是一种潜在的HIV-1衣壳装配调节剂。

提升药学院大学生创新训练计划项目质量的新举措探析

大学生创新训练项目是本科生个人或团队在导师指导下,自主完成创新性研究项目设计、研究条件准备和项目实施、研究报告撰写、成果(学术)交流等工作。南通大学药学院在大学生创新训练项目的实施过程中引入建构主义理论,交叉融合学科方向,坚持学生主导地位,通过组建合作学习小组、规范科学研究过程、加强自主协作学习和开展组间交流讨论,增强了大学生科研创新能力。

鄂尔多斯蓑羽鹤小群体的GPS-GSM跟踪初步分析

在内蒙古鄂尔多斯遗鸥国家级自然保护区已多次发现有一个孤立的蓑羽鹤(Anthropoides virgo)小种群在此地繁殖和度夏。2015年7月,在该地区为5只成年蓑羽鹤(3只繁殖,2只非繁殖)佩戴了中国湖南生产的GPS-GSM发射器。截止到5只蓑羽鹤全部离开鄂尔多斯高原,共获得7 794个GPS位点信息。通过跟踪信息了解到1只个体在9月18日死于鄂尔多斯高原的中西部,其余个体于9月末至10月初先后迁出鄂尔多斯高原。迁徙过程中的最快瞬时速度为93.1 km/h。4只个体迁出鄂尔多斯高原的时间和路线均略有不同。