表达产肠毒素性大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒的免疫学特性研究

为研究表达产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热性肠毒素STa与粘附素K99融合蛋白重组腺病毒r Ad.STa-K99的免疫学特性,本实验将r Ad.STa-K99经肌肉注射免疫小鼠,采用ELISA法分别检测了特异性Ig G、SIg A、脾脏淋巴细胞增殖活性水平及CD4+、CD8+T淋巴细胞分型比值;并通过攻毒保护试验对其免疫效果进行评价。结果表明,免疫后小鼠特异性Ig G、SIg A及脾脏淋巴细胞增殖活性水平显著升高;CD4+/CD8+值显著增大;动物攻毒保护率达到70%。结果表明r Ad.STa-K99可以刺激小鼠机体产生较高水平的体液免疫、特异性细胞免疫和肠道粘膜免疫反应,并对小鼠提供有效保护。本实验为研制预防由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒疫苗奠定了基础。

产肠毒素大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体的构建及表达

为构建产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体Ad STa-K99,通过PCR技术分别克隆了STa及K99基因,并与腺病毒穿梭质粒连接构建了穿梭质粒pAd5 STa-K99,将pAd5STa-K99和骨架质粒(含GFP基因)分别用PacⅠ酶切线性化,利用LipofectamineTM LTX&PLUS共转染293细胞进行同源重组包装重组腺病毒,通过PCR及Western blot对重组腺病毒进行鉴定。结果显示,重组腺病毒Ad5STa-K99构建正确并表达融合蛋白,且表达的融合蛋白能够被抗体所识别,为研制由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。

氧化还原引发体系常温合成聚羧酸减水剂

选用氧化还原引发剂体系合成聚羧酸减水剂,着重对引发剂组成及用量以及引发剂久置性等对减水剂性能的影响进行研究。结果表明,当引发剂中还原性物质组成为m(Vc)∶m(Na HSO3)=1∶1,氧化剂用量为HPEG质量的0.5%,体系中引发剂用量为HPEG总质量的2%,n(HPEG)∶n(AA)∶n(AMPS)=1.0∶3.5∶0.7时,合成减水剂的分子质量MW为25 820 g/mol。经XRD分析表明,减水剂有促进水泥早期水化的作用。减水剂掺量为0.25%时,混凝土减水率达35%。

猪肺脏气道上皮干细胞的特异抗体筛选与抗原表达研究

猪肺脏气道上皮主要由基底细胞,克拉拉细胞,纤毛细胞,杯状细胞等上皮细胞类型组成,筛选猪气道上皮干细胞的相关特异性抗体,观察其特异抗原的表达,将有助于对猪气道上皮干细胞的分离、鉴定和生物学特性的研究。试验中,制备远端气道上皮细胞的冰冻切片与细胞爬片,利用免疫荧光染色法,分析不同物种来源的抗体对猪气道上皮细胞的免疫染色反应;同时利用Oct3/4、Sox2、CD133和SSEA-1等10种上皮干细胞相关抗体分析猪气道上皮干细胞表面抗原表达情况。通过试验,筛选出在猪气道上皮干细胞相关抗体,并发现气道组织冰冻切片未检测到这10种抗体相关的阳性细胞,而在细胞爬片中观察到CD49f和CD117阳性细胞数量较多。免疫荧光共染发现这些CD49f和CD117阳性细胞同时也表达基底细胞表面标记Keratin 14。这可能是正常情况下猪气道上皮干细胞数量极为稀少,表面抗原表达量低而不易检测到,在肺脏气道上皮受到外环境刺激时(如消化),上皮干细胞开始增殖以完成损伤修复作用发生数量上的增殖。综上所述,利用Keratin 14和CD49f或CD117(c-kit)双标染色法可以鉴定猪肺脏气道上皮干细胞的候选亚群来用于其生物学特性与功能的研究。

宁夏地区162株大肠杆菌临床分离株对四环素类药物的耐药性分析

目的分析宁夏地区大肠杆菌临床分离株对四环素类药物的耐药性,为指导临床合理用药提供理论依据。方法采用PCR技术和药敏试验对宁夏地区临床分离的162株大肠杆菌进行四环素类药物耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG的分子检测和耐药性研究。结果基因检测结果表明,在162株大肠杆菌临床分离株中,110株检测出了耐药基因,阳性率为67.9%。其中tetA基因的阳性率为40.1%,tetB基因的阳性率为29.6%。药敏试验结果表明,120株对四环素类药物耐药,耐药率为74.1%,耐药菌株中有15株未检测到tetA和tetB耐药基因。药敏试验结果与基因检测结果的符合率为87.5%;对四环素类药物耐药的87.5%大肠杆菌均携带tetA和tetB基因,其中7.5%的耐药菌株携带2种耐药基因。结论宁夏地区大肠杆菌临床分离株对四环素类药物具有较高的耐药性,应予以足够重视。

葵花籽粕蛋白提取及分离纯化工艺优化探究

为了进一步优化葵花籽粕蛋白提取和分离纯化工艺,文章运用正交试验法和参数自由组合试验法分别进行蛋白提取试验、蛋白分离纯化试验,旨在为工艺优化提供参考。

经典Wnt信号途径在肺脏上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用

目的:肺脏上皮细胞在抵抗外源微生物入侵中发挥着重要保护作用,最近研究揭示,在器官组织发育中发挥调控作用的经典Wnt信号具有免疫调节功能。因此,有必要研究肺脏上皮细胞A549中Wnt信号经典途径在抗结核分枝杆菌(Mtb)感染中的免疫调节作用。方法:用牛结核分枝杆菌卡介苗(BCG)刺激转入Wnt信号报告基因质粒BATflash的A549细胞,利用双荧光素酶报告系统、Western blot和ELISA方法分析细胞中Wnt信号经典途径主要相关信号因子和免疫反应炎症因子的表达变化。结果:BCG感染A549细胞后抑制了Wnt信号报告荧光素酶的活性,Western blot结果表明,随着细胞浆内磷酸化β-catenin含量增加,Wnt信号的抑制基因GSK3β和Axin2表达上调,而细胞核中的效应子β-catenin基因活性组分和下游转录因子TCF4与Lef-1的表达下调;BCG感染过表达β-catenin的细胞时导致IL-6、NF-κB、MyD88和TRAF6蛋白表达下调,但不影响TNF-α的表达。结论:肺脏上皮细胞在抗结核分枝杆菌感染过程中通过下调Wnt信号活性而抑制细胞中的MyD88/TRAF6/NF-κB信号通路来降低免疫反应以保护宿主细胞免受感染造成的免疫损伤。