宋氏I相/福氏1b痢疾双价抗原菌株的构建

以菌体内重组方法将脱失了部分毒力基因片段的宋氏痢菌Ⅰ相抗原质粒诱动到已脱失140Md毒力质粒的福氏痢菌1b中,构建成兼具福氏及宋氏“O”抗原的二价菌株。该菌株不含编码卡那霉素抗性基因的Tn5;连续传25代仍对宋氏及福氏1b痢菌O抗血清呈凝集反应;质粒电泳图显示该二价菌株拥有供体菌赋予的75Md的质粒带。

628株大肠杆菌R质粒的检测

本文检测来源于新生儿及健康猪的628株大肠杆菌的耐药谱及R质粒。这些菌株对四环素的耐药率最高,人源菌株对氨(?)青霉素和庆大霉素的耐药率高达67.82％和51.49％。R质粒的检出率在60％以上。多重耐药菌株中R质粒检出率特别高。三耐以上菌株的耐药谱型多以四环素、磺胺抗性为基础,对比过去的资料;耐药类型由四耐已发展到以五耐以上居优势;应引起医务界及社会上的重视。

高耐汞菌株的筛选及其生物学特性研究

[目的]从汞污染土壤中寻找高耐汞菌。[方法]用HgCl2选择性培养基，分离和筛选出耐汞菌，测定苴耐Hg^2＋和耐药性水平，检测耐酸碱能力和还原Hg^2＋能力，分析遗传背景。[结果]共筛出7株耐汞菌，形态学观察和生化鉴定分属假单胞菌或枯草杆菌。其中假单胞菌CHY-7菌株耐药性较少，耐Hg^2＋水平高达100mg／L，营养要求低，耐酸碱范围广（pH5．0～10．0）；16S rRNA基因分类鉴定为恶臭假单胞菌；PCR和DNA测序证实该菌株含merA基因，位于细菌染色体上；在Hg^2＋为5～50mg／L时，48h后还原Hg^2＋为Hg^0的效率为94．3％到82．8％。[结论]该菌株有望应用于工业汞污水的处理和汞污染土壤及水体的修复。

肠球菌致病性的初步探讨

对40株从临床病理材料分离的肠球菌作溶血（人血）实验，其中β-溶血菌株占575％。利用1株从保健饮料中分离的肠球菌EFR为指示菌作细菌素检测，对EFR有杀菌作用的菌株比率为72．5％。实验发现这40株肠球菌中含有3种细菌素：a．细菌素／溶血亲；b．对氯位具有抗性的细菌素；c.既不具有β-溶血素的功能，又对氯仿敏感的细菌素。选择10株肠球菌，其中3株为α-溶血，7株为β-溶血，通过精子尾部低渗肿胀实验，检测肠球菌毒力，发现7株β-溶血菌株对人精子膜有显著破坏作用，而β-溶血菌株中，2株对精子膜无破坏作用，1株有破坏作用。上述结果提示，溶血素／细菌素和肠球菌的毒力密切相关，但还有一些其它因素和肠球菌的毒力有关。

改良溶解圈纤溶酶原激活物测定法及其在革兰氏阴性菌中的应用

本研究建立的测定纤溶酶原激活物（Ｐｌａ）的纤维蛋白溶解圈法，不仅简单易行，而且具有很高的敏感性和特异性。检测灵敏度较原来的普通溶解圈法提高了大约５００倍，能检出２．５×１０－５ＩＵ的尿激酶（ＵＫ）活力。本方法特别适用于低Ｐｌａ含重的定性定量检测，如革兰氏阴性菌纤溶酶原激活物的测定。应用此方法，本研究首次证明了伤寒和鼠伤寒杆菌具有纤溶酶原激活物的活性，１０Ｄ鼠伤寒菌的Ｐｌａ活性相当于４×１０－２ＩＵＵＫ；１ＯＤ伤寒菌的Ｐｌａ活性相当于５×１０－３ＩＵＵＫ。

应用自杀性质粒载体构建鼠伤寒沙门氏菌Pla基因的位点专一性突变

带有ｐＳＶ１质粒的ＳＭ１０λπ寄主菌，由于ＳＭ１０λπ染色体上带有ＲＰ４的诱动性基因和促进Ｒ６Ｋ复制起点启动复制的π基因，故ｐＳＶ１质粒能够复制且可被诱动。被研究的鼠伤寒沙门氏菌ｐｒｔＡ基因，经人工拼接Ｋｍ抗性基因的插入钝化后，连接到ｐＳＶ１质粒上，所构建的质粒就可被诱动到鼠伤寒沙门氏菌体内。由于在新的寄主菌内缺乏π基因，ｐＳＶ１的Ｒ６Ｋ复制起点缺少π蛋白的帮助无法进行自我复制，表现出自杀性质粒的功能，而其上被Ｋｍ基因插入的ｐｒｔＡ势必与染色体上同源的ｐｒｔＡ进行交换，使染色体上ｐｒｔＡ基因出现位点特异性诱变。经测定原始从发菌株，诱变菌株的ｐｌａ功能后，证实后者功能被人工地失活，说明ｐｒｔＡ基因具有编码ｐｌａ的功能。本方法的建立将为革兰氏阴性杆菌染色体上任何基因的研究找到一条简便有效的途径。

脆弱拟杆菌β-内酰胺酶的理化及酶学特性

本文对临床分离的脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)55的β-内酰胺酶进行了理化及酶学特性的研究。该酶为非诱导性,以头胞菌素酶活性为主,分子量为43000,等电点 pI 为4.95,酶反应最适 pH 为7.2,最适温变为37℃。该酶对各种底物的 K_m(μmol/L)值为:头孢噻吩185,头孢噻啶103、头孢唑淋200,头孢羟唑263、头孢氧哌羟苯唑830。对各种底物的相对水解率为头孢羟唑>头孢噻吩>头孢唑啉>头孢噻啶>头孢氧哌羟苯唑>青霉素>氨苄青霉素>头霉甲氧噻吩>羟羧氧酰胺菌素。该酶对羧苄青霉素、头霉甲氧噻吩捧酸、青霉烷砜、对氯安息香酸汞及邻氯青霉素的抑制作用敏感。

自发性高血压大鼠左心室癌基因c－myc的表达

探讨在体情况下癌基因ｃ－ｍｙｃ与心肌肥厚的关系，研究已有心肌肥厚雄性４０周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和年龄、性别相配的Ｗｉｓｔａｒ京都种（ＷＫＹ）大鼠左心室ｃ－ｍｙｃ基因表达变化。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的结果显示ＳＨＲ左室肌ｃ－ｍｙｃ表达量明显比ＷＫＹ高。左室增强的ｃ－ｍｙｃ表达可能在ＳＨＲ左室肥厚形成中起重要作用。

小肠结肠炎耶氏菌毒力相关基因探针的制备

本研究采用分子生物学方法从0:8型小肠结肠炎耶氏菌(Ye菌)所携带的毒力大质粒上分离、纯化了与Sereny试验相关的毒力基因2.8kb片段,经半抗原标记作为探针。菌落原位杂交结果证明2.8kb探针可与含表达VW抗原质粒的不同型Ye菌和假结核杆菌特异性杂交,与宋氏痢疾、EIEC和大肠杆菌无交叉反应。表明2.8kb探针有高度的特异性,且它与痢疾杆菌和EIEC的Sereny反应无关。

肠球菌中抗生素抗性传递的研究

本文初步研究四环素（Tc），红霉素（Ery），盐酸二甲胺四环素（Mn），庆大霉素（Gm＞2000μg／ml）抗性在肠球菌中转移的机制。从病理材料中分离获得扬球菌EF-1只能通过平板接合法把Tc、Mn、Ery、Gm抗性传递给受体坚韧的肠球菌EFR，获得一株不含质粒带的接台子Tc-16，Tc-16，又能作为供体把Tc、Mn、Ery抗性传递给肠球菌FT137，表明Tc、Ery、Mn抗性基因是位于接合转座子上。EF-1也仅能通过平板接合法把Gm抗性传递给EFR或FT137，在获得的接合子中，有一株（G-1）对Gm抗性，而Tc敏感，含单条小质粒带，一株GT-1对Gm、Tc、Ery、Mn抗性，含相同的单条小质粒带，对这两株接合子作质粒消除实验，都获得对庆大敏感的（GT-1仍对Tc、Ery、Mn抗性）不含质粒带的菌株，这说明庆大霉素抗性基因位于该质粒上。EF-1所含的质粒都是非接合性质粒，平板法接合传递中所获得的接合子，大都含有EF-1的数目不等的质粒带，说明这些质粒是被接合转座子诱动传递的。

PCR检测Graves病患者HLADR1-DRB1基因

弥漫性甲状腺肿伴甲状腺功能亢进症(即Graves病)是一种常见的临床内分泌疾病,迄今病因未明。我们以往的血清学研究显示汉族人患Graves病与HLA-DR1抗原有关。

脆弱拟杆菌β-内酰胺酶的纯化及免疫学特性

利用层析结合PAGE回收蛋白的方法对临床分离的脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)55的β-内酰胺酶进行纯化,纯酶与Liposome-CPS-K混合制备抗血清,并建立了IgG-ELISA和Western blottiag方法。其测定结果表明,脆弱拟杆菌的β-内酰胺酶不同于其它拟杆菌和肠道杆菌染色体编码的β-内酰胺酶(p<0.001),具有种的特异性。

细菌与Sereny试验相关基因的研究

细菌与Ｓｅｒｅｎｙ试验相关基因的研究余菲菲，包幼迪关键词细菌，Ｓｅｒｅｎｙ试验，基因Ｓｅｒｅｎｙ试验是细菌致豚鼠眼结膜炎试验，１９５５年由Ｓｅｒｅｎｙ首次用于检测志贺氏菌属侵袭力。目前，这种动物模型已沿用于肠杆菌科其他属，如侵袭性大肠杆菌（ＥＩＥＣ）...

在综合基础上创新——鼠伤寒菌pla基因及其功能研究的思考

鼠伤寒菌pla基因及功能的研究从课题确立到取得结果整个过程,充分展现了综合研究方法在现代科学研究中的重要作用;在综合基础上的创新是科学研究成功的中心环节。

宋氏Ⅰ相抗原质粒的分子克隆及与Ⅰ相抗原突变株的互补检测

用“鸟枪”法克隆宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原质粒 pFEG 001,获得13株重组子。将其分别导入宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原突变株 BW 201～204进行互补检测,发现重组质粒 pBL 108可反式互补于Ⅰ相抗原突变质粒 paW 204,恢复Ⅰ相抗原的表达;该重组质粒中的插入片段分子量为1.0kb。互补结果提示该片段内至少含有1个与Ⅰ相抗原表达有关的基因,据此推测宋氏Ⅰ相抗原的表达受多基因控制。

福建省连江县养殖对虾病毒性疾病的调查研究

对福建省连江县养殖对虾的虾病流行情况和发病规律及流行过程中水环境化学、浮游植物、微生物等的动态变化进行了调查，研究了对虾疾病的传染性、传播途径，以及病原与各因子的相互关系。结果表明：不同的对虾种类发病症状基本一致，典型症状为甲壳白斑，甲壳下水肿。该疾病的流行过程可分为三个阶段：发病前期（１－７ｄ）；发病中期（持续时间约１０—１５ｄ）；发病晚期（对虾暴发性死亡时间仅为２—５ｄ）。该流行病是杆状病毒引起并发细菌性传染病，可借海水和病虾尸体为媒介，通过消化道和体表面在不同种虾体间迅速传播。

弓形虫SAG1重组抗原的特征及其应用的研究

用昆虫细胞中表达的弓形虫主要表面抗原（SAGI）为试剂检测弓形虫IgG抗体。方法将昆虫细胞中表达的重组蛋白（rSAGI）通过单克隆抗体制备的亲和层析柱纯化．用纯化的rSAGI为抗原试剂检测弓形虫病血清，与其他试剂盒检测结果比较，然后再用免疫印迹试验确认．结果重组杆状病毒Bac304感染的Sf9细胞与空载bacmid感染的细胞比较，Bac304的SDS裂解物比空载株在SDS—PAGE考马斯亮蓝染色胶上明显多出一条带，分子量约为30kDa．在恒定条件下，分批收集Bac304感染的昆虫细胞，用免疫荧光鉴定，95％以上的细胞可被感染．在Balb／C小鼠中生产的抗SAGI的单抗XllA10C与Bac304的表达产物发生反应，用纯化的单抗与CNBr—Sepharose4B偶联制备的亲和层析柱从1．3X109感染Bac304的昆虫细胞裂解液中获得1．4mgrSAGI，以纯化rSAGI为抗原，采用EIA法检测了412份妇产科就诊者及不明原因淋巴结肿大等病人血清，检出弓形虫lgG抗体阳性13例，其中10例经全虫体蛋白印迹法确认为阳性．结论昆虫细胞表达的重组SAG1能识别人弓形虫病血清，可以用作诊断试剂．

生物素标记庆大霉素耐药基因探针

采用低熔点琼脂糖挖块法回收源自澳大利亚的pDG0103的2.0kb的BamHI-HindⅢ片段(携带2″-0-腺苷转移酶[ANT(2″)]基因)和自建的pBY102的4.9kb的PstI-EcoRI片段。以缺口平移法,用生物素-7-dATP进行标记,制备成探针。通过Southern印迹杂交和菌落原位杂交,证明澳源的Gm-DNA探针与美国的探针同源,而与作者构建的Gm-DNA探针不同源。再以菌落原位杂交法,用生物素标记的上述两种探针分别检测106株庆大霉素(Gm)耐药的细菌,结果表明这些菌株携带的Gm钝化酶基因的类型不止一种。

03型伪结核杆菌毒力基因的研究

用质粒消除技术,从03型伪结核杆菌毒力株中筛选出同宗的质粒治愈株,后者在缺失了一个分子量约为66kb(43.3MD)的大质粒的同时,丧失了对动物的侵袭性,细菌毒力消失。证实03型伪结核杆菌的毒力基因是位于染色体外的环状质粒DNA上,该质粒还编码了细菌的两个表型,1.外膜蛋白的产生;2.依赖钙离子生长。本文提示:要判定从临床上分离的03型伪结核杆菌是否具有毒力,应以检测其是否具有66kb的毒力质粒为标准。

聚合酶链反应在诊断结核性脑膜炎中的应用

聚合酶链反应在诊断结核性脑膜炎中的应用吴钢，许国英，林应锵，占丽钦，高凤鸣，包幼迪，慕容慎行聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术作为结核性脑膜炎（简称结脑）的基因诊断技术，与传统的诊断方法比较，具有特异、敏感、快速的优点［１、２］。目前，国内外报道较多［１、２...