胸腺瘤相关重症肌无力患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对Treg细胞功能的影响

目的:探讨胸腺瘤相关重症肌无力(TAMG)患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对调节T细胞(Treg)叉状头转录因子P3(FOXP3)表达及分泌转化生长因子(TGF)-β1、白细胞介素(IL)-10功能的影响。方法:收集TAMG患者及先天性心脏病无胸腺疾病的患者(对照组)胸腺组织,分离培养胸腺上皮细胞,使用广谱角蛋白(p-CK)和波形蛋白(Vimentin)染色行免疫荧光鉴定;膜亲和柱法提取胸腺上皮细胞外泌体并行透射电子显微镜(TEM)、粒径分析(NTA)及western blotting检测鉴定;磁珠分选法分离胸腺上皮细胞中Treg细胞,流式细胞术检测纯度;Treg细胞与外泌体共培养,行外泌体染色示踪实验,检测FOXP3表达及培养上清液TGF-β1、IL-10水平。结果:分离细胞呈长梭形,生长良好,免疫荧光p-CK呈阳性,Vimentin呈阴性,细胞为胸腺上皮细胞。TEM、NTA、western blotting结果提示提取物为外泌体。流式细胞术检测Treg细胞纯度>90%,纯度较好。外泌体染色示踪结果提示Treg细胞可吞噬胸腺上皮细胞外泌体,与TAMG组胸腺上皮细胞外泌体共培养后Treg细胞FOXP3表达减少(P<0.01),TGF-β1、IL-10分泌减少(P<0.01)。结论:Treg细胞可吞噬TAMG瘤旁胸腺上皮细胞外泌体,导致FOXP3表达减少、分泌TGF-β1、IL-10减少,免疫抑制功能减弱,其可能参与TAMG的发病过程。