医院药物临床试验质量监控信息化管理的实践与思考

介绍药物临床试验质量监控信息管理系统,其通过对医院医生工作站、医院综合管理平台、LIS、HIS的网络连接,实现了对临床试验实施过程的全程网络管理,加强了临床试验的质量监控,节约了管理成本,提高了工作效率。

中国部分地区结核分支杆菌耐利福平、异烟肼和链酶素耐药基因的检测

目的研究我国部分地区耐利福平(RFP)、异烟肼(INH)和链酶素(SM)结核分支杆菌临床分离株rpoB基因、KatGr、psL基因突变情况,评价其耐药分子机制。方法采用PCR和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)对373株结核分支杆菌临床分离株(其中敏感株148株,耐RFPI、NH、SM株共225株)rpoB基因、KatG和rpsL基因进行检测。并对其中19株SSCP阴性的耐RFP株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果安徽省、北京市、上海市、河北省、河南省、辽宁省、吉林省结核分支杆菌耐RFP临床分离株rpoB基因突变率分别为90%、91%、90%、91%、90%、93%、91%;KatG基因突变率分别为69%、63%、71%、68%、67%、68%、65%,rpsL基因突变率71%、69%、74%、68%、70%、61%、76%,分别为经统计学处理不同地区间无显著性差异(χ2=0.46,P>0.05)。同时rpoB基因敏感株均无突变,特异性为100%;KatG基因有3株发生突变,特异性为98%。19株SSCP阴性耐药株中经测序6株在531位密码子TCG→TTG,1株526位密码子CAC→TAC,7株发生在516位密码子GAC→GTC,5株未改变。结论我国不同地区耐利福平、异烟肼和链霉素的rpoB、KatGr、psL耐药基因突变率大致相同,rpoB基因、KatG和rpsL基因突变分别是耐RFP、INH和SM结核分支杆菌耐药性产生的主要分子机制,PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFPI、NH和SM耐药性。

PCR-SSCP方法用于痰标本中结核分支杆菌耐药基因的检测

目的探讨采用直接检测结核病人痰标本中rpoB基因和KatG基因突变。评价该方法检测结核分支杆菌对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性。方法用PCR-SSCP技术分析,对35例耐INH(或含耐异烟肼)、63例耐RFP(或含耐RFP)的肺结核病人痰标本和20例非结核性肺部疾病组痰标本进行rpoB和KatG基因突变的检测。结果以结核分支杆菌H37RV为对照,63例耐RFP痰标本中57例PCR扩增阳性,其中46例SSCP图谱与H37Rv标准株有差异,rpoB突变率为65.2%。35例耐INH肺结核病人痰标本有20例扩增阳性,15例SSCP图谱与H37Rv标准株有差异,突变率为42.8%。20例非结核病人痰标本rpoB基因和KatG基因扩增均为阴性。结论PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的重要方法之一。

风疹病毒E1蛋白克隆表达及应用

目的构建表达风疹病毒蛋白抗原的重组质粒及工程菌,获得纯化的E1蛋白抗原,用于检测风疹病毒特异性抗体IgM。方法克隆表达风疹病毒E1重组蛋白,利用产物建立IgM捕获ELISA方法鉴定其抗原性及实用性。结果表达纯化的E1蛋白经酶标记建立IgM捕获ELISA方法,检测53份抗风疹病毒IgM阳性血清和67份阴性血清,用酶标记E1蛋白建立的捕获ELISA法阳性检出率98.1%,阴性检出率100%,与意大利SORIN公司试剂盒检测结果比较,无统计学意义(P>0.05);其中1份风疹病毒(IgM)阳性血清1∶16稀释后仍能与抗原反应,初步表明E1蛋白抗原表位有较好的抗原特异性。结论高效表达纯化的E1蛋白抗原性强,利用其建立的IgM捕获ELISA方法,可用于检测风疹病毒抗体。

8种呼吸道感染病原体抗原片的研制及临床检测

呼吸道传染病是高发流行病,具有人群普遍易感,诱发原因广泛,传染性强,传播速度迅速,较难控制等特点[1],如今呼吸道感染已占儿科门诊的60%以上。而快速高效地诊断出患者感染的呼吸道病原体类型有助于尽快确定治疗方案,防止病情加重和迁延不愈。血清学检测是临床常用的呼吸道传染病初步筛查、诊断方法。间接免疫荧光法是临床检测的经典及金标准实验[2],因其方便、灵敏、特异、高效的特点常用于临床病原体的初步诊断。

耐多药结核分支杆菌基因突变在老年结核病病人耐药性检测中的应用

目的探讨耐多药结核病(MDR-TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在结核病耐药性检测中的应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析了同时耐异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)的多耐药临床分离株和35株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。结果以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常,其特异性为100%;KatG基因有2株图谱异常,特异性为94.3%。71株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失,其PCR扩增产物SSCP分析结果表明36株多耐药临床分离株中,32株rPOB基因图谱异常;21株KatG基因图谱异常;26株rpsL基因图谱异常。其敏感性分别为rPOB(88.9%)、KatG(58.3%),rpsL(72.2%)。结论结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。

中西医结合治疗肝硬化腹水38例

肝硬化是一种以肝脏损害为主要表现的慢性全身性疾病,肝硬化的发生是因各种慢性肝炎,或广泛的肝脏实质变性发展的结果,而肝硬化腹水的发生一般与门静脉高压、血浆白蛋白的降低,水盐代谢障碍、淋巴回流受阻等因素有关,是临床的急重症之一。笔者自1993年以来,采用中西医结合的方法治疗肝硬化腹水38例,收到较好的疗效,兹报道如下:

呼吸道合胞病毒F蛋白基因片段真核细胞表达纯化及其ELISA建立的研究

目的表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA),为进一步大量表达F基因、构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础。方法逆转录并扩增F基因中的F1片段,连接到载体中,转染真核细胞,诱导并纯化重组F蛋白。将纯化重组F蛋白免疫小鼠制备抗体血清,并建立间接夹心ELISA。通过100份标本应用"金标法"对所建立的方法进行验证。结果成功获得F基因中F1片段的扩增产物,筛选阳性克隆,得到相对分子质量为45000的大量表达蛋白。确定了间接夹心ELISA的最佳反应条件和工作浓度;鼠抗F1IgG最佳质量浓度为3.2μg/mL,样品最佳反应时间为37℃70 min,酶标兔抗鼠IgG最佳工作浓度为1∶6 000。与"金标法"对比,阳性样品的变异系数为3.2%～8.6%,阴性样品的变异系数为5.1%～8.3%,均小于10.0%,表明该方法有良好的重复性。结论构建的重组真核细胞能够大量表达F蛋白,纯化的F蛋白具有很好的免疫原性,制备的抗体血清用于ELISA能够得到准确的检测结果。

补肾壮骨汤治疗膝关节骨性关节炎42例

目的:探讨中药补肾壮骨汤对膝关节骨性关节炎的临床疗效.方法:全部病例(42例)诊断均符合1995年美国风湿病协会修订的有关膝部骨性关节炎诊断标准.服用自拟补肾壮骨汤治疗,每日1剂,4周为1疗程,观察1～3个疗程进行疗效评价.结果:临床治愈23例(54.3%),显效10例(23.8%)有效6例(14.3%),无效3例(7.1%),总有效率为92.9%.结论:补肾壮骨汤治疗膝关节骨性关节炎具有缓解疼痛、消除肿胀、防止复发、达到临床治愈或控制发作的可靠作用,其疗效机制有待进一步研究.

应用手足口病病原体验证改良的DNase-SISPA方法检测未知病毒感染的特异性

目的以引起手足口病的肠道病毒EV71为研究对象,在DNaseI-非序列依赖的单引物扩增技术的基础上建立感染性疾病RNA病毒性病原体的检测方法。方法根据卫生部发布的《手足口病预防控制指南》(2008年版)附件手足口病实验室检测方案(试行),收集临床诊断手足口病的患儿粪便,经实验室RT-PCR检测阳性后,进行过滤、DNase消化处理。反转录、合成病毒RNA的双链cDNA,Taq I酶切双链cDNA,加接头分子,并以接头分子为引物非特异扩增病原基因,测序并进行序列分析。结果非序列依赖的单引物扩增粪便标本中外源核酸得到多个DNA片段;将所有PCR产物克隆测序,有的序列与已知病原EV71基因序列同源性达99%;有的序列与单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes) strain CDC 54007同源性达81%。结论应用DNase处理及非序列依赖的单引物扩增方法可以检测粪便标本中的RNA病毒性病原,并应用该改良技术检测到单核细胞增生李斯特菌。

结核分枝杆菌Ag85A/MPT-64融合基因DNA疫苗的构建及免疫研究中ELISPOT技术的应用

目的构建结核分枝杆菌蛋白Ag85A/MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗,并利用ELISPOT技术检测其免疫原性。方法利用PCR和基因克隆技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Ag85A/MPT-64编码基因,构建真核表达载体,用酶切和双向DNA测序进行鉴定。鉴定正确的阳性克隆重组质粒,肌注免疫小鼠,3周后用ELISPOT法检测抗体滴度。结果 构建到真核载体中的结核分枝杆菌H37Rv株Ag85A/MPT-64融合基因经序列测定证实无突变。ELISPOT法检测几何平均滴度为1∶1 000。结论以Ag85A/MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗的成功构建和表达以及ELISPOT技术的应用,为进一步研究其在结核病与肿瘤防治方面的作用奠定了基础。

结核分枝杆菌CFP10和ESAT6优势肽段融合蛋白的表达及其免疫学研究

目的:构建结核分枝杆菌分泌蛋白的重组质粒及工程菌,获得纯化的CFP10-ESAT6P蛋白抗原,制备初步用于检测结核病患者的特异性抗体。方法:根据编码结核分枝杆菌基因序列设计引物,克隆表达结核CFP10-ESAT6重组蛋白,表达产物免疫新西兰大白兔,其中80%可产生高价的抗体。利用产物建立IgG间接ELISA方法鉴定其抗原性及实用性。结果:应用ELISA法,通过检测113例结核病患者、82例非结核病患者及健康献血员,CFP10-ESAT6P和对照PPD对结核病患者血清检测的敏感性分别为89.4%和79.6%,特异性分别为96.3%和93.9%。结论:高效表达纯化的CFP10-ESAT6蛋白抗原性强,可用于结核病患者抗体的检测,用于结核病的辅助诊断。

复方中药治疗脂肪肝伴高脂血症的疗效

目的:探讨消脂化瘀汤治疗脂肪肝伴高脂血症患者的降脂作用机理及疗效评价。方法:应用消脂化瘀汤治疗47例脂肪肝伴高脂血症患者(观察组),并以45例服用西药东宝肝泰片作为对照,于服药前后检测胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDLC)及全血比黏度。结果:观察组治疗后TC、TG与治疗前比较均降低(P<0.01),观察组TC、TG降低作用明显优于对照组(P<0.01);HDLC治疗后虽有升高,但两组比较差异无显著性(P>0.05);观察组治疗后全血比黏度、血浆比黏度、还原黏度与对照组比较明显降低(P<0.01)。结论:消脂化瘀汤在降脂的同时,有一定降低全血比黏度的作用,是一种有效的中药降脂合剂。

A组轮状病毒VP7基因表达及ELISA检测的方法研究

目的纯化原核系统中表达的A组轮状病毒VP7基因,建立间接ELISA方法,为进一步大量表达VP7基因,构建基因工程疫苗和建立快速临床检测奠定基础。方法反转录并扩增VP7基因,连接到载体中,转换乳酸杆菌,诱导并纯化重组蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备抗血清,并建立间接ELISA方法。结果成功获得VP7基因的扩增片段,筛选阳性克隆,得到大小为28 kD的大量表达蛋白。确定了间接ELISA法的最佳反应条件和工作浓度。结论构建的重组乳酸杆菌能够大量表达VP7蛋白,纯化的VP7蛋白有很好的免疫原性,制备的抗血清用于ELISA方法能够得到准确的检测结果。

结核分枝杆菌耐药分析及基因检测研究

目的了解长春市结核分支杆菌菌株的耐药状况,建立适合我国国情的结核分支杆菌耐药株的快速检测手段。方法采用普通改良罗氏培养,对2004年7月-2007年12月间分离培养的结核分支杆菌进行菌株鉴定及药物敏感实验,并利用PCR反向斑点杂交技术(RDB)和测序方法对rpoBr、psL、KatG和embB基因进行检测。结果 625株结核分支杆菌中,其耐药比例为32.96%。耐药顺位次序为INH 18.17%、RIF 17.26%S、M 10.74%、EMB 7.31%。复治患者的耐药率高于初治患者。在随机抽取的菌株中,RDB检出的rpoBr、psL、KatG和embB基因突变率分别为88.9%、83.3%、91.6%和86.1%,和测序结果的符合率分别为87.9%,87.9%、91.4%和89.1%。结论长春市结核病患者总耐药比例高于我国结核病总耐药率,耐药状况具有本市的耐药特点,耐药的产生与菌株基因突变有较为密切的关系。结核病人耐药情况比较严重,需要更严格的执行结核病控制策略,防止耐药病人及耐药菌株的产生和传播。