口蹄疫病毒O型全自动磁微粒CLIA抗体定量检测方法的建立

【背景】口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病,疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施。免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据,是免疫工作和疫情防控必不可少的关键环节,因此建立高效、快速、全自动的抗体检测方法具有重要意义。【目的】基于磁微粒(micromagnetic particles,MPs)化学发光免疫分析技术(CLIA),建立一种新型、全自动、可定量的口蹄疫病毒O型抗体检测方法,为口蹄疫免疫监测和疫情防控提供技术支撑。【方法】使用纳米材料磁微粒为固相载体和分离载体包被捕获抗体,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记检测抗体,经过条件优化建立了一种新型磁微粒CLIA检测方法(magnetic particle chemiluminescence immunoassay,MP-CLIA)。本方法首先加入磁微粒-兔抗偶联物(magnetic particle-polyclonal antibodies,MPs-p Abs)、待测样本、口蹄疫病毒O型抗原,37℃孵育;再加入适量酶标抗体(ALP-p Abs),37℃孵育;最后加入化学发光底物AMPPD,检测相对发光强度(relative light unit,RLU)。研究通过检测标准品拟合标准曲线,并应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)确定检测方法的判定标准;利用质控样本进行方法学评价,同时检测田间样本,并和液相阻断ELISA(LPB-ELISA)比对,验证临床检测效果。【结果】优化后最佳反应条件为磁微粒浓度0.25 mg·m L^(-1)、口蹄疫病毒O型抗原1﹕1000稀释、酶标抗体1﹕2000稀释、加样量20μL。整个检测过程均在全自动化学发光免疫分析仪中完成,反应时间20 min,在抗体含量0—1280 U(效价0—1﹕2048)范围内标准曲线R2>0.99,可进行定量检测。该方法敏感性为94.66%;特异性为97.10%,检测口蹄疫A型、Asia I型血清型特异性为97.14%,与塞内卡病毒(SVV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、牛流行热病毒(BEFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、羊痘病毒(QRFV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体阳性血清无交叉反应;重复检测变异系数CV值<10%;田间样本检测结果与LPB-ELISA符合率为94.69%,定量结果相关系数R2为0.8473,P<0.0001,相关性显著。【结论】建立的MP-CLIA方法耗时短、操作简便,配套国产全自动化学发光仪,可进行全自动化检测,是一种新型、高效的口蹄疫病毒O型抗体定量检测方法,本方法对应的试剂盒已经完成中试生产和临床检测试验,在全国不同区域试用效果较好,具有较高的临床应用价值。

Pt-Pd合金纳米颗粒标记口蹄疫A型病毒抗体检测的免疫层析方法

[目的]为建立一种新型、高灵敏度,可直观与定量分析的快速检测方法,本研究创新使用具有氧化还原酶活性的合金纳米材料,将其作为标记物制备免疫层析试纸。待反应结束,使用TMB显色剂对免疫反应进行级联放大,可以显著提高检测的灵敏度,不仅可直观判断,也可精确定量分析,这为免疫层析技术标志物筛选与敏感性提高开拓了新的思路与方法。[方法]采用超声水浴法,通过抗坏血酸(AA)还原K2Ptcl4和Na2Pdcl4成功出制备Pt-Pd合金纳米颗粒,将其用于标记口蹄疫A型纯化抗原FMDV-146S,作为捕获抗原纳米标记物,再将纯化的A型表达抗原及其抗体(FMDV-146S-Ab)包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线(T线)和质控线(C线),经条件优化,建立口蹄疫A型病毒抗体Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条检测方法。对该免疫层析检测技术进行方法学考核,检测结果定量分析并建立标准曲线,同时与LPB-ELISA进行结果比对。[结果]该试纸条可在10 min内完成定性和定量检测,定量检测灵敏度为1:28/test,线性范围1:26/test—1:29/test;检测A型FMDV阳性血清,敏感性为98%,检测FMDV阴性血清、O型和Asia 1型的FMDV阳性血清以及其他动物常见病毒病阳性血清,特异性为94.8%;该试纸条重复检测效果良好;与OIE推荐LPB-ELISA法比较,相关性好,相关系数为0.9112。[结论]本研究开拓采用Pt-Pd合金纳米颗粒为标记物建立免疫层析方法,并首次应用于口蹄疫病毒抗体检测,结果证实其具备较高灵敏度,相比胶体金灵敏度可提高24倍,同时具备可操作性与重现性。该研究是快速免疫层析技术的新尝试,为合金类纳米材料应用提供新的思路,未来具有实践应用前景。

关于小学数学教学中学生独立思考能力培养的探析

学生独立思考能力的培养是小学数学教学中非常重要的教学任务之一,特别是随着素质教育观念的不断深入以及新课程标准的提出,小学数学的教学重点开始出现了很大的变化,逐渐从传统的教学观念脱离出来,开始注重学生总和学习能力的培养,学生独立思想能力作为小学数学综合能力培养中非常重要的一部分内容深受重视。本文首先分析了小学数学教学中学生独立思考能力培养的意义,其次提出了几点培养学生独立思考能力的建议。

O、A、Asia 1型口蹄疫病毒胶体金定量检测免疫层析方法的建立

旨在建立口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗原血清型的快速分型和定量的检测方法,利用双抗体夹心法,将口蹄疫病毒的兔抗及豚鼠抗体作为标记胶体金与NC膜检测带的原料,分别制备出检测O、A、Asia 1血清型的3种层析试纸卡。通过对标定的抗原标准品146S检测,拟合出定量标准曲线。免疫层析方法的质量验证通过特异性、敏感性、重复性及与蔗糖密度梯度法(sucrose density gradient, SDG)的相关性进行评价。结果显示:建立的快速定量检测方法,3种血清型口蹄疫病毒间无交叉反应,同时与其他非口蹄疫病毒,如塞内卡病毒A型(SVA)、猪水疱病病毒(SVDV)、猪水疱性口炎病毒(VSV)无非特异反应;敏感性研究,对O、A、Asia 1型病毒的最低检出量分别为0.567、0.693、0.219μg·mL^(-1),拟合的3条标准曲线的线性相关系数R~2>0.97,新建立方法与蔗糖密度梯度法检测结果的相关系数均>0.9, 3种层析试纸卡的变异系数均小于10%。综上表明,建立的口蹄疫O、A、Asia1型病毒胶体金免疫层析定量检测试纸卡方法,可以用于口蹄疫病毒抗原快速鉴别、血清分型与146S定量检测。

临潭县水土流失现状及治理措施探讨

对临潭过去的水保方面的经验教训作认真的研究总结,对今后水保的方向进行新的探讨。

小学语文生活化教学探究

教学模式一直是教育界及家长和学生一直热烈讨论的问题,传统教学模式往往以讲授的方式进行传达,把教材抽象以及难以理解的问题,通过表述和例题的方式进行具象化、简单化。但是就是因为这种单一的方式,使多数教学课程成为枯燥乏味的学科之一,这种缺乏情感的教学模式不但不容易被学生所认可,反而击退了学生对于语文课程的学习兴趣,不仅无法保证教育教学质量,而且还无法为国家和社会培养新型的人才。

毛诃子提取物对小鼠肝损伤的保护作用

目的研究毛诃子提取物对四氯化碳(CCl4)和异烟肼(INH)诱导的肝损伤的保护作用。方法给药2000,4000 mg/kg,72 h内观察小鼠中毒迹象和死亡数;建立CCl4对小鼠肝损伤模型,检测毛诃子提取物对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肝匀浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)的影响;建立INH对小鼠肝损伤模型,检测肝匀浆T-SOD活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量,进行组织病理学分析。结果给药2000mg/kg,72 h内小鼠无异常反应;毛诃子提取物明显降低了CCl4肝损伤小鼠血清ALT、AST活性,提高了肝脏T-SOD活性;该提取物明显提高了INH肝损伤血清T-SOD活性和肝脏GSH-Px活性,降低了肝脏MDA含量,减少了异烟肼对肝脏的破坏。结论毛诃子提取物毒性小,具有一定肝保护作用,它可以和异烟肼联用,减少其对肝脏的损伤。

口蹄疫A型病毒不同毒株抗原反应性

旨在对口蹄疫A型病毒(FMDV)3种毒株制备的不同抗原进行反应性比较分析,筛选最合适的免疫学诊断抗原,为进一步研究利用该抗原进行血清学诊断奠定基础。分别选择AF/72毒株、Re-A/WH/09毒株制备纯化146S抗原和VP1表达蛋白以及A/GD/MM/13毒株VP1表达蛋白作为备选抗原,利用间接ELISA检测方法与胶体金免疫层析检测方法(GICA),对100份背景清晰的田间样本血清进行平行检测,比较不同抗原的反应性。结果显示,A/GD/MM/13株抗原活性最低,间接ELISA方法检测AF/72株、Re-A/WH/09株纯化146S抗原和VP1表达蛋白对于A型阳性血清敏感性分别为90.00%、86.67%、78.33%和76.67%,与O型、Asia1型阳性血清和阴性血清特异性结果分别为95.00%、87.50%、75.00%和70.00%。GICA方法检测AF/72株、Re-A/WH/09株纯化146S抗原对于A型阳性血清敏感性分别为95.00%和83.33%,与O型、Asia1型阳性血清和阴性血清特异性结果分别为92.50%和87.50%。本研究通过FMDV-A型不同毒株抗原反应性的比较试验证实,AF/72株纯化146S抗原在间接ELISA和GICA 2种方法中均显示更好的敏感性、特异性,且在纯化过程中,收获量更多、浓度更高,为最合适的诊断用抗原,所建立的诊断方法可获得满意的检测结果。

如何提高高中生的英语听力水平

听力是一项综合语言能力的测试，它所涉及的内容广泛，题型灵活，要想靠一时的突击训练就提高听力成绩是不可能的。听力水平的提高是一个长期的、潜移默化的过程，在这一个过程中，教师需要从以下几方面进行指导。

论低段孩子行为习惯养成教育中父母的重要性

随着教育模式的不断改变以及素质教育的不断深入,人们越来越关注孩子自身素质的培养,尤其是在低段孩子行为习惯养成教育中,学校以及家长投入的精力越来越多,然而,在部分低段孩子身上,仍然存在很好不良行为习惯,这与家庭教育有着不可分割的关系。本文将对家庭教育中父母在低段孩子行为习惯养成教育中的重要性作一分析,希望有助于我国家庭教育的进步。