酶解-柱前衍生UPLC法检测特医食品中天冬酰胺及谷氨酰胺

建立酶水解-丹磺酰氯柱前衍生高效液相色谱法检测特殊医学用途配方食品(FSMP)中天冬酰胺(Asn)和谷氨酰胺(Gln)的方法。样品经灰色链霉菌蛋白酶(Pronase E)酶解后,取上清液与Dns-Cl进行柱前衍生,衍生化产物经Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以10 mmol/L磷酸氢二钠溶液(pH 6.5)和甲醇作为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。结果表明,两种氨基酸在0.500~50.0μg/mL浓度范围内线性良好(R≥0.999),回收率为95.3%~105%,RSD为0.95%~3.22%。方法用2种蛋白标准品进行酶切效率与实测含量验证,准确度良好(δ<10%),可用于FSMP中Asn和Gln含量检测,并正在用于制定食品安全国家标准。

粪便短链脂肪酸的测定方法优化及联合补充纳豆红曲对短链脂肪酸水平的影响

目的建立液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法测定粪便短链脂肪酸(SCFAs),并检测经纳豆红曲干预后小鼠粪便中SCFAs的水平。方法利用2-硝基苯肼盐酸盐(2-NPH·HCl)对粪便样本进行衍生,上清液萃取吹干后初始流动相复溶上机。将41只7周龄~8周龄ApoE-/-雄性小鼠随机分成4组:低脂饲料组(LFD)、高脂高胆固醇饲料组(HFD)、低脂饲料+0.3 g/kg纳豆红曲组(LFD+NR)和高脂高胆固醇饲料+0.3 g/kg纳豆红曲组(HFD+NR)。干预12周后检测粪便SCFAs水平和空腹血糖水平。结果目标待测物在LC-MS/MS下分离良好。所有待测物线性相关系数在0.997以上,回收率均在80.95%~119.45%,精密度均在0.2%~5.4%,满足方法学要求。联合补充纳豆红曲12周增加LFD饲养的ApoE-/-小鼠粪便丙酸和异丁酸水平。粪便中乙酸与空腹血糖水平成负相关,辛酸与空腹血糖水平成正相关。结论通过LC-MS/MS测定粪便SCFAs水平的方法准确度、灵敏度高,定量准确。粪便SCFAs含量与空腹血糖水平具有相关性,提示纳豆红曲可能通过影响粪便SCFAs含量影响血糖水平,需进一步探索机制。