肉鸡圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌混合感染的检测与分析

为查明福建省龙岩市某鸡场肉鸡消瘦、呼吸困难、病死率升高原因,对发病鸡进行细菌分离鉴定、16S rDNA鉴定、荚膜分型检测、药物敏感试验等分析;以及进行病毒核酸PCR检测、遗传进化分析。结果显示,从病鸡中分离的细菌在血平板上形成圆形、微突起、表面光滑、奶油状的菌落;分离菌16S rDNA核苷酸序列与GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌的同源性达到99.9%以上,菌株荚膜为A型;该菌对哌拉西林、头孢氨苄、庆大霉素等药物均表现为高度敏感;从病鸡中检测出圆圈病毒3型(GyV3)VP2基因,与GenBank(登录号MK089248)GyV3同源性最高(99.9%)。结果表明,该鸡场发生圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌引起的混合感染病例。

PCV2对体外培养仔猪脾细胞分泌细胞因子的动态影响

为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV2)引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的机理,选取5头35日龄PCV2血清抗体阴性的断奶仔猪,无菌取脾脏制成单个细胞悬液,体外培养,分PCV2感染组与对照组。分别在培养后0 h、6 h、12 h、24 h收获细胞培养上清,用猪特异性ELISA试剂盒测定上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)的含量。结果显示:病毒组IL-1β和IL-6在不同时间点的含量变化均不显著(P>0.05),IL-1β在6 h、24 h略高于对照组,12 h则低于对照组;IL-6除在6 h高于对照组外,其余时间点均低于对照组;病毒组TNF-α和IL-10的含量在6 h、12 h、24 h均高于对照组,且TNF-α在6 h和24 h极显著升高(P<0.01),而IL-10在12 h显著高于对照组(P<0.05)。上述结果表明:PCV2能影响体外培养的仔猪脾细胞某些细胞因子的分泌,而且可能通过TNF-α的高表达促使机体产生全身炎症反应综合征甚至多系统衰竭,而通过IL-10的高表达促使机体产生免疫抑制。

犬β-防御素cBD103的原核表达和纯化

将犬β-防御素103(canineβ-defensin 103,cBD103)基因亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-cBD103,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析纯化该蛋白,并用肠激酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果表明,质粒pET-cBD103经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,大肠埃希菌中成功表达出目的蛋白,蛋白大小约为24ku,以可溶性表达为主。经过纯化和酶切,得到大小8ku的cBD103,与预期大小一致。该研究在大肠埃希菌中表达了目的蛋白,为下一步大规模制备cBD103奠定了基础。

黏膜免疫:在动物疫病免疫防控中的重要地位和作用

黏膜是动物机体内表面积最大的一个组织,由呼吸道、消化道、泌尿生殖道、眼角膜、内耳以及多种外分泌腺的管道黏膜所构成.它是动物机体与内、外环境进行物质交换和信息交流的重要部位,同时也是多种病原微生物及其他抗原侵入机体的主要门户.报道指出：95%以上的传染病病原微生物的入侵门户是由黏膜入侵机体.

规模化猪场流行性腹泻防控案例分析

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起的急性、高度接触性传染病。其毒株的高度变异性给该病的防控带来了难度。福建某规模化养猪场发生腹泻疫情,通过胶体金检测确诊为猪流行性腹泻病毒感染。疫病初期通过返饲与疫苗肌肉注射等方式进行防控,疫情未得到有效控制。为快速控制疫情,结合猪流行性腹泻病毒的发病与排毒规律,从"降低排毒、激发黏膜免疫、构筑免疫屏障、切断传染源、加强饲养管理"等角度,提出"三打两喷+仔猪喷鼻"的疫情防控方案,方案执行1周,腹泻疫情得到有效控制,发病率由90%以上降低到8.60%。同时,该方案在四川地区24个规模猪场得到了有效的验证。

丁酸对大肠杆菌生长曲线的影响

本试验主要研究丁酸对大肠杆菌生长曲线的影响,并用醋酸进行对比试验,为丁酸代替饲用抗生素的研究提供一定的依据。采用牛津杯法检测丁酸、醋酸(0.125%~4%)对大肠杆菌的抑菌效果;并使用酶标仪测定细菌在LB肉汤(0.025%~0.1%)中0~24 h的OD600值,根据相应数值绘制大肠杆菌的生长曲线。在牛津杯法中,4%丁酸、醋酸抑菌效果最好,抑菌圈直径分别达22 mm、28 mm;浓度为0.5%时,抑菌圈直径仅为9 mm、10 mm;浓度为0.25%、0.125%时,没有出现明显的抑菌圈。酶标仪测OD值法中,丁酸、醋酸浓度为0.1%时,大肠杆菌经过24 h检测其OD_(600)值基本不变;浓度为0.075%的OD值在19 h才有轻微增长。丁酸和醋酸对大肠杆菌生长均有抑制作用,浓度越高对大肠杆菌的生长抑制作用越大。

猪流行性腹泻防控难点及注意事项

猪流行性腹泻（Procine Epidemic Diarrhea,PED）是由冠状病毒属猪流行性腹泻病毒（Procine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）引起的一种急性、高度接触性猪肠道传染病,临床上常引起以产房仔猪为主的猪只发病。仔猪感染PEDV后,出现以呕吐、脱水和水样腹泻为主要特征的临床症状。该病多发于冬春季节,不同猪场发病率存在较大差异,但病死率很高,给猪场生产带来极大危害。1 PED流行病学特征猪是PEDV的自然宿主,不同品种、年龄、性别的猪均易感。

我国PEDV毒株结构蛋白遗传变异情况分析

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的急性、高度接触性传染病。2010年前,我国主要以散发为主;2010年后,该病在我国全面暴发。大量的研究表明,PEDV毒株发生了变异。文章对PEDV的4个结构蛋白的变异情况进行了分析,对其变异方式和程度进行了阐述。在编码PEDV结构蛋白的基因中,S基因变异程度最大,变异主要发生在S1区域,变异方式涵盖插入、缺失和突变;M基因、E基因和N基因则相对保守,但也出现了一定程度的进化和变异的趋势,变异方式主要为突变。对于不断涌现的变异株,需要正确地、客观地认识毒株与疫苗效果之间的关系。

猪流行性腹泻防控难点及注意事项

猪流行性腹泻（Procine Epidemic Diarrhea,PED）是由冠状病毒属猪流行性腹泻病毒（Procine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）引起的一种急性、高度接触性猪肠道传染病,临床上常引起以产房仔猪为主的猪只发病。仔猪感染PEDV后,出现以呕吐、脱水和水样腹泻为主要特征的临床症状。该病多发于冬春季节,不同猪场发病率存在较大差异,但病死率很高,给猪场生产带来极大危害。

猪圆环病毒体外高效增殖研究进展

猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus diseases,PCVDs)主要通过疫苗产品进行预防,病毒增殖水平与疫苗研发密切相关,随着新发病原PCV3和PCV4的出现和广泛流行,对于实现此类病毒体外高效增殖,已经成为开展相应病毒病原学、发病机制及其疫苗研究方面的瓶颈。鉴于4种猪圆环病毒(PCV)在基因组结构、复制机制等方面的相似性,现对其中已实现体外培养的PCV2,在促进其病毒增殖方面的方法和研究进展进行总结和概括,以期进一步提升现有PCV2增殖水平,并对实现PCV3或PCV4的体外培养提供助力,从而促进PCV疫苗的研发和相关病原学与发病机制的深入研究。

猪流行性腹泻病毒S基因全序列扩增方法的建立及应用

为解决现有猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因全序列获得方法存在的成功率低、操作繁琐的问题,针对NCBI中已知PEDV S基因上下游序列,筛选保守区域用于RT-PCR扩增引物的设计,并从特异性、灵敏性以及临床应用效果等方面对该方法进行了验证。结果显示,成功建立了一种可通过1对引物实现PEDV S基因全序列及其上下游部分片段体外扩增的RT-PCR方法,最适退火温度为52℃。该方法具有高度的特异性,仅可与PEDV的cDNA发生反应,不与猪其他常见病原的cDNA或DNA发生交叉反应;具有良好的灵敏性,检测限为4.44×10^(4)copies/μL;具有良好的普适性,10份PEDV临床阳性样品均可扩增出预期大小的目的片段,并成功实现了S全基因测序和遗传进化分析。该方法的建立简化了S基因全序列体外扩增的方法,提高了体外扩增的成功率。

四川省部分猪场猪链球菌病免疫前后的病原及抗体调查

猪链球菌是重要的人兽共患病病原。本研究通过对四川省部分规模猪场猪链球菌灭活疫苗免疫前、一次免疫后及二次免疫后,分别对猪进行三次采样,检测猪扁桃体拭子中的病原和血清样本抗体水平。结果表明:与免疫前相比,二次免疫后60 d,猪链球菌带菌率由8.75%降到0,而抗体阳性率11.25%上升到100%。同时,部分未免疫猪群存在猪链球菌的隐性感染,猪链球菌病灭活疫苗免疫后,明显减少了猪群中猪链球菌的带菌率,整个猪群未发生猪链球菌病病例。免疫预防有效降低了猪群中猪链球菌带菌率和感染率,是防控猪链球菌病的重要措施之一。

嵌合口蹄疫病毒VP1抗原基因的重组脑心肌炎病毒的构建及鉴定

将口蹄疫病毒(FMDV)VP1全长、VP1 B细胞表位(135~160、198~213aa)和T细胞表位(20~40aa)组合为不同长度分别插入脑心肌炎病毒(EMCV),构建嵌合FMDV VP1重组EMCV。通过融合PCR及酶切的方法,将外源片段插入EMCV L蛋白第5、6位aa之间,得到重组质粒pWSK-EMCV-FMDV VP1、pWSK-EMCV-FMDV VP1(TB)和pWSK-EMCV-FMDV VP1(2TB),将其转染至BSR T7/5细胞拯救重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1、EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)和EMCV/RvBD_(2)W-VP1(2TB),并在BHK-21细胞传代分析重组病毒的生物学特性。结果显示,PCR扩增得到1344 bp、909 bp和1155 bp的外源基因融合片段,表明成功构建了3种重组质粒;3株重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1、EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)和EMCV/RvBD_(2)W-VP1(2TB)在BHK-21细胞传至F5代,病毒滴度分别为1×10^(7.85)TCID_(50)/mL、1×10^(8.06)TCID_(50)/mL、1×10^(7.76)TCID_(50)/mL;通过RT-PCR、IFA等方法对F5代重组病毒进行鉴定,显示重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)可以稳定遗传,且病毒复制水平与亲本病毒相一致,而其他2株重组病毒在传代过程中缺失。结果表明,本研究构建了3个重组EMCV质粒,转染细胞后携带FMDV VP1抗原表位的重组病毒稳定遗传,为后续以EMCV为骨架构建活载体疫苗奠定了理论基础。