卵巢癌中抑癌因子SUFU的表达变化及意义

目的:探讨卵巢癌中抑癌因子SUFU(suppressor of Fused)表达变化及其意义。方法:通过免疫组化检测人卵巢癌和癌旁组织样本中SUFU的表达量,并在数据库大样本和细胞水平上进行验证。同时在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80和卵巢癌细胞系SKOV3分别抑制和过表达SUFU后,运用MTT、EdU、流式细胞术、Western blot、Transwell、平板克隆形成实验等方法分别检测细胞的增殖、凋亡、上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、迁移与侵袭的情况,并随后用Western blot和实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)检测Sonic Hedgehog(SHH)信号通路的下游靶基因GLI1蛋白和m RNA水平。结果:在3例卵巢癌组织样本中,相比于癌旁组织,癌组织中SUFU蛋白表达有一定下调,而这个结果在TCGA数据库大样本中也得到验证;此外在细胞水平上,人正常卵巢上皮细胞IOSE80中SUFU蛋白和m RNA表达水平明显高于卵巢癌细胞SKOV3。进一步在SKOV3细胞中过表达SUFU能够有效抑制其增殖、EMT、克隆形成、迁移和侵袭,促进凋亡;相反,在IOSE80细胞中下调SUFU则能够促进细胞EMT、迁移和侵袭能力。同时,相比正常卵巢上皮细胞,卵巢癌细胞中GLI1 mRNA和蛋白水平明显上升;当在卵巢癌细胞中上调SUFU时,SHH信号通路的下游靶基因GLI1的表达则明显下调。结论:SUFU能够抑制卵巢癌的发生发展,其作用机制与SHH信号通路相关。

PRMT5沉默与TSA处理对Klf4表达的影响

[目的]旨在研究PRMT5沉默与TSA处理抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性对人肝癌Hep G2细胞中Klf4基因表达的影响。[方法]采取siRNA转染HepG2细胞的方法沉默PRMT5,TSA处理抑制HDAC,通过RT-PCR、luciferase assay、Western Blotting检测PRMT5沉默和TSA处理对Klf4表达的影响。[结果]在HepG2细胞中转染的三组PRMT5 siRNA均能有效干扰PRMT5的表达,其中si PRMT5-1对于PRMT5 mRNA和蛋白的干扰效果最好。TSA处理细胞后,组蛋白乙酰化修饰H3K9ac增加,HDAC3 mRNA和PRMT5 mRNA表达下降,PRMT5和HDAC1蛋白表达下降。RT-PCR、luciferase assay、Western Blotting结果显示单独沉默PRMT5或用TSA处理细胞,Klf4的转录被激活,而沉默PRMT5的同时用TSA处理细胞对Klf4转录的促进作用更为明显。[结论]PRMT5沉默或TSA处理都能促进Klf4的转录,同时沉默PRMT5和用TSA处理对Klf4的转录激活更强烈,说明PRMT5和HDAC能够协同调控Klf4的转录。