小儿心肺复苏中的几个问题:附243例分析

报道儿科急诊室243例心肺复苏（CPR）结果112例（46％）心跳恢复并送入住院。门诊心跳停止组CPR成功率高于院前停跳组（DOA）；新生儿组和1～5mo婴儿组复苏成功率高于＞5mo小儿组；气管内插管组高于未插管组。入院病儿最终治愈好转出院14例。结果表明：复苏时气管插管和正确使用肾上腺素是提高CPR成功率的有效措施。加强对新生儿和婴幼儿的抢救有重要意义，提出了DOA病儿的抢救指征。

多脏器衰竭患儿血清磷脂酶A_2及肿瘤坏死因子水平的研究

采用ELISA法检测了脏器衰竭患儿36例，健康儿20例血清磷脂酶A2（PLA2）及肿瘤坏死因子（TNF－α）含量，并监测病儿脏器功能及动脉血气，探讨血清PLA2及TNF－α在多脏器衰竭（MOF）发生、发展中的作用及意义。结果：血清PLA2及TNF－α含量在MOF组明显高于单衰组，死亡组显著高于治愈组（P＜0.05）；PLA2与TNF－α、动脉血氧分压呈相关关系。提示：PLA2及TNF－α参与了MOF病理过程，动态监测血清PLA2及TNF－α对MOF判断及预后评估等均有指导性的临床意义。

先天性食管闭锁伴气管食管瘘围术期的呼吸管理

目的 探讨先天性食管闭锁伴气管食管瘘围术期的呼吸管理 ,以减少肺部并发症发生 ,提高治愈率。方法 回顾性分析 8例先天性食管闭锁伴气管食管瘘病儿术前、麻醉术中、术后的呼吸管理过程。结果 6例采取了慢诱导气管内插管保留自主呼吸 ,气管食管瘘管钳闭后完全控制呼吸管理 ,术后胸片显示 ,无明显肺不张及肺炎加重。 2例快诱导病例出现胃胀气 ,气道阻力逐渐增加 ,术后胸片显示肺炎加重并出现肺不张。 8例均无麻醉死亡。 7例治愈出院 ,1例因核黄疸放弃治疗。结论 早诊断、禁食、置胃管、积极有效吸引是减少吸入性肺炎的关键 ;术中麻醉采用慢诱导气管内插管保留自主呼吸与气管食管瘘管钳闭后完全控制呼吸相结合的呼吸管理能有效减少术后肺部并发症。

高氧性肺损伤中MAPK信号途径的表达及其作用机制

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路三亚族ERK,p38,JNK在大鼠高氧性肺损伤动物模型中的表达及作用.方法:24只3周龄Wistar大鼠随机分成4组:空气对照组和高氧暴露3,7和14d组,每组动物6只.高氧暴露组置于常压高氧仓中(O2≥95%),空气对照组置于常压空气中(O2=21%).光镜下观察肺组织病理学改变,采用二步法免疫组化检测磷酸化ERK,p38,JNK在肺组织中的分布.WesternBlot检测磷酸化MAPK蛋白表达变化.结果:高氧暴露3,7d组出现急性肺损伤的典型病理学特征,高氧暴露14d组肺间质及纤维细胞增生明显.免疫组化显示空气对照组仅肺泡上皮细胞及气道上皮细胞见少量磷酸化ERK,p38,JNK阳性表达,高氧暴露组则阳性细胞明显增多,广泛分布于肺内细胞中:肺泡上皮细胞、气道上皮细胞、胸膜间皮细胞、浸润炎细胞及间质纤维细胞,p38阳性表达尤多见于炎性细胞中.WesternBlot显示高氧暴露组较空气对照组磷酸化蛋白表达明显增强,ERK,JNK高氧暴露7d组表达最强(P<0.05),p38在高氧暴露14d组表达最为明显(P<0.05).结论:高浓度氧可激活MAPK信号途径,磷酸化ERK,p38,JNK在高氧损伤肺组织表达明显增加,MAPK三亚族ERK,p38,JNK活性变化在时间上并不具有同步性.

白藜芦醇苷对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的 研究白藜芦醇苷 (PD)对大鼠局灶性脑缺血的保护机制。方法 采用改良的线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型 (MCAO)。将健康成年大鼠随机分为 3组 :假手术组、缺血模型组、缺血前PD处理组。测定脑组织含水量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)、过氧化氢酶 (CAT)及一氧化氮合酶 (NOS)活性 ,并进行病理组织学检查。结果 PD能明显提高缺血脑组织中SOD、GSH -Px、CAT活性 ,降低MDA含量 ,减轻脑水肿 ,并有降低缺血脑组织中NOS活性的趋势 ,病理组织学检查显示 ,PD能改善脑缺血造成的大鼠脑组织损伤。结论 PD对大鼠局灶性脑缺血有明显的保护作用 ,其机制可能是通过有效的拮抗自由基损伤 ,提高脑组织抗氧化能力来实现的。

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离及原代培养

目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AECⅡ,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C(Surfactant proteinc,SPC)的表达。结果:每3～5只胎鼠可获得AECⅡ(36±5)×106,活力98%±2%。镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长,外观呈多边形或立方形。透射电镜可见特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为96%±3%,呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96%以上。结论:利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AECⅡ,能满足体外进一步实验的需要。

急性肺损伤大鼠肺表面活性物质及肺表面活性物质蛋白的研究

目的 :探讨肺表面活性物质 (PS)及肺表面活性物质蛋白 (SP)在内毒素 (LPS)性急性肺损伤 (ALI)中的变化趋势。方法 :成年Wistar大鼠随机分为对照组 (NS组 )和肺损伤组 (ALI组 ) ,ALI组采用LPS诱导建立ALI模型。用定磷法和高效液相色谱法动态监测了NS组和ALI组第 1、3、5、7h大鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中的总磷脂 (TPL)和磷脂各组分 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)的方法检测肺组织SP -A、SP -BmRNA的表达情况 ,此外对肺损伤的病理学改变也进行了对比分析。结果 :与NS组比较 ,ALI组有明显水肿、出血和炎症。BALF中TPL在 1、3、5、7h明显低于NS组 (P <0 .0 5 ) ,卵磷酯胆碱 (PC)在 3、5、7h明显低于NS组 (P <0 .0 5 ) ;而溶血卵磷脂 (LPC)在 1、3、5、7h明显高NS组 (P <0 .0 5 )。肺组织SP -A、SP -BmRNA表达在 3、5、7h明显低于NS组 (P <0 .0 5 )。结论 :ALI存在PS的代谢改变 ,以及SP -A、SP -BmRNA的表达降低 ,PS含量的降低和组分的改变是导致难以纠正的低氧血症重要原因之一。

氧化应激状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡及细胞外信号调节激酶信号转导机制的研究

目的 探讨氧化应激状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ型细胞）修复存活、凋亡及其细胞外信号调节激酶（ERK）对凋亡的调控作用。方法 采用过氧化氢（H2O2）处理体外分离纯化培养的原代大鼠ATⅡ型细胞；用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测H2O2刺激后ATⅡ型细胞磷酸化ERK1／2（p—ERK1／2）的表达，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测细胞存活率；用流式细胞仪检测细胞凋亡率，并观察ERK特异性抑制剂PD98059干预后细胞凋亡的变化。结果 与对照组比较，10μmol／L和100μmol／L的H2O2处理对ATⅡ型细胞存活率和凋亡率无明显影响；500μmol／L和1000μmol／L的H2O2处理可导致ATⅡ型细胞的存活率明显降低，凋亡率显著升高（P均＜0．05），呈剂量依赖性。500μmol／LH2O2处理ATⅡ型细胞30min，细胞存活率和凋亡率均无显著变化；处理180min细胞存活率明显降低，凋亡率明显增高（P均＜0．05），呈时间依赖性。500μmol／LH2O2可刺激P—ERK1／2阳性表达，以刺激30min表达最强；使用ERK抑制剂（PD98059）干预后，ATⅡ型细胞凋亡率明显增高。结论 H2O2可以剂量和时间依赖的方式诱导ATⅡ型细胞凋亡，ERK信号转导途径参与了ATⅡ型细胞的凋亡调控，对氧化应激状态下的ATⅡ型细胞可能起到保护作用。

地塞米松对高氧肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的影响

目的 观察地塞米松对高氧暴露大鼠肺组织中基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)表达的影响,探讨地塞米松治疗高氧肺损伤的作用机制。方法 2周龄Wistar大鼠32只,随机分为空气组和高氧组(各16只)。高氧暴露7 d后,取两组大鼠各8只检测支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量和肺湿/干重比(W/D),并观察肺组织病理学改变。余16只大鼠行肺组织培养,空气组8只作为空气对照组,高氧组8只各设高氧对照组,高氧+地塞米松1×10-8、1×10-6和1×10-4mol/L组,培养24 h后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达。结果①与空气组相比,高氧组肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润;BALF中蛋白含量、W/D明显增高。②高氧对照组MMPs、TIMPs mRNA表达和MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值较空气对照组明显增高。③地塞米松能剂量依赖性下调MMP-2、MMP-9 mRNA表达;对TIMP-1、TIMP-2 mRNA表达有一定程度的抑制效应;随地塞米松浓度的增加,MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值亦逐渐降低。结论 地塞米松下调MMPs mRNA表达,调节MMPs/TIMPs之间的失衡,可能是其减轻高氧肺损伤的机制之一。

氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用及JNK信号转导机制

目的:探讨氧化应激状态下肺泡II型上皮细胞(Alveolar type Ⅱ epithelial cell,ATⅡ)存活、凋亡和JNK(c-jun NH2-terminal kinase)的调控机制。方法:采用过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)刺激原代大鼠ATⅡ细胞,复制活性氧(Reactive oxygen species,ROS)攻击ATⅡ细胞损伤模型。蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测ATⅡ细胞受500μmol/LH2O2刺激后磷酸化JNK的动态变化,四甲基偶氮唑盐反应比色法(MTT法)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,并观察JNK抑制剂SP600125干预前后存活率和凋亡率的变化。结果:ATⅡ细胞在受H2O2刺激后随作用时间的延长细胞存活率下降,凋亡率增加;H2O2刺激可导致JNK的磷酸化激活,使用SP600125后,细胞存活率增加,凋亡率降低。结论:H2O2以时间依赖的方式诱导ATⅡ细胞凋亡,抑制JNK信号激活对氧化应激状态下的ATⅡ细胞可能起到保护作用。

水通道蛋白5在高氧肺损伤中的表达及调节机制

目的探讨水通道蛋白5(AQP5)在高氧肺损伤中的表达及其地塞米松对AQP5的调节作用。方法2周左右Wistar大鼠64只,按随机数字表法分为空气对照组、高氧暴露3、7、14d组和相应的地塞米松干预组。高氧暴露组置于常压氧仓中(O2体积分数≥95%);空气对照组置于同室常压空气中(O2体积分数为21%);各地塞米松干预组在暴露于空气或高氧的同时,经腹腔注射地塞米松5mg·kg-1·d-1,连续3d。采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和免疫组化方法观察AQP5的mRNA表达和分布变化,并与地塞米松干预后进行比较分析。结果AQP5主要表达在肺泡型上皮细胞及气道分泌上皮顶质膜;与空气对照组相比,高氧暴露不同时间后,AQP5特异性表达部位保持不变,但随暴露时间延长,AQP5表达呈逐渐减弱趋势,高氧暴露3、7和14d,AQP5mRNA较空气对照组均降低(P均<0.05)。与同期高氧暴露组比较,地塞米松干预后不同时间点AQP5mRNA表达均无明显变化(P均>0.05)。结论高氧肺损伤时AQP5表达降低,可能是高氧肺损伤肺水肿形成的原因之一;而未见地塞米松对高氧肺损伤AQP5的表达有调节作用。

儿科重症监护病房细菌耐药性监测及分析

目的:了解儿科重症监护室(PICU)临床病原菌的变迁和细菌耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法:对2002年1月～2005年12月我院PICU病房974份送检标本进行培养,采用美国MicroScan-WalkAway 40微生物分析仪进行鉴定和药敏。结果:974份标本共分离出阳性菌株378株,阳性率为38.8%,其中革兰阴性菌288株(76.2%),最常见为铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯杆菌;革兰性阳菌62株(16.4%),主要为菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌;真菌28株(7.4%)。铜绿假单胞菌除对环丙氟哌酸、亚胺培南、头孢吡肟相对较敏感外,对其他抗菌药物耐药率都在35%以上。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对青霉素类和头孢菌素类的耐药率均在60%以上,而对亚胺培南有很高的敏感性(100%)。革兰氏阳性菌对青霉素、氨苄青霉素的耐药率为100%,对红霉素耐药率在75%以上,而对万古霉素的敏感率均为100%。结论:PICU病房中仍以革兰阴性菌感染为主,细菌耐药形势严峻,应及时掌握本病房病原菌的分布及其耐药性变化趋势,以指导临床合理选用抗生素。

布洛芬在全身炎症反应综合征治疗中对血清降钙素原的影响

目的观察布洛芬对全身炎症反应综合征(SIRS)患儿血清降钙素原(PCT)的影响。方法采用前瞻性、多中心、随机对照临床研究,收集2008年3月—2009年3月,3家医院的儿科重症监护中心符合SIRS诊断的患儿(炎症组)154例,分为单独抗生素组(69例)、抗生素+布洛芬组(85例),并取正常对照组20例。测定入院时(基线)、药物干预48 h后血清PCT水平,观察布洛芬干预后PCT的变化,分析布洛芬对SIRS的治疗作用;并对危重评分在80～100分、<80分的患儿进行分层研究。结果正常对照组未检测到PCT;炎症组基线时PCT为(2.35±3.91)ng/ml,其中单独抗生素组为(2.18±3.88)ng/ml,抗生素+布洛芬组为(2.49±3.95)ng/ml,两者差异无统计学意义;单独抗生素组治疗前后PCT差异无统计学意义(P>0.05),抗生素+布洛芬组治疗前后差异有统计学意义(P<0.05);抗生素+布洛芬组治疗后PCT下降幅度与单独抗生素组治疗后下降幅度比较差异有统计学意义(P<0.05)。分层研究提示,危重评分80～100的患儿,抗生素+布洛芬治疗后PCT下降幅度与单独抗生素组比较差异有统计学意义(P<0.05);而危重评分<80的患儿,抗生素+布洛芬治疗后PCT下降幅度与单独抗生素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论经布洛芬干预48 h后,SIRS患儿外周血清PCT的水平均有明显下降,尤其在危重评分80～100的患儿中,提示布洛芬在抑制机体炎症反应过程中起一定作用,有助于控制炎症。

高氧暴露对早产鼠AECⅡ生长增殖的影响及CGRP的干预作用

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对600 mL/L氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)生长增殖的影响.方法:原代分离培养孕19 d早产鼠AECⅡ,随机分为4组:空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组.空气组,高氧组分别在氧体积分数为210 mL/L的空气和600 mL/L的氧气中暴露24 h;高氧CGRP组在暴露前加入CGRP;高氧CGRP拮抗剂组在暴露前同时加入CGRP和CGRP受体拮抗剂,再置于氧体积分数为600 mL/L的氧气中培养24 h.采用MTT比色法和流式细胞术测定细胞增殖能力和细胞周期;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光技术测定表面活性蛋白C(SPC)的mRNA及蛋白表达.结果:与空气组比较,高氧组细胞存活率下降,G0/G1期细胞比例增高,G2/M及S期细胞比例降低,SPC mRNA及SPC蛋白表达低下(P均<0.01).而CGRP干预可促进高氧暴露AECⅡ的增殖能力,使S及G2/M期细胞增多,并提高AECⅡ的SPC mRNA及SPC蛋白表达水平.结论:600 mL/L氧暴露24 h可抑制早产鼠AECⅡ增殖分化,而CGRP可促进AECⅡ生长,部分解除高氧对AECⅡ的抑制作用.

氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞MAPKs的激活及N-乙酰半胱氨酸的干预作用

目的探讨氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar typeⅡepithelial cells,ATⅡ)丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)活化的影响及N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine,NAC)对MAPKs活化及细胞存活凋亡的干预。方法原代培养大鼠ATⅡ,分为4组:正常对照组、NAC组、H2O2组和H2O2+NAC组。电镜观察H2O2刺激后细胞形态改变;四甲基偶氮唑盐反应比色法(MTT法)检测各组细胞存活率;流式细胞术检测凋亡率和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测p-ERK、p-p38和p-JNK的表达。结果与正常对照组比较,H2O2刺激后ATⅡ呈典型凋亡改变,细胞存活率下降(P<0.05),凋亡率和细胞内ROS水平上升(P<0.05),p-ERK、p-p38和p-JNK的表达也明显增加(P<0.05),而NAC干预后可提高细胞存活率,降低凋亡率和细胞内ROS水平,并抑制p-ERK、p-p38和p-JNK的表达。结论氧化应激能激活MAPKs并诱导ATⅡ凋亡,NAC通过清除细胞内ROS和抑制MAPKs的磷酸化而对ATⅡ起保护作用。

高氧致肺损伤大鼠TGF-β1和MMPs基因表达的变化

目的:探讨TGF-β1和MMPs的基因表达在高氧性肺损伤中的动态变化。方法:幼年Wistar大鼠32只随机分为空气对照组和高氧组(3天组、7天组、14天组),每组8只,高氧组持续吸入高浓度氧(O2>95%),用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcript polymerse chain reaction,RT-PCR)对不同高氧暴露时间大鼠肺组织中TGF-β1、MMP-2和MMP-9的mRNA表达情况进行动态观察,并对支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、肺通透系数,肺湿/干重比及肺组织病理变化进行检测。结果:高氧组TGF-β1的mRNA水平从第3天开始升高,随暴露时间延长逐渐上升,到第14天仍持续不降;MMP-2、MMP-9mRNA水平从第3天也明显增加,第7天达高峰,但14天已开始下降。与之相应的肺组织病理改变为早期的急性肺泡炎和后期纤维化改变。结论:高氧致肺损伤后TGF-β1/MMPs的失衡可能是高氧性肺损伤肺纤维化发生的重要原因。

内毒素休克性肺损伤与IFN-γ/IL-4失衡

目的 :探讨内毒素休克肺损伤与TH1/TH2平衡的关系。方法 :采用颈静脉注入LPS复制大鼠急性肺损伤模型 ,用ELISA法检测其外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN -γ、IL - 4水平及IFN -γ/IL - 4比值。结果 :与正常对照组相比 ,急性肺损伤组外周血PBMC产生IFN -γ水平 ,IFN -γ/IL - 4比值明显升高 (P <0 .0 5 ;P <0 .0 0 1) ,而IL - 4水平差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,肺组织病理切片显示大鼠发生ALI。结论 :LPS休克肺损伤时 ,体内存在Th1/Th2类细胞因子水平失衡。