FIASCO法筛选鳜鱼微卫星标记

通过FIASCO（Fast Isolation by AFLP Sequences Containing repeats）法构建鳜鱼（Siniperca chuatsi）基因组微卫星富集文库，分离微卫星DNA序列并对其特征进行分析。鳜鱼基因组DNA经MseⅠ限制性内切酶消化后，选取200～800bp的片段与MseⅠ接头连接，用生物素标记的寡核苷酸探针（AC）8、（CT）8、（AT）7、（GATA）8、（GATT）7与其杂交，杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上，变性洗脱获得单链目的片段，经PCR扩增形成双链，然后克隆到pGEM-T载体上，转化至DH5α中，首次成功构建鳜鱼基因组微卫星富集文库。对其中100个阳性克隆进行测序，60个（60％）含有微卫星序列（GenBank Accession Number：DQ789247～DQ789306）。成功设计了47对鳜鱼微卫星引物，并合成21对引物进行PCR扩增，结果筛选出18个多态性微卫星标记。结果表明：FIASCO法能有效提高筛选微卫星标记的效率。本研究筛选的微卫星标记可以用于鳜鱼遗传背景分析和遗传连锁图谱构建，并将为鳜鱼基因组结构分析、标记辅助育种以及数量性状位点（QTL）基因的定位等研究提供候选微卫星标记。[中国水产科学，2007，14（4）：608—614]

丁香酚对斑点叉尾鮰幼鱼的麻醉效果

测定了不同浓度及不同药浴时间条件下丁香酚对斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus幼鱼的麻醉效果。实验结果表明,随着丁香酚浓度从12.00mg/L升高至60.75mg/L,麻醉时间从119.34min±1.83min减少至4.01min±0.28min,复苏时间从1.52min±0.01min延长至8.15min±0.04min,各浓度组之间存在极显著差异。不同药浴时间试验结果显示:12.00mg/L、18.00mg/L和27.00mg/L的丁香酚分别药浴60min、50min和20min,复苏率均为100%;40.50mg/L和60.75mg/L的丁香酚分别药浴45min和5min,复苏率为50%;60.75mg/L的丁香酚药浴10min时,其死亡率达60%。结果提示,丁香酚用于斑点叉尾鮰的人工操作时,应准确掌握好麻醉剂量和麻醉时间,避免麻醉过度造成损失。

GenBank数据库中鳜鱼微卫星位点的筛选及特征分析

This project made use of bioinformatic mining of microsatellites from genomic resources to identify simple sequence repeats(SSRs),or microsatellites.A bioinformatic analysis of 304 nucleotide sequences in Siniperca chuatsi GenBank identified 22 sequences containing 30 microsatellites,account for 9.87% of wholly GenBank database.Cluster analysis indicated that 16 dinucleotide pairs were the most abundant microsatellites,accounting for 53.33% of the total microsatellite-containing sequences;11 trinucleotide repeats and 3 tetranucleotide repeats were found in these microsatellite sequences,accounting for 36.66% and 10.01% respective.17 primer pairs were designed from these microsatellite sequences.Among the 17 primer pairs,13 pairs have amplified products,6 pairs can achieve clear PCR products by Electrophoresis.Genotype analysis results indicated that:the average polymorphism information contents(PIC)were 0.692(ranged:0.567-0.806),were all polymorphic loci.

鱼类生长激素基因的研究现状及展望

鱼类的生长激素基因在鱼类生长发育和新陈代谢过程中发挥着极其重要的生物学作用。就鱼类生长激素基因(fGHG)的分离、活性检测、结构、分子克隆及在体外表达与基因转移等方面的研究进行了综述,并对其未来的研究策略和发展方向进行了展望。

鳜SSR-PCR反应条件的优化探索

以鳜(Siniperca chuatsi)基因组DNA为试验材料,研究MgCl2浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶3个反应参数对微卫星PCR的影响,建立一套适合鳜微卫星PCR反应的最佳体系。结果表明,在25μL的反应体系中,Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶3个参数的适宜浓度分别为1.2mmol/L、0.2μmol/L和0.04U/μL。PCR反应程序为94℃变性5min,94℃30s,56℃1min,72℃1min,共30个循环,最后72℃延伸5min。

鳜鱼基因组(AC)_n微卫星富集文库的构建与鉴定

鳜鱼基因组DNA经MseI酶切后,与MseI接头连接,用链霉素和素磁珠亲和捕捉与生物素标记的微卫星寡核苷酸探针(CA)8杂交,杂交复合物通过变性洗脱获得单链目的片段,经PCR扩增形成双链,然后克隆到pGEM-T载体上,转化至大肠杆菌DH5α中,首次成功构建鳜鱼(Siniperca chuatsi)基因组(AC)n重复类型的微卫星富集文库.测序结果表明,阳性克隆率为60%,说明构建的鳜鱼基因组微卫星富集文库是一个高质量的文库.鳜鱼富集微卫星文库的建立将为下一步进行鳜鱼微卫星标记的筛选提供了有效的工具.

施肥对湘云鲫混养池塘浮游生物变化的研究

1999年3月￣5月和8月,通过对益阳农科所湘云鲫混养池所采水样浮游生物进行镜检分析,结果表明:施肥对浮游生物量的变化有显著的影响,施肥后浮游植物在第3天达到高峰,而浮游动物在施肥后持续增加,直至第5天达到高峰,同时浮游生物的组成与数量随不同季节而变化。施肥前后,水中浮游生物的优势种群与数量呈现一定差异。周期性施肥,能使得浮游生物高峰期持续下去,而且,其优势种群的高峰也能得以持续。

湘江野鲤养殖群体和自然群体遗传多样性的微卫星分析

采用微卫星技术,用17对微卫星引物对湘江野鲤养殖群体和自然群体的的遗传多样性进行分析。结果表明:有15对引物扩增出清晰的条带,其中13对引物在群体间呈现多态性;2个群体中,13对多态性引物分别扩增等位基因2～12个,共90个,其中35个等位基因为2群体共有,55个等位基因具有群体特异性,引物平均等位基因数为6·92个,等位基因频率为0·0667～0·8333;养殖群体和自然群体的平均遗传杂合度和平均多态信息含量分别为0·5688、0·5152,0·5860、0·5347;2个群体间遗传相似性指数为0·6762,遗传距离为0·3238,表明湘江野鲤养殖和自然群体遗传多样性均较为丰富,2个群体间遗传变异程度较高。

三种鳜鱼(Siniperca)生长激素基因内含子多态性的比较研究

鳜(Siniperca chuatsi)、大眼鳜(Siniperca kneri)、斑鳜(Siniperca schezeri)为鳜属中3种主要经济鱼类,具有较近的亲缘关系和相似的生活习性,但生长性状差异较大。为探索3种鳜鱼生长差异与基因差异间联系,以野生群体为材料,采用PCR扩增、电泳及测序等方法,对生长发育相关基因生长激素(GH)基因进行了多态性检测与分析。在第一内含子、第二内含子前段、第二内含子中段微卫星序列及第三内含子中均检测到多态性。各区域共检测到25种长度类型,其中4种为鳜与大眼鳜共有长度类型,3种为鳜、大眼鳜与斑鳜共有长度类型,其余18种为各物种特有长度类型。各区域长度类型共组成14种单倍型,无种间共有单倍型。序列长度差异主要由重复序列及DNA片段的插入或缺失形成。在第1内含子3'端-6位与第3内含子5′端+16位各发现一处靠近剪接位点的序列差异。根据多态性检测结果构建系统发育树,鳜与大眼鳜先聚为一枝。本研究可为进一步确认鳜鱼GH基因差异与生长性状间联系,并利用基因差异进行鳜鱼种质资源保护及分子育种奠定基础。

高识别力的微卫星标记系统在鳜属(Siniperca)物种鉴定中的应用

根据自行分离的翘嘴鳜微卫星序列(GenBank登录号:DQ789247—DQ789306)设计并合成20对微卫星引物,对鳜属鱼类4个物种即翘嘴鳜、大眼鳜、斑鳜和暗鳜共80个个体进行了物种鉴定分析。结果表明,20对微卫星引物共检测到293个等位基因,大小在80—301bp之间。它们在4个物种中的多态性位点百分率分别为90%、75%、85%和85%,累积个体识别率和非父排除率均达到0.9999,属于高识别力的微卫星遗传标记系统,可以用来进行鳜属鱼类物种的鉴定分析。UPGMA聚类分析表明,翘嘴鳜与暗鳜之间亲缘关系最近,可归属于第Ⅰ类;大眼鳜为第Ⅱ类;斑鳜独自为第Ⅲ类。本研究可为鳜属鱼类的分类及进化关系、群体遗传结构分析等提供理论支持,为野生原种鳜类遗传多样性的监测和评估以及鳜类优良的种质资源得到合理保护和开发利用奠定基础。

黄鳝微卫星标记筛选及其在不同性别表型群体中的遗传多态性

采用FIASCO（Fastisolation by AFLP sequences containing repeats）法进行黄鳝微卫星标记筛选并将其应用于黄鳝性别差异群体的遗传变异分析。黄鳝基因组DNA经酶切、微卫星核心序列探针杂交、T载体连接并转化至DH5a中，构建黄鳝基因组微卫星富集文库。随机挑选75个阳性克隆测序，结果发现其中20个含有微卫星序列，利用软件成功设计了15对微卫星引物，经过黄鳝基因组DNA的PCR扩增及电泳检测，筛选8对多态性微卫星引物并对黄鳝3种不同性别表型群体的基因组DNA进行PCR扫描，结果显示：在8个微卫星座位中，共检测到51个等位基因，平均每个座位的等位基因数为6．375个，等位基因频率分布为0．0012～0．6033；黄鳝雌性表型群体、间性表型群体、雄性表型群体的平均遗传杂合度分别为0．6371、0．6969、0．7345；平均多态信息含量分别为0．5656、0．6416、0．6858，表明这些微卫星标记在黄鳝不同性别表型群体的遗传多态性发生了改变，它们可作为黄鳝遗传背景分析的分子标记。

丁消化系统形态学和组织学研究

通过对丁(Tinca tinca)消化系统的形态学和组织学观察,结果表明,其消化道由食道、肠和肛门组成。食道肌层发达。肠由前、中、后3段构成,肠黏膜表面为单层柱状细胞,肠前段杯状细胞丰富,黏膜皱褶多且长,肠后段次之,肠中段最少;肠前段、中段和后段环肌层厚度分别约为20、28、19μm,纵肌层厚度分别约为67、29、38μm;肛门肌层发达。消化腺包括肝脏和胰腺,胰腺属弥散型;胆囊由浆膜层、肌层和黏膜层构成。

鲫鱼微卫星DNA的分离及多态性分析

目的:用近缘物种鲤微卫星引物来分离鲫鱼微卫星标记并对其多态性进行分析。方法:以鲫鱼基因组DNA为模板,采用6对鲤微卫星引物进行PCR扩增,PCR产物经8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色检测。结果:筛选出2个以AC和TA为重复单元的鲫鱼新的微卫星标记。多态性分析表明,这2个微卫星标记的遗传杂合度分别为0.611和0.644,多态信息含量为0.536和0.572,属于高度多态性标记。结论:该研究筛选的2个微卫星标记可应用于鲫鱼遗传多样性、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种等方面的研究。

斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)消化系统形态学和组织学的初步研究

通过对斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)消化系统的形态学和组织学观察,结果表明,消化道分化为明显的食道、胃、肠、肛门4个部分。食道肌肉层发达;胃黏膜表层为单层柱状细胞。肠由前、中、后3段构成,肠黏膜表面为单层柱状细胞,肠前段粘膜皱褶和杯状细胞丰富,肠后段次之,肠中段最少。肠前段、肠中段和肠后段肌层厚度分别约为(104.87±0.07)μm、(48.60±0.03)μm、(135.29±0.05)μm;肛门肌层发达。消化腺由肝脏、胰腺和胆囊组成,胰腺属弥散型;胆囊由浆膜层、肌层和粘膜层构成。

3种鳜属鱼生长激素基因差异的检测与分析

为探索鳜(Siniperca chuatsi)、大眼鳜(S.kneri)、斑鳜(S.scherzeri)生长性状差异与基因差异间的联系,以3种鳜野生群体为材料,采用PCR-SSCP分析及测序方法,对3种鳜野生群体的生长发育相关基因——生长激素(GH)基因的差异进行了检测。结果表明,在生长激素基因5′侧翼区至第2外显子区域检测到4种多态型,均为群体特有多态型;在第2内含子3′段至第3内含子5′段区域检测到5种多态型,其中3种为群体特有多态型;在第4外显子至第5外显子5′段区域及第5外显子3′段至3′侧翼区均检测到4种多态型,均有3种为群体特有多态型。对各多态型编码区的分析表明,斑鳜与鳜、大眼鳜在GH第150位氨基酸位点存在差异。在该位点,斑鳜编码蛋氨酸(M),鳜、大眼鳜均编码亮氨酸(L)。各区域多态型共组合成9种GH基因型,3种鳜间无共有基因型。GH基因遗传分化指数(Fst)为0.8598,分化程度较高。遗传多样性分析显示,斑鳜GH基因遗传多样性高于鳜和大眼鳜。3种鳜属鱼GH基因相似度比较结果显示,鳜与大眼鳜的相似度最高,鳜与斑鳜的相似度最低。研究结果可为进一步利用GH基因差异进行鳜分子育种研究提供依据。

优化动物学教学提高学生综合能力

动物学是农学专业的必修专业基础课,是一门理论性、综合性和实践性都很强的课程。在教学中,如何优化动物学教学,使学生更好地掌握本门课程的相关内容,为学习后续课程打下坚实的基础,提高学生的综合能力,这是摆在高校动物学教师面前的课题。文中提出了对优化动物学教学的看法。

鳜鱼基因组DNA的提取及PCR-SSCP条件的探讨

采用改良苯酚氯仿法,分别提取鳜鱼冻存血液、新鲜血液、冻存肌肉、新鲜肌肉的DNA并进行了效果比较,发现新鲜及冻存样品提取效果差异不大.以基因组DNA为模板,对鳜鱼生长激素基因第五至第六外显子进行PCR-SSCP分析,在SSCP分析过程中,对温度、电压条件进行了优化,在五组条件中,4℃、160V条件下效果最好.

麦瑞加拉鲮与露斯塔野鲮生物学特性的比较研究

使用传统的形态学测定方法对麦瑞加拉鲮鱼简称麦鲮可数可量性状进行测定,并采用饲养实验与调查研究相结合的方法对其形态特征、生长习性、食性、繁殖等生物学特性进行了初步研究,旨在为麦鲮鱼的进一步研究和推广提供一定的科学依据。结果表明:麦鲮与露斯塔野鲮有一定的种群差别,但其生长快、食性杂等生物学特性使其在池塘养殖增添混养品种和提高经济效益方面具有极大的推广前景。

三种增色剂对黄金鳅的生长、形体、体色和抗氧化能力的影响

本文通过在饲料中添加虾青素、叶黄素及β-胡萝卜素三种增色剂,研究其对黄金鳅生长、形体、体色和抗氧化能力的影响。结果显示:三种增色剂对黄金鳅的生长、体色、SOD指标均有显著影响;体表皮肤总色素含量测定结果显示叶黄素可以作为黄金鳅增色剂,适宜添加量为50mg/kg。

增色剂在水产养殖上的应用研究进展

增色剂不仅有增色作用，而且具有影响鱼类性腺发育和抗氧化的功能。本文综述了增色剂种类及生理功能、作用机理、影响因素及其在水产上的应用，最后对增色剂在观赏鱼上的应用做了展望。