去分化联合IDO基因修饰增强人脐带间充质干细胞的抗氧化应激存活及Treg细胞诱导能力

【目的】研究去分化处理联合吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)基因修饰,对人脐带间充质干细胞(hMSC)抗氧化应激生存能力及诱导调节性T淋巴细胞(Treg)能力的影响。【方法】通过对hMSC的短暂成脂分化诱导和恢复培养,获得去分化hMSC(De-hMSC)。实验组De-hMSC感染携带IDO基因的重组逆转录病毒,对照组为感染绿色荧光蛋白(ZsGreen1)基因的De-hMSC以及正常培养的未感染De-hMSC和hMSC。通过Western blot检测被感染细胞的IDO蛋白表达,应用流式细胞术测定IDO基因修饰型De-hMSC(IDO/De-hMSC)的免疫表型,同时鉴定其成骨和成脂分化能力。利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术比较各组细胞在300μmol/L t-BHP作用下的抗氧化应激生存能力,采用三色荧光标记流式细胞术测定含各组细胞培养上清的条件培养基对正常人外周血单个核细胞(PBMC)中Treg细胞含量的影响。【结果】IDO/De-hMSC仍具有间充质干细胞的免疫表型和成骨、成脂分化能力。在300μmol/L t-BHP作用下,De-hMSC的细胞存活率较hMSC明显增加(P<0.05),经IDO基因修饰后De-hMSC的细胞存活优势无明显改变(P>0.05)。与未修饰的各对照组相比,含IDO/De-hMSC上清的条件培养基能明显上调PBMC中CD4^+CD25^+CD127^(low)Treg细胞的含量(P<0.05)。【结论】成脂去分化联合IDO基因修饰不影响hMSC的干细胞特性,并能同时增强h MSC的抗氧化应激生存能力及其对Treg细胞的诱导能力,是一种有望在免疫抑制治疗中发挥作用的间充质干细胞修饰策略。

间充质干细胞的表观遗传调控研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是成体干细胞的一种,由于具有多向分化、修复损伤、免疫调节、抗衰老等诸多生理功能,MSCs在多种疾病的基础和临床治疗研究中被寄予厚望,是细胞治疗领域重要的种子细胞。近年来的研究发现,表观遗传调控的多种机制,如:DNA甲基化、组蛋白修饰、微小RNA等,对MSCs的自我更新、定向分化以及免疫调节等各项生理功能都有着重要的调节作用。本文就近年来MSCs表观遗传调控领域的研究进展进行综述,以期为以提高MSCs移植疗效为目的的细胞修饰或改造提供资料参考。

相同供体来源人脐带间充质干细胞的多批次原代分离

目的建立一种相同供体来源人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的多批次原代分离技术,提高脐带标本利用度和干细胞产量。方法采用组织块贴壁法分离hUC-MSCs。脐带组织块贴壁培养前预先用血清浸泡;收获首批hUC-MSCs的同时,回收仅利用1次的脐带组织块,重新铺板培养,相同供体来源的脐带组织块共反复培养3次,即:分3批次从组织块中分离hUC-MSCs;同时,收集第1、2批次原代培养体系的培养上清,转瓶后单独孵育,从中收获hUC-MSCs。比较各批次hUC-MSCs的最早出现时间、第1次传代时间、细胞数量等,并鉴定其细胞形态、免疫表型、增殖及分化能力。结果用血清预先浸泡脐带组织块,可显著缩短原代细胞收获时间、提高组织块培养成功率和增加细胞产量。与初次培养的脐带组织块相比,回收的脐带组织块及其培养上清均可在较短时间内获得数量更多的原代细胞。脐带组织块通过3次贴壁培养和2次上清回收孵育所获得的原代细胞总数,为相同实验条件下传统分离方法的(27.48±3.98)倍。各批次细胞均具有典型的间充质干细胞形态、免疫表型,以及正常和相近的增殖、分化能力。结论脐带组织块具有持续多次产出hUC-MSCs的能力,其培养上清也可作为hUC-MSCs的来源,基于此建立的多批次分离方法极大地提高了源自同一脐带标本的原代干细胞的分离效率和产量,实现了相同供体hUC-MSCs的高质量、多批次稳定分离。