新兴地区鸭疫里默氏杆菌血清3型的分离鉴定

通过对广东省新兴地区某番鸭养殖场疑似鸭疫里默氏杆菌病的病死鸭进行病原分离、生化鉴定及血清学鉴定,确诊该次疫情为鸭疫里默氏杆菌血清3型所引起。

血清9型鸭疫里默氏杆菌在华南地区的分离鉴定

本研究于2009年7月～2010年4月针对广东、广西、福建等养鸭密集地区进行鸭疫里默氏杆菌(RA)流行病学调查,并分离到5个RA分离株。经形态特征、生化特性和血清学鉴定表明,5个分离株与血清9型RA相似。对16S rRNA部分基因进行序列测定,并与GenBank中登录的菌株16S rRNA基因序列进行比对及系统进化分析显示:该5株分离株与报道的RA H-1785、H-2199、H-2565和P-2123的16S rRNA序列相似性较高,同源性达99.1%～99.7%,进一步证实这5个分离株为血清9型RA。

广东省部分猪场副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

从广东部分猪场发病猪的肺脏、气管和扁桃体分离细菌并培养,获得3株可疑菌株。根据发病猪的临床症状、剖检病理变化以及菌落的形态、菌体特征和生化试验结果,初步鉴定所分离的3株菌株为副猪嗜血杆菌。在细菌学鉴定的基础上,同时结合特异性PCR检测方法进行鉴定,结果3株菌株均扩增出822bp的特异性目的条带,进一步证实了所分离的3株菌株均为副猪嗜血杆菌。

鸡附红细胞体与白色念珠菌混合感染的研究

对某鸡场送检病、死黄羽肉鸡进行实验室诊断,在血液中检测到附红细胞体,同时从病鸡的嗉囊、腺胃分离出一株白色念珠菌。通过体外培养和杀灭试验分别筛选出对附红细胞体敏感的药物磺胺间甲氧嘧啶、附红净和对白色念珠菌敏感的药物制霉菌素、氟康唑。

鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立

根据鸭疫里默氏杆菌(RA)16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了检测RA的实时荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,2株RA均呈阳性,而3株非RA均呈阴性。试验结果表明,该方法具有良好的特异性,该方法的表达式Ct=-3.676×lg copies+45.17,相关系数r2=0.996,R循环效率Eff(%)=93.482,DNA拷贝数在100～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品的最低检测限为1.0×101 copies/μL,重复性检测的变异系数低于5%,利用该方法分别对自然感染表现典型鸭疫里默氏杆菌病临床症状和病理变化的死亡雏鸭肝、心、脑组织等不同脏器进行细菌定量检测,阳性率均为100%,而用普通PCR检测阳性率分别只有72%(18/25)、84%(21/25)和92%(23/25)。证实本研究所建立的荧光定量PCR方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用于RA感染的快速诊断、流行病学调查以及鸭产品的检疫。

鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA PCR快速检测方法的建立

根据GenBank中的鸭疫里默氏杆菌（RA）1-19型16 S rRNA基因序列,分别与大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的16 S rRNA基因序列对比,设计特异性引物,建立了基于鸭疫里默氏杆菌16 SrRNA的PCR检测方法。结果表明,用该方法对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌进行检测,只有鸭疫里默氏杆菌的DNA能扩增出680 bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带;测序结果与GenBank中鸭疫里默氏杆菌相应序列完全一致;同时分别将鸭疫里默氏杆菌基因组DNA和菌液10倍稀释进行PCR扩增,对鸭疫里默氏杆菌DNA的最小检出量为1.907×10^-5g/L,对鸭疫里默氏杆菌菌液的最小检出量为1.5×10^4CFU/mL。证实,建立的基于鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA的PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定。

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗对禽流感H9亚型流行株攻毒的保护作用

为了监测鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(LaSota株+M41株+SS/94株)对H9亚型禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果,采用H9亚型禽流感病毒SS/94株及2009—2010年现地分离的3株H9亚型禽流感病毒对已免疫上述三联灭活苗的SPF鸡进行攻毒试验。结果显示,试验鸡以0.3 mL/只的剂量免疫三联灭活苗后21 d,其H9亚型禽流感病毒的HI抗体效价可达8～11log2,此抗体水平可抵抗2×106EID50的H9亚型禽流感病毒SS/94株、BLCN09株、WDZ09株、YT10株的攻击,攻毒保护率均达90%(9/10)以上。可见,以SS/94株作为禽流感疫苗抗原制备的三联灭活苗具有良好的免疫原性,能使免疫鸡抵抗2009—2010年期间现地分离的多株H9亚型禽流感病毒的攻击。