RITA通过ROS/Src/Stat3通路诱导肺鳞癌H226细胞凋亡

目的探究肿瘤凋亡和P53再生化合物(RITA)对肺鳞癌细胞凋亡的影响及作用机制。方法采用MTT细胞活力检测法检测不同浓度RITA对肺鳞癌细胞H226和正常肺上皮细胞BEAS-2B增殖的影响,筛选合适的干预浓度。经0、0.05、0.1和0.2μmol/L RITA处理后,采用流式细胞术分析H226细胞内活性氧(ROS)产生和细胞凋亡水平变化。Western blot检测P-Src、Src、转录信号转换器和激活因子3(Stat3)、P-Stat3、Bim、Mcl-1、存活蛋白(Survivin)、Bax及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达水平。H226细胞经0.2μmol/L RITA和5.0 mmol/L抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)同时处理后,观察NAC能否逆转RITA对H226细胞的生物学效应。结果0.05~0.2μmol/L范围内,随着RITA浓度的升高,H226细胞增殖活性下降,半抑制浓度(IC_(50))为(0.130±0.008)μmol/L,而相同给药浓度下对BEAS-2B细胞增殖无明显影响。0~0.2μmol/L RITA可增加H226细胞内ROS水平并诱导细胞凋亡,下调P-Src、P-Stat3、Mcl-1、Survivin、Bcl-2蛋白表达,上调Bim、Bax蛋白表达。经NAC处理后,RITA抑制Src/Stat3通路活性及诱导H226细胞凋亡的效应被逆转。结论RITA通过提高肺鳞癌H226细胞内ROS的水平,从而抑制Src/Stat3通路活性,最终诱导细胞凋亡。

非诺贝特改善脂多糖诱导的急性肺损伤及其机制研究

目的探究非诺贝特(Fen)对急性肺损伤(ALI)的作用及机制。方法(1)体内实验。30只C57BL/6雄性小鼠采用随机数字表法分成6组:正常组,模型组(LPS组),阳性药地塞米松(DXMS)组,Fen低、中、高剂量(20、40、80mg/kg)组。分组给药12 h后,收集肺泡灌洗液(BALF),处死小鼠,获取肺组织,记录肺组织湿/干质量比;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β含量;BCA比色法和瑞氏-吉姆萨染色检测BALF中总蛋白含量和免疫细胞数目;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病变并进行病理评分。Western blot检测肺组织B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)表达。(2)体外实验。实验设Control、LPS(10 mg/L)、LPS+Fen(5μmol/L)、LPS+Fen(10μmol/L)、LPS+Fen(20μmol/L)组。A549细胞经LPS(10 mg/L)处理后分别加入5、10、20μmol/L的Fen处理12 h,分别用DCFH-DA、Annexin V-FITC/PI法和Western blot检测Fen对A549细胞ROS、凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及p-JNK影响。另选取LPS(10 mg/L)+Fen(20μmol/L)处理后添加H2O2(100μmol/L),观察细胞ROS、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达变化。此外,选取LPS(10 mg/L)+Fen(20μmol/L)处理后添加JNK激动剂Anisomycin(3μmol/L),观察Bcl-2、Bax表达变化。结果(1)与正常组相比,模型组小鼠肺组织湿/干质量比,肺组织损伤评分,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,肺泡灌洗液总蛋白含量,免疫细胞数目,p-JNK和Bax表达均出现显著升高,Bcl-2表达显著降低。与模型组相比,Fen低、中、高剂量组上述指标变化均被逆转。(2)Fen能显著减少LPS诱导的A549细胞ROS含量,降低凋亡率,抑制p-JNK和Bax表达并促进Bcl-2表达。H2O2可逆转Fen引起的上述效应。Anisomycin也能抑制Fen引起的Bcl-2上调和Bax蛋白下调。结论Fen可通过ROS/JNK信号抑制细胞凋亡,从而减轻ALI。