连翘配方颗粒与饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌效果的比较研究

目的采用斑马鱼体内模型实验和体外抗菌实验比较连翘配方颗粒和饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌的药效差异。方法将斑马鱼胚胎分为空白组、模型对照组、10μg/mL地塞米松处理组、连翘饮片处理组(剂量为400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(剂量为400、600、800μg/mL),分别构建硫酸铜、尾鳍横断和LPS显微注射斑马鱼炎症模型,采用中性粒细胞观察、病理组织切片、生存分析和实时定量荧光PCR实验评价连翘配方颗粒与饮片的抗炎药效差异,并从MAPK和NF-κB信号通路角度探讨其抗炎作用机理差异。将斑马鱼胚胎分为模型对照组、250 nmol/L索拉菲尼处理组、连翘饮片处理组(400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(400、600、800μg/mL),采用斑马鱼异种移植肿瘤细胞模型,通过荧光观察和病理组织切片评价连翘配方颗粒与饮片抗肿瘤的药效差异。将实验分为空白组、连翘饮片处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL)和连翘配方颗粒处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL),采用微量肉汤稀释法评价连翘配方颗粒与饮片的抑菌药效差异。结果与模型对照组比较,连翘配方颗粒及饮片均可抑制中性粒细胞聚集数量(P<0.001)和Tnfα、Il6、P38、Jnk、Erk和P65的mRNA表达(P<0.05或P<0.01或P<0.001),升高斑马鱼的存活率(P<0.01或P<0.001);减少人肺腺癌A549细胞、人结直肠癌HCT116细胞、人胰腺癌PANC-1细胞、人肝癌Hep3B细胞和人宫颈癌Hela细胞在卵黄囊内的聚集(P<0.05或P<0.01或P<0.001);并在15.63 mg/mL时起到抑菌作用。结论连翘配方颗粒及饮片均具有显著抗炎、抗肿瘤和抑菌作用,两者除在低剂量下抑制Il6、P65、Jnk的mRNA表达和HCT116细胞增殖有显著性差异外,其他作用均无明显差异。

中药药理学贯通性实验的设计及应用——以凉膈散为例

目的 中药药理学是以传统中药学与现代药理学为主体的新兴交叉学科,迄今国内尚未有完善的中药药理学贯通性实验教学方案。方法 结合现有基础教学条件及中药药理学教学团队的教学改革实践经验,选择凉膈散(LGS)进行实验设计。结果 建立了完善的贯通性实验教学方案,并选取中药学和中药制药2个专业学生进行教学实践。结论 此研究为中医药院校及综合性院校的中药学专业进行实验教学改革提供模板及思路。

三黄茵赤方含药血清对LO2细胞DNA氧化损伤的影响

目的探讨三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法采集三黄茵赤方含药血清,以LO2细胞株为研究对象,通过H2O2诱导LO2细胞DNA氧化损伤模型,实验分正常对照组、H2O2模型组、三黄茵赤方含药血清5%、10%、15%浓度组、维生素E组,采用倒置显微镜观察各组形态,CCK-8法测定细胞存活率,生化法检测细胞内SOD、CAT和GSH-PX活性,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,ELISA检测细胞内8-OHd G含量,彗星实验检测细胞DNA损伤情况。结果与H2O2模型组比较,三黄茵赤方含药血清10%、15%浓度组、维生素E组均能提高细胞存活率(P<0.05),增强细胞内SOD、CAT、GSH-PX活性(P<0.05),改善细胞对ROS清除能力(P<0.01),降低细胞内8-OHd G含量(P<0.01),减低细胞拖尾率、尾长、尾矩及Olive尾矩(P<0.05)。结论三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化性损伤具有保护作用,以15%浓度含药血清组作用最显著。

外泌体源性RNAs在中枢神经系统中的研究进展

外泌体是一种由细胞主动分泌到胞外的纳米级别囊泡,内含蛋白质、核酸、脂质等生物活性物质,与靶细胞接触后释放内容物,介导细胞间的信息交流。在中枢神经系统(CNS)中,神经细胞、神经胶质细胞、神经干细胞等细胞分泌的外泌体,负载miRNAs、mRNAs等多种核酸类活性物质,在转录后水平调控神经元的分化发育、突触的可塑性以及CNS疾病的形成与发展,如阿尔茨海默病、药物成瘾等。因外泌体源性RNAs具生物学活性及靶向特异性,不但是潜在的疾病诊断标志物,还可成为疾病新的治疗靶点。该文就外泌体的一般特性以及外泌体源性RNAs在中枢神经系统中的作用、变化与作用机制等进行阐述,旨在对中枢神经系统的分化发育及疾病的形成有新的认识。

丹酚酸类药物SAA004和SAA008通过抑制NF-κB和STAT3信号通路发挥抗炎作用

目的研究丹酚酸类化合物SAA004和SAA008的抗炎活性并探讨其潜在机制。方法采用卵黄囊显微注射内毒素(LPS)的炎症模型,通过生存分析观察SAA004和SAA008对注射LPS的斑马鱼的保护作用;通过H&E染色和荧光显微镜观察炎症细胞在卵黄囊的募集情况;通过q-PCR测量斑马鱼关键炎症细胞因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的转录水平;采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,通过ELISA检测RAW264.7巨噬细胞上清炎症因子IL-6和TNF-α的表达;通过Western印迹法检测RAW264.7巨噬细胞炎症相关信号通路(NF-κB和STAT3)中IκBα、STAT3的磷酸化及NF-κB-p65的表达;通过免疫荧光法检测RAW264.7巨噬细胞NF-κB-p65和p-STAT3的表达及分布。结果丹酚酸类药物SAA004和SAA008提高LPS刺激的斑马鱼生存率,减少LPS诱导的炎症细胞在卵黄囊部位的募集,降低炎症因子IL-6和TNF-α的转录水平;同时降低RAW264.7巨噬细胞中IL-6和TNF-α的表达水平,抑制IκBα和STAT3蛋白的磷酸化,抑制NF-κB-p65和p-STAT3蛋白的分布。结论丹酚酸类药物SAA004和SAA008通过抑制NF-κB和STAT3信号通路发挥抗炎作用。

白花蛇舌草抗肝癌作用

目的通过斑马鱼异体肝癌细胞移植模型和Hep3B细胞体外实验研究白花蛇舌草不同极性部位的抗肝癌作用。方法采用浸泡给药的方式确定白花蛇舌草的水、正丁醇、乙酸乙酯和石油醚提取部位对斑马鱼的体内毒性;建立斑马鱼异体荧光标记肝癌细胞移植模型,拍照记录斑马鱼卵黄囊内细胞荧光强度的变化,HE染色观察肝癌细胞的数目,评价白花蛇舌草不同极性部位提取物的体内抗肝癌作用;通过Hoechst染色观察斑马鱼卵黄囊内肝癌细胞的凋亡;通过MTT、Annexin V-FITC/PI双染实验和细胞周期分析检测白花蛇舌草乙酸乙酯部位对Hep3B细胞的细胞毒性、凋亡以及周期的影响;通过Western印迹法检测Hep3B细胞给药后PARP,Nur77,p-Nur77,JNK和p-JNK的表达。结果白花蛇舌草乙酸乙酯部位能显著抑制斑马鱼异体移植肝癌细胞的生长,时间、剂量依赖性地抑制Hep3B细胞增殖,促进其凋亡,并阻滞其细胞周期于G2/M期。此外,该提取物能降低Hep3B细胞中Nur77,p-Nur77,JNK和p-JNK的表达。结论白花蛇舌草乙酸乙酯部位可能通过抑制Nur77/JNK信号通路发挥抗肝癌作用。

穿心莲内酯磺化物的抗炎活性评价

目的利用斑马鱼炎症模型评价穿心莲内脂磺化物的抗炎活性。方法采用斑马鱼硫酸铜急性炎症模型,尾鳍横切局部炎症模型,LPS卵黄囊显微注射全身炎症模型评价穿心莲内酯磺化物的抗炎效果。结果FL-2,FL-3,FL-5,FL^(-1)0,FL-24和FL-33可显著抑制硫酸铜、尾鳍横切和内毒素诱导的斑马鱼中性粒细胞的迁移。结论FL-2,FL-3,FL-5,FL^(-1)0,FL-24和FL-33具有抗炎作用,提示其可以作为抗炎药物的候选药物。

基于脂多糖介导的炎症疾病caspase-11靶点药物的研究进展

目的对近年来脂多糖介导的炎症疾病含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶11(cysteinyl aspartate specific proteinase-11,caspase-11)靶点药物进行综述。方法利用PubMed、中国知网等检索平台,检索脂多糖介导的不同炎症疾病中caspase-11靶向药物并进行了归纳汇总。结果根据文献查阅发现,若caspase-11激活,可诱发白介素1β、白介素18相关的炎症反应及Gasdermin D介导的细胞焦亡,从而导致大量炎症因子释放到胞外,引发强烈的炎症反应。caspase-11介导的炎症反应在帕金森病、阿尔兹海默症、肺纤维化、内毒素血症、脓毒症等疾病的发生发展中发挥了重要作用。结论对caspase-11靶点药物的探索,可能是未来脂多糖介导的相关炎症疾病药物研究的新方向。

基于斑马鱼模型的康复新液药效学评价

目的利用斑马鱼人类疾病模型评价康复新液的促进血管新生、修复组织及抗炎作用。方法采用索拉菲尼诱导的节间血管缺陷模型评价康复新液促进斑马鱼血管生成的作用;通过斑马鱼的尾鳍横切模型评价康复新液促进尾鳍再生的作用;通过斑马鱼硫酸铜、尾鳍横切及卵黄囊显微注射内毒素的炎症模型评价康复新液的抗炎作用,并采用实时荧光定量PCR法检测康复新液对炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平的影响。结果康复新液能提高斑马鱼的节间血管指数;增加斑马鱼横切尾鳍的再生长度;抑制硫酸铜、鱼尾鳍横切和内毒素诱导的斑马鱼中性粒细胞的迁移,降低内毒素刺激的斑马鱼IL-6和TNF-αmRNA的表达水平。结论康复新液具有促进斑马鱼血管新生、促进组织修复和抗炎的作用。

紫花杜鹃30-38馏分抗登革2型病毒的机制

目的体外实验评价紫花杜鹃30-38馏分(DJ 30-38)抗登革2型病毒(DENV-2)效果,并利用ICR乳小鼠模型进行抗病毒感染的验证。方法MTT法测药物对细胞毒性;CCK-8法检测药物对细胞的保护作用;结晶紫染色观察DJ 30-38不同浓度对DENV-2子代病毒释放的影响;实时荧光定量PCR检测不同浓度的DJ 30-38对DENV-2病毒复制中E和NS1蛋白基因表达的抑制率;Western印迹法检测不同浓度的DJ 30-38对DENV-2病毒中E和NS1蛋白表达的抑制。ICR乳小鼠分为空白、模型和DJ 30-38(5和10 mg·kg^(-1))4组,除空白组外的其余各组ICR乳小鼠颅内注射(400 PFU·mL^(-1))及ip给予(4×10^(5) PFU·mL^(-1))DENV-2病毒液20μL,空白对照组注射等量RPMI-1640培养基,造模当天,DJ 30-38组乳小鼠提前2 h ig给药,以后每隔24 h给药1次,每天观察并记录各组乳小鼠的体重及发病情况,计算各组症状评分和生存率,取乳小鼠脑做病理切片的HE染色,用实时荧光定量PCR检测其他各脏器病毒E和NS1蛋白基因表达水平。结果DJ 30-38能显著改善DENV-2感染BHK-21细胞引起的细胞病变效应,抑制病毒子代的释放,抑制DENV-2感染后E和NS1基因表达水平,能显著降低病毒感染后E和NS1蛋白的表达。在DENV-2感染的ICR乳小鼠模型中,DJ 30-38改善了病毒感染乳小鼠的症状评分,延长了生存时间,给药各组乳小鼠脑、心、肝、脾、肺、肾等脏器的病毒拷贝数与模型组相比均降低,且呈剂量依赖性。结论DJ 30-38具有抗DENV-2的作用。

中药药理学贯通式教学实验设计及应用

为了解决中药药理学实验教学中目前存在的问题,结合实验教学改革趋势,以南方医科大学中药学和中药制药专业为例,采用文献研究法和个案分析法,制定实验教学改革思路,构建贯通式实验教学模式,开展实践贯通式实验的一轮教学,与过往实验教学模式相比较,发现贯通式实验可以提高学生的课程掌握效率和自主积极性。中药药理学教学实验的改革旨在培养学生的创新、发现和解决问题的能力,提高实验课程的质量,以满足国家对于高校实验教学现代化的要求。

西医院校中药药理学课程思政的探索与实践——以南方医科大学为例

新一代青年是中医药的重要传承者和发展者,教学是传承中医药的重要方式,在教学中将中医药特色思政元素及本学科最新进展融入教学内容,可提升学生的学习兴趣及个人综合能力。因此为了贯彻“全程育人,全员育人,全方位育人”理念,以中药药理学为例,深入挖掘该门课程的思政元素,通过强化课程思政的设计、加强与思政课程老师的联系、改革课程思政的教学方法、围绕课程思政进行教学教材的开发、建立完善评价体系等方面,探索适合西医院校中医药类专业学生的教学方法。其中,具体实践有:重视医药古籍,坚持医药融通;充分利用线上资源,提高学生积极性;培养科研思维;培养合作意识与团队精神;培养爱国情感,树立中医药文化自信。

绿茶提取物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:探讨绿茶提取物对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的抗氧化保护作用。方法:60只小鼠随机分成正常对照组、CCl4模型组、绿茶提取物200、400、800mg/kg组及维生素E 250mg/kg组,连续给药7d,采用0.12%CCl4制备小鼠急性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)的水平;检测肝组织匀浆液超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,病理观察肝脏的损伤程度,酶联免疫法(Elisa)检测血清中核转录因子(NF-κB)、肿瘤坏死表达水平。结果:与模型组比较,绿茶提取物200、400、800mg/kg剂量组均能明显降低血清ALT、AST的水平,提高肝脏组织匀浆液SOD、CAT、GSH-Px活性;改善肝脏组织病理损伤;减低NF-κB,TNF-α的表达水平。结论:绿茶提取物具有保护急性肝损伤作用,可能是减低NF-κB、TNF-α的表达,减少氧化应激损伤,从而达到保护急性肝损伤的作用。

微小RNA-181a-5p在甲基苯丙胺依赖大鼠血清外泌体中的表达及生物信息学分析

目的检测甲基苯丙胺依赖大鼠和健康大鼠血清外泌体中微小RNA(miR)-181a-5p的表达,并对miR-181a-5p进行靶基因预测及相关生物信息学分析。方法用甲基苯丙胺复制大鼠条件性位置偏爱(CPP)模型。按照体重将雄性SD大鼠随机分为2组(每组10只):正常组(0.9%NaCl),实验组(2mg·kg^(-1)甲基苯丙胺)。实验组上午8:00皮下注射甲基苯丙胺,下午16:00皮下注射0.9%NaCl溶液,连续4 d。正常组同时皮下注射等体积0.9%NaCl溶液。实验组与正常组上午处置后,立即置于白箱训练1 h;下午皮下注射0.9%NaCl溶液后,立即置于黑箱训练1 h,连续训练4 d。在末次处置1 d后,进行位置偏爱测定,记录大鼠15 min内在白箱中停留时间及运动路程。用RT-qPCR技术检测大鼠血清外泌体中miR-181a-5p的表达水平;以Target Scan、miRanda及miRBD预测miR-181a-5p靶基因;用DAVID数据库对其靶基因进行功能聚类分析(GO)和生物通路(KEGG pathways)分析;以STRING在线分析软件对其靶基因蛋白进行相互作用分析。结果 CPP训练后,2组在白箱中停留时间(s)及运动路程(cm):正常组分别为202.67±28.24,3349.26±412.28;实验组分别为460.47±66.71,4475.97±585.74。实验组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。正常组、实验组血清外泌体中miR-181a-5p表达分别为3.39±1.79,10.23±4.32,组间差异有统计学意义(P<0.01)。预测得到miR-181a-5p靶基因108个,其功能主要富集于神经元的生成和分化、基因表达调控及谷氨酸转运等生物学过程,涉及内质网蛋白加工信号通路。miR-181a-5p靶基因编码蛋白之间存在复杂的相互作用,其中RAD23B、PRKCD、MAP2K1、NCBP1、GABRA1等在蛋白互作网络中具有核心地位。结论miR-181a-5p可能通过调控基因表达及谷氨酸转运等生物过程,作用于内质网蛋白加工信号通路,进而调节下游靶蛋白参与甲基苯丙胺成瘾的发生过程。

外泌体源性微小RNA在疾病诊治中的研究现状

外泌体是由脂质双分子层构成的一种纳米级别的囊泡小体,普遍存在于血浆、尿液、脑脊液等体液中。包裹在外泌体中的微小RNA(miRNA)能够被靶细胞摄取进而如同内源性的miRNA—样通过沉默靶基因而发挥其作用。外泌体可以通过携带miRNA增进器官或细胞间的信息交流,广泛参与血管新生、细胞迁移及通讯等过程。本文就近年来外泌体源性miRNA在心血管系统疾病、中枢神经系统疾病及肿瘤等诊治中的应用做简要综述。