韭葱黄条病毒、洋葱黄矮病毒和胡葱黄条病毒六安分离物CP基因克隆及同源性分析

设计特异性引物PCR扩增了六安大蒜病样中的韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus,LYSV)、洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)和胡葱黄条病毒(Shallot yellow stripe virus,SYSV)的全长CP基因,插入到pGEM-T载体并测序。分别比较3种病毒CP基因种内变异性和种间亲缘关系。结果表明LYSV六安分离物CP基因由864个碱基组成,与Genbank上已报道的68个LYSV不同分离物CP基因的核苷酸序列同源性为76.12%～84.31%;OYDV的CP基因由771个碱基组成,与Genbank上已报道的86个OYDV不同分离物同源性为81.06%～90.40%;SYSV的CP基因由774个碱基组成,与Genbank上已报道的11个SYSV不同分离物CP基因同源性为88.63%～94.32%;从分析结果来看,LYSV的CP基因不同分离物之间变异性较大,OYDV CP变异性不大,SYSV变异性很小;3种病毒都有1个以上的宿主,病毒种内不同宿主分离物之间CP序列差异很小。进化分析显示OYDV和SYSV的CP基因亲缘性较近并成簇,LYSV的CP基因与OYDV和LYSV的CP基因亲缘性较远。

大蒜A病毒CP基因的原核表达及抗血清制备

根据GenBank报道的大蒜A病毒(GarV-A)序列设计引物、扩增其外壳蛋白基因并进行序列分析。结果表明,GarV-A的CP基因与目前已报道的两种GarV-A不同分离物CP基因的核苷酸序列同源性为98%-99%;氨基酸序列同源性均为98%。将GarV-A CP基因插入表达载体pSBET,在大肠杆菌BL21(DE3)Plys E菌株中诱导表达。CP经12%SDS-PAGE和5%-20%SDS-PAGE两次纯化,免疫小鼠获得抗CP血清,Western blotting分析表明确定制备的抗体对CP具有高度特异性,ELISA检测表明制备的抗体能够与天然病毒离子结合,因此可以作为该病毒的检测。

大蒜B病毒CP基因的原核表达及抗血清制备

制备抗大蒜B病毒(Garlic virus B,GarV-B)CP血清,为研究侵染大蒜6种葱X病毒属(Allexivirus)病毒之间的血清学关系以及大田检测GarV-B奠定基础。该研究根据GenBank报道的GarV-B序列设计引物,扩增从六安市寿县分离获得的GarV-B外壳蛋白基因(CP)并进行序列比对分析。将GarV-B的CP基因插入表达载体pS-BET,在大肠杆菌BL21(DE3)plys E菌株中诱导表达。表达的CP经12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE两次制备电泳纯化,免疫小鼠获得抗CP血清。Western blot分析抗体的特异性,采用ELISA分析抗体能否与天然GarV-B病毒结合。结果显示:GarV-B的CP基因与目前已报道的GarV-B不同分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89%～90%,氨基酸序列同源性为92%～93%。表明制备的抗体对GarV-B的CP具有高度特异性,且能够与天然GarV-B病毒粒子结合。因此本研究制备的抗GarV-B的CP血清可以用于该病毒的检测。

X病毒属6个成员中国分离物CP基因的克隆及同源性分析

根据Genbank报道的大蒜A病毒(GarVA)、大蒜B病毒(GarVB)、大蒜C病毒(GarVC)、大蒜D病毒(GarVD)、大蒜E病毒(GarVE)和大蒜X病毒(GarVX)的序列设计引物,克隆外壳蛋白(CP)基因、测序并进行同源性分析。结果表明,6种病毒CP基因分别由756、735、780、753、759和732核苷酸组成。氨基酸序列多重对齐比对结果表明,GarVC与GarVD同源性最低(57.69%),GarVB与GarVX同源性最高(87.70%);同属6种病毒CP基因在C端变异性大,N端保守。进化树显示Gar-VA、GarVE和GarVD成簇,GarVB和GarVX成簇,GarVC与其他5种病毒亲缘关系较远。本研究结果为预测6种病毒之间是否存在血清学交叉反应,在进行ELISA检测是否会相互干扰提供指导意义。

校园的桂花林

扣题开头写法——扣题提示写什么:你只要来到我们校园,就会被迷住——粉色的教学楼、到处五颜六色的花朵、宽阔的足球场……尤其是校园东南角的桂花林,更是让人驻足流连。中间写法——承头顺写详重点:桂花林里种的是四季桂。顾名思义,四季桂就是一年四季都开花,所以它还有个别称叫月月桂。