鸡堆型艾美耳球虫gam56基因的克隆及其表达产物的免疫原性分析

为了研究堆型艾美耳球虫gam56基因的功能,提取堆型艾美耳球虫(扬州株)卵囊DNA,应用PCR扩增gam56基因,克隆至pGEM-T-Easy载体;测序、密码子优化后连接至pET-28a质粒,构建pET-28aEagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示:gam56基因全长1 323 bp,编码440个氨基酸;重组蛋白大小约49 ku,以可溶蛋白形式为多,能被组氨酸单抗特异性识别;该重组蛋白能被小鼠抗重组蛋白多克隆抗体以及鸡抗堆型艾美耳球虫、鸡抗毒害艾美耳球虫、鸡抗巨型艾美耳球虫和鸡抗柔嫩艾美耳球虫的阳性血清特异性识别。本研究结果为进一步探析堆型艾美耳球虫gam56基因功能与研制鸡球虫病基因工程疫苗奠定了基础。