云南省573名非综合征型聋学生SLC26A4基因IVS7-2A＞ G和2168 A＞ G的检测分析

目的分析云南省部分聋校非综合征型聋学生常见致聋基因SLC26A4突变热点的携带情况,初步了解当地聋病的分子病因及其特点。方法采集云南省部分聋校573例非综合征型耳聋学生(耳聋组)及232例听力正常人群(对照组)的外周静脉血,提取基因组DNA,PCR扩增含SLC26A4基因IVS7-2A>G、2168A>G(H723R)位点的基因片段,将扩增产物直接测序,用GeneTool软件分析碱基序列。结果耳聋组中19例携带SLC26A4基因IVS7-2A>G突变(3.32%,19/573),其中6例为纯合突变,13例为杂合突变,等位基因频率为2.18%(25/1 146);携带2168A>G(H723R)突变5例(0.87%,5/573),其中1例为纯合突变,4例为杂合突变,等位基因频率为0.52%(6/1 146);3例为同时携带IVS7-2A>G和2168A>G(H723R)的复合杂合突变(0.52%,3/573)。对照组中检测到SLC26A4基因IVS7-2A>G杂合突变2人(0.86%,2/232),2168A>G(H723R)杂合突变1人(0.43%,1/232)。结论云南省部分聋校非综合征型聋学生携带SLC26A4基因IVS7-2A>G、2168A>G(H723R)突变率低于国内平均水平。

SCID小鼠腹腔内人B细胞非霍奇金淋巴瘤模型的建立

目的为探讨人B细胞非霍奇金淋巴瘤诊治策略提供动物模型。方法采用4-5周龄的SCID小鼠,经腹腔接种7.5×106个Namalwa细胞。观察小鼠的发病情况及生存时间。取瘤组织进行HE及免疫组化染色检测CD20,CD79a,Ki-67和CD3抗原的表达。结果 Namalwa细胞在SCID小鼠腹腔发病的主要表现是腹腔出现肿块,时间(18.67±1.94)d,伴竖毛、精神萎靡、行动迟缓,一般情况随时间的延长而不断恶化。荷瘤SCID小鼠中位存活时间(28.00±6.36)d。瘤细胞主要浸润肠壁、肠系膜,胃、胰、肝、脾、肾、肺的周缘、盆腔以及邻近肌组织和皮肤。CD20在瘤组织表达为散在阳性,CD79a和Ki-67为弥慢阳性,CD3为阴性。结论成功建立SCID小鼠腹腔人Namalwa细胞株B细胞非霍奇金淋巴瘤模型,为探索淋巴瘤提供载体。

恶性实体瘤患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖与杀瘤活性

目的探讨恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖能力、免疫表型及杀瘤活性。方法用rhIFN-γ,rhIL-2,Anti-CD3mAb与恶性实体瘤患者外周血单个核细胞共孵育。分别在培养第4、7、10、13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型及MTT法检测对K562细胞的杀伤活性。结果恶性实体瘤患者外周血单个核细胞与rhIFN-γ,rhIL-2,Anti-CD3mAb孵育4、7、10、13d,细胞数分别增加(2.5±1.6)、(11.9±3.5)、(22.3±7.8)和(29.5±6.1)倍。CD3+、CD4+、CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13天分别从(62.8±7.6)%、(31.5±5.8)%、(44.9±8.2)%和(1.3±1.1)%增加到(89.3±9.5)%、(50.1±7.2)%、(57±9.0)%和(37.0±12.7)%。对K562细胞的杀伤效应在第4、7、13天分别为(23.6±8.5)%、(56.4±7.2)%和(80.1±4.5)%。结论rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb诱导恶性实体瘤患者外周血单个核细胞活化为以CD3+CD16+CD56+为主的细胞因子诱导的杀伤细胞,细胞增殖力强,并对K562细胞有强大的杀伤活性。

人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞的分化

背景:国内外的研究多采用细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞,而较少用人羊膜与骨髓间充质干细胞共培养的方法进行诱导分化。目的:观察人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的可行性。方法:体外分离培养、扩增人骨髓间充质干细胞,选用第5代人骨髓间充质干细胞与健康人羊膜共培养12d进行诱导分化。结果与结论:人骨髓间充质干细胞贴壁生长,呈长梭形,流式细胞仪检测表达CD29,CD44的阳性细胞数分别为96.6%,94.6%。人羊膜与人骨髓间充质干细胞共培养12d,人骨髓间充质干细胞渐变为扁平的表皮样细胞,免疫组化染色显示CK19散在阳性,广谱CK为弥漫阳性。说明人羊膜可诱导人骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞。

大肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达及其意义

目的 探讨大肠癌患者外周血CK2 0mRNA的表达及其意义。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 4 2例大肠癌患者术前、术后外周血及 2 0例大肠癌患者新鲜癌组织标本中CK2 0mRNA的表达 ,另以 2 0例健康成年自愿者作对照。结果 4 2例大肠癌患者外周血CK2 0mRNA呈阳性表达者术前为 19例(45 .2 4 % ) ,术后为 14例 (33.33% ) ;2 0例大肠癌患者新鲜癌组织中CK2 0mRNA表达均为阳性。而正常对照组2 0例外周血CK2 0mRNA表达均为阴性。且大肠癌外周血CK2 0mRNA阳性表达与组织学类型无关 (P >0 .0 5 ) ,但与有无淋巴结转移、肝转移及Dukes分期有关 (P<0 .0 5 )。结论 检测外周血中CK2 0mRNA表达将有助于大肠癌的早期诊断、预后的判断及治疗方案的制定。

恶性实体瘤患者自体CIK细胞的体外扩增及初步临床应用

目的观察恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)在自体血浆中的增殖特性,回输治疗的安全性及近期疗效。方法用淋巴细胞分离液分离获取40例恶性实体瘤患者外周血单个核细胞,在含10%自体血浆的RPMI-1640培养液中添加rhIFN-γ、Anti-CD3mAb和rhIL-2联合诱导单个核细胞为CIK细胞。在培养第13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型,并将细胞进行自体回输。结果在培养第13天,CIK细胞得到大量扩增,细胞数增加30.0±5.2倍。CD3+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13 d分别为(93.0±6.1)%和(25.8±12.2)%。40例恶性实体瘤患者回输自体CIK细胞后,6例部分缓解;13例好转;9例病情稳定;12例进展。治疗总有效率为15%。治疗过程中主要出现畏寒、发热,未观察到其它明显的毒副作用。结论恶性实体瘤患者自体血浆可以高效扩增CIK细胞,回输治疗安全有效,且无明显的毒副作用。

应用蛋白芯片检测CIK细胞与其培养上清蛋白谱的改变

目的应用蛋白芯片技术检测不同患者来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)细胞裂解液和培养上清的蛋白谱改变。方法将3例不同患者来源的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)在体外经细胞因子诱导成CIK细胞,经流式细胞术测定细胞表型后,分别收集培养第20天的CIK细胞和细胞培养上清,应用AAH-BLM-1蛋白芯片分别获得CIK细胞裂解液和细胞培养上清中507个蛋白的改变。结果 CIK细胞在培养第20天,CD3+和CD3+CD56+的T细胞分别为(86.43±10.65)%和(38.58±3.94)%。CIK细胞培养上清液中共有6个蛋白明显升高(Signal≥700,FC≥1.8):MIP-1β(FC=21.28)、GzmA(FC=5.54)、IFN-(FC=2.78)、MCP-1(FC=2.22)、TMPO(FC=2.05)、IL-13(FC=1.81);细胞裂解液共有8个蛋白明显升高(Signal≥700):GzmA(Signal=1 968.77)、ET(Signal=1,398.60)、IL-13(Signal=1 333.47)、TFPI(Signal=959.76)、NRG3(Signal=9 4 4.0 9)、I L-7(Signal=8 6 7.1 2)、MIP-1α(Signal=833.43)、MIP-1β(Signal=704.88)。将上述两组结果对比分析后发现GzmA、IL-13和MIP-1β这3个蛋白在两组中均明显升高。结论 CIK细胞在活化过程中合成并分泌如GzmA、IFN-γ、IL-8和IL-13等多种蛋白产物,这些蛋白产物通过直/间接杀伤肿瘤细胞并促进T细胞增殖活化在抗肿瘤治疗中发挥重要作用。

恶性实体瘤患者自体细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗的安全性改进

目的观察恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞在自体血浆中的增殖特性及静脉回输治疗的安全性。方法用淋巴细胞分离液分离获取50例恶性实体瘤患者外周血单个核细胞,在含10%自体血浆的RPMI-1640培养液中添加rhIFN-γ、Anti-CD3mAb和rhIL-2联合诱导单个核细胞为细胞因子诱导杀伤细胞。在培养第13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型,并将细胞进行自体回输。结果在培养第13天,细胞因子诱导杀伤细胞得到大量扩增,细胞数增加30.0±5.2倍。CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13天分别占(93.0±6.1)%、(28.4±7.2)%、(65.5±4.5)%和(25.8±12.2)%。恶性实体瘤患者回输自体细胞因子诱导杀伤细胞的治疗过程中未观察到明显的毒副作用,主要表现有畏寒、发热。结论恶性实体瘤患者血浆可以高效扩增自体细胞因子诱导杀伤细胞,临床应用安全可靠,且无明显的毒副作用。

大肠癌外周血CEAmRNA的表达及临床意义

目的 :探讨大肠癌外周血中CEAmRNA的表达及临床意义。方法 :以CEAmRNA为靶基因 ,运用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 4 2例大肠癌术前、术后外周血中CEAmRNA的表达。结果 :2 0例正常人外周血中均无CEAmRNA表达。 2 0例大肠癌组织标本均有CEAmRNA表达。术后外周血中CEAmRNA的阳性率与大肠癌的Dukes分期密切相关 ,术后外周血中CEAmRNA呈阳性的大肠癌日后发生肝转移的概率高于CEAmRNA呈阴性的。结论 :大肠癌外周血CEAmRNA的检测可能成为判断大肠癌恶性程度、转移。

大肠癌患者外周血癌细胞检测的临床意义

目的 探讨大肠癌患者外周血癌细胞的检测及临床意义。方法 以CK2 0mRNA为靶基因 ,运用逆转录一聚合酶链反应方法 (RT -PCR)检测 2 0例正常人和 42例大肠癌患者术前、术后外周血中CK2 0mRNA表达。结果 2 0例正常人外周血中均无CK2 0mRNA表达。 2 0例大肠癌组织标本中均有CK2 0mRNA表达。CK2 0mRNA阳性检出率与Dukes分期、淋巴结转移、肝转移存在差异有显著性。结论 RT -PCR方法检测大肠癌外周血癌细胞具有高度特异性和敏感性。外周血中CK2 0mRNA检测可邦助综合判断疾病恶性程度和预后 。

多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型

目的:用多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞,并了解其在体外的增殖能力及免疫表型的变化. 方法:用Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获取10例大肠癌患者外周血单个核细胞,rhIFN-γ,rhIL-2,Anti- CD3mAb共孵育.分别在第0,4,7,10,13 d计细胞数,并通过流式细胞术检测细胞免疫表型. 结果:大肠癌患者外周血单个核细胞与IFN-γ,IL-2,Anti- CD3mAb共孵育4,7,10,13d,细胞数分别增加2.69±0.9, 14.1±3.7,23.0±5.0和31.2±3.0倍.CD3+,CD4+,CD8+ 和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13 d分别从(62.8±7.6)%, (31.5±5.8)%,(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%,(48.0±6.3)%,(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%. 结论:rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb能诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞,体外增殖力强,是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.

载脂蛋白B基因多态性在心脑血管疾病低发的云南德宏傣族中的分布情况

目的探讨载脂蛋白（apolipoprotein，Apo）B基因的Xbal和EcoRI酶切多态性在心脑血管疾病低发的云南德宏傣族人群中的分布情况。方法在云南德宏和昆明两地随机抽样164名傣族和74名汉族人群，提取基因组DNA后，应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—restrictionfragmentIengthpolymorphism，PCE--BFLP）技术检测ApoB基因的Xbal和Ecogl酶切多态性。结果ApoB／Xbal的等位基因×＋，×-；ApoB／EcoPq的等位基因E＋，E-在傣汉两民族中的分布频率依次为：傣族：0037，0963、0930、0070；汉族：0．054、0．946、0.951、0049。ApoB基因的4个等位基因频率在傣汉两民族间无显著性差异（P〉0.05）。结论ApoB的Xbal与EcoRI酶切多态性不是德宏傣族人群具有较低心脑血管疾病患病率的易感因子。傣族人群具有较低的心脑血管疾病患病率应归因于遗传因素和环境因素协同作用的结果。

人脐带Wharton’s jelly间充质干细胞生物学特性的研究

目的探讨人脐带Wharton’s jelly间充质干细胞的培养方法及生物学特性。方法将脐带Wharton’s jelly剪成约0.5 mm3种植到培养瓶,3 h后添加培养液。细胞达90%融合时用胰酶消化传代。用免疫组化检测波形蛋白的表达;用流式检测细胞膜表型;用诱导液检测其分化为脂肪样细胞和神经样细胞的潜能。结果培养6 d左右,细胞从组织块游出,为长梭形的成纤维样细胞,传代后细胞增殖加快,呈放射状分布。间充质干细胞标记物CD90等为阳性,而CD34等为阴性;波形蛋白呈强阳性。成脂诱导后,细胞质出现脂滴,油红O染色为阳性。经黄芪诱导24 h,细胞表达Nestin和NF,而NSE和GFAP为阴性。结论人脐带Wharton’s jelly中有间充质干细胞,且有多向分化潜能。

乙型肝炎病毒前C基因突变的检测方法与临床研究

为了解ＨＢＶ前Ｃ基因突变与血清“ｅ”抗原和干扰素治疗的临床关系，采用错配碱基ＰＣＲ技术检测ＨＢＶ前Ｃ基因突变，结果发现１４８例“ｅ”抗原阴性病人３４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性；２０例肝硬化，肝癌病人４例ＨＢＶＤＮＡ阳性，全部肝细胞ＨＢＶＤＮＡ阳性；６８例“ｅ”抗原阳性病毒血清前Ｃ基因突变仅为１３２％，５６份抗“ｅ”阳性病毒血清“Ａ”突变频率为７１４％。干扰素治疗对“Ｇ”野生型病毒感染患者优于“Ａ”突变型病毒感染患者。

NS－1细胞载体的抗核抗体检测

本文应用小鼠（ＢＡＢ／Ｃ）骨髓瘤细胞（ＮＳ－１）细胞为抗原，采用间接免疫荧光技术检测了２５３例血清标本中的抗核抗体（ＡＮＡ），并与鼠肝细胞为载体法进行了比较。结果此法具有抗原处理易于控制，结果观察准确、灵敏、清楚等优点。

紫杉醇联合INF-α-2b对K562细胞的诱导凋亡作用

目的 研究紫杉醇联合INF α 2b对K5 62细胞的诱导凋亡作用。方法 应用体外培养的K 5 62细胞株 ,经不同浓度的紫杉醇及INF α 2b培养 48h后 ,采用MTT法检测细胞杀伤活性变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测凋亡细胞DNA ,采用An nexin V法检测凋亡细胞 ,并设立对照组。结果 经紫杉醇联合INF α 2b处理后的K 5 62细胞生长抑制率及凋亡率 ,较单用紫杉醇或单用INF α 2b处理的K 5 62细胞明显增高。结论 紫杉醇联合INF α 2b后诱导K 5

宫颈疾病与沙眼衣原体及人乳头瘤病毒感染的临床研究

应用聚合酶链反应对正常人与宫颈炎患者的宫颈分泌物及宫颈息肉组织进行沙眼衣原体及人乳头瘤病毒检测，结果显示在上述患病人群中检出率上升，差异显著。提示宫颈息肉，特别是复发型与沙眼衣原体及人乳头瘤病毒感染密切相关。对以上疾病除常规治疗外，须加用抗生素进行综合治疗。