Coprinopsis cinerea漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

通过反转录反应从Coprinopsis cinerea okayama 7#130中克隆得到laccase 1,应用SignalP 3.0 Server软件分析其氨基酸序列后,设计不含信号肽序列的新引物扩增得到漆酶基因,构建重组酵母表达载体pPIC9K-lac1,电击转化毕赤酵母GS1115,并用甲醇诱导表达,之后研究重组酶的酶学性质。克隆得到的laccase 1碱基数为1 593 bp,编码530个氨基酸,其中信号肽包含18个氨基酸。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示重组蛋白大小约为65 kDa。酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为4.3。成功分泌表达的漆酶活力达到1.108 U/mL。

Thermotoga neapolitana α-葡萄糖苷酶基因克隆及表达

本文拟克隆新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana DSM 4359)的一种α-葡萄糖苷酶基因(TNAG),其GenBank注册号为lcl27401。首先以T.neapolitana DSM 4359基因组DNA为模板,通过PCR扩增目的基因并完成T克隆,在NCBI数据库中比对结果表明:目的基因与Thermotoqa sp.RQ2等氨基酸序列相似度高于99%。再将目的基因连接至表达载体pET-32a(+),并导入大肠杆菌Rosetta中用IPTG诱导表达。SDS-PAGE显示表达蛋白的大小约为72KDa。热纯化后酶液测活反应的最适温度为80℃,最适pH在5.0左右。

一株嗜热梭菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达

以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。结果表明:该基因大小为1 101 bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60 kDa,纯化后重组酶活力为103 U/mL;酶学性质实验结果表明:酶最适pH值为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH值稳定性。

牛乳加工中热稳定性的研究进展

本文首先介绍了牛乳常用的热处理工艺,分析了不同热处理工艺的特点及差异,并对比了超高温瞬时灭菌和保持式灭菌的加热方式及产品特性。其次总结了牛乳在加热过程中发生的变化,包括牛乳主要营养成份:蛋白质、脂肪和乳糖等变化以及加热过程中牛乳理化特性的变化。然后总结了牛乳加工中热稳定性的影响因素及影响的变化趋势,包括加工工艺、季节、泌乳期、pH值、矿物盐、蛋白质等理化指标。最后总结了牛乳热稳定性的评价方法。

微观角度看牛奶在膜过滤过程中滤膜结垢与酪蛋白胶束的关系

对牛奶过滤过程中由酪蛋白胶束引起的滤膜表面凝胶现象的相关研究进行了综述,从微观角度出发,针对酪蛋白胶束特殊分子结构与滤膜表面形成的结垢现象之间的关系进行了讨论,同时还对建立牛奶过滤预测模型的相关研究进行了探讨。