NDRG1及nm23在喉鳞状细胞癌中的表达特点及其对喉鳞癌患者预后的影响

目的:分析N-myc下游调节基因1 (N-myc downstream regulated gene 1, NDRG1)和非转移性第23基因(non-metastatic 23rd gene, nm23)在喉鳞癌中的表达特点及其对喉鳞癌患者预后的影响。方法:利用免疫组化方法,观察喉息肉、喉乳头状瘤及喉鳞癌中NDRG1和nm23蛋白的表达特点,对25位喉鳞癌患者进行随访以了解2个因子对患者预后的影响。结果:(1) NDRG1蛋白在喉息肉中表达最弱,从喉息肉→喉乳头状瘤→喉鳞癌的表达阳性率有逐渐升高趋势,两两比较差异有显著性(P = 0.000);高、中、低分化喉鳞癌中NDRG1表达也为逐渐升高态势,高分化与中分化、低分化鳞癌间差异有显著性(P = 0.001, 0.000);T1~T2期喉鳞癌中NDRG1的表达阳性率高于T3~T4期喉鳞癌组织中的,淋巴结未发生转移组中NDRG1的表达阳性率高于淋巴结发生转移组,但差异均无显著性(P > 0.05);(2) 喉息肉与喉乳头状瘤、喉鳞癌中nm23蛋白表达差异有显著性(P = 0.000),T1~T2期喉鳞癌组织nm23蛋白表达高于T3~T4期(P = 0.000),淋巴结未发生转移组中nm23蛋白表达明显高于淋巴结发生转移者(P = 0.004);在高、中、低分化喉鳞癌中,nm23蛋白表达阳性率逐渐升高,但差异无统计学意义(P = 0.717);(3) 喉鳞癌患者NDRG1蛋白表达越强,患者死亡风险越大。结论:(1) NDRG1可能与喉鳞癌的发生、病理学分级和临床分期有关;(2) nm23低表达与喉鳞癌进展有关;(3) NDRG1蛋白表达增强有可能作为预测喉鳞癌患者预后不良的指标之一。

NDRG1基因在亚洲人与高加索人大肠癌细胞株中恶性行为的比较

目的:NDRG1在大肠癌中的作用至今仍存在争议,是否与种族有关未见报导,本研究旨在分析NDRG1基因在亚洲人与高加索人大肠癌细胞株中的作用。方法:利用细胞计数法测定细胞生长速度;通过RT-qPCR在mRNA水平比较NDRG1在亚洲人和高加索人大肠癌细胞中的表达;24-Transwell法检测亚洲人和高加索人大肠癌细胞侵袭和迁移能力;流式细胞术检测亚洲人和高加索人大肠癌细胞的大小、细胞周期、DNA含量及NDRG1蛋白含量等;裸鼠背侧皮下移植检测细胞的增殖速度。结果:1) Caco2细胞的体外增殖速度比SNU-C1细胞快,且差异有统计学意义(P P > 0.05),而48 h和72 h两个时间点两组细胞之间差异有统计学意义(P = 0.006, P = 0.000)。4) Caco2组除24 h组迁移能力比SNU-C1组低之外,48 h和72 h两个时间点迁移能力均高于SNU-C1组,且两组细胞之间差异有统计学意义(P = 0.038, P = 0.045, P = 0.012)。5) 经FSC分析发现Caco2平均体积明显大于SNU-C1,从SSC分析得到SNU-C1细胞表面的皱折度、细胞内亚细胞器、颗粒的数目等均大于Caco2。6) 两种细胞的细胞周期各间期之间差异无统计学意义(P > 0.05)。7) 两株细胞NDRG1蛋白含量为Caco2细胞平均值36.3,SNU-C1细胞平均值86.5。8) 两株细胞NDRG1的DNA含量为Caco2细胞平均值45,SNU-C1细胞平均值50.2。9) 裸鼠背侧皮下移植后Caco2细胞增殖速度快于SNU-C1细胞的,但差异无统计学意义(P > 0.05)。结论:在高加索人大肠癌细胞株Caco2与亚洲人大肠癌细胞株SNU-C1中NDRG1的mRNA水平存在差异,且在体外侵袭与迁移中的作用也存在差异。

云锡矿工肺癌组织DAPK基因表达及其甲基化异常

目的探讨云锡矿工肺癌组织DAPK基因的蛋白表达及其甲基化异常。方法收集云锡矿工肺癌组织50例及10例正常肺组织。采用免疫组化检测DAPK蛋白表达,采用原位细胞凋亡检测法检测细胞凋亡,采用甲基化特异性聚合酶链反应检测DAPK基因启动子甲基化。结果50例癌组织中,38%DAPK蛋白表达阴性,36%检测到DAPK基因启动子异常甲基化,DAPK蛋白表达与细胞凋亡有关(P<0·05),DAPK基因启动子异常甲基化与DAPK蛋白表达呈负相关(P<0·05)。结论①云锡矿工肺癌组织中DAPK基因表达减少或缺失;②云锡矿工肺癌发生发展可能与DAPK基因异常甲基化有关。

案例教学在病理学两阶段教学中的应用

病理学是一门实践性很强的基础医学,学好病理学必须理论联系实际。案例教学法是一种互动式教学方法,能激发学生学习兴趣、培养学生能力、提高教学效果。文章探讨案例教学在病理学两阶段教学中的应用。

DAPK基因启动子甲基化在云锡矿粉诱导F334大鼠肺癌中的作用

目的探讨DAPK基因启动子甲基化在云锡矿粉诱导F344大鼠肺癌发生、发展过程中的作用。方法将云锡矿粉诱导的F344大鼠肺癌石蜡标本连续切片,手工显微切割分离各阶段病变组织,甲基化特异性聚合酶链反应检测DAPK基因启动子甲基化状况。诱癌方法:近交系F344大鼠190只,随机分为4组:矿粉灌注组(100只)、呋喃甲醛组(30只)、生理氯化钠组(30只)、正常对照组(30只),前3组给予灌注,正常对照组不灌注。结果经矿粉染毒的大鼠中,12例肺癌中有4例检测到DAPK基因启动子甲基化,3例原位癌中有1例检测到DAPK基因启动子甲基化,4例鳞状上皮非典型增生中有1例检测到DAPK基因启动子甲基化,23例不典型腺瘤样增生中有4例检测到DAPK基因启动子甲基化。结论DAPK基因启动子甲基化在云锡矿粉诱发F344大鼠肺癌发展过程有一定作用。

云锡矿工肺癌中FHIT基因外显子缺失及其蛋白表达

背景与目的:云南锡矿工人肺癌发生率极高。已有研究表明,脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad,FHIT)异常与肺癌的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨云锡矿工肺癌中FHIT外显子3、4、5、8缺失及其蛋白表达异常。方法:采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测30例云锡矿工肺癌组织、云锡矿工肺癌细胞株YTMCC及22例其他地区非矿工肺癌组织中FHIT外显子3、4、5、8的缺失。用免疫组化法检测90例人肺癌组织FHIT蛋白表达,并对43例云锡矿粉诱发的不同阶段F344大鼠肺癌肺组织进行FHIT蛋白检测。结果:FHIT基因异常在YTMLC细胞表现为FHIT基因3和8两个外显子的缺失,而矿工和非矿工肺癌组织可出现3、4、5、8中1个或几个外显子的杂合性缺失,云锡矿工肺鳞癌中FHIT基因外显子缺失及蛋白失表达率分别为68.2%及70.6%,矿工肺鳞癌和腺癌、非矿工肺鳞癌和腺癌FHIT基因杂合性缺失与正常肺组织相比差异均有显著性(P<0.01)。矿粉诱发F344大鼠肺癌变早期即有FHIT的失表达,在8例鳞状上皮非典型增生、原位癌及早期肺鳞癌FHIT蛋白失表达率达100%。结论:在矿工及非矿工肺癌中,FHIT基因外显子缺失及其蛋白表达异常均常见。肺癌早期及癌前病变即有很高的FHIT失表达率,对FHIT检测分析有可能作为肺癌早期筛查的指标之一。

非临床专业医学生的病理学教学问题及教学方法探讨

病理学是一门重要的桥梁学科。针对非临床专业医学生对病理学的重视程度远不及专业课程,学习主动性不高和教学效果常常不理想等情况,要积极探讨相应的教学方法,因材施教,尽可能地增强教学趣味,提高学生的学习积极性。在教学过程中进行人文思想和德育教育,对学生的职业生涯和人品人格有积极的影响。

个旧矿工肺癌与其他地区非矿工肺癌中SP-B表达的比较研究

目的 :比较云南个旧地区矿工与其他地区非矿工肺癌组织中表面活性蛋白B (SP -B)表达的差异 ,探讨Ⅱ型肺泡上皮增生与个旧地区肺癌矿粉沉着及纤维化的相关性 .方法 :用免疫组化S -P法检测了5 0例个旧矿工肺癌、 4 0例其他地区非矿工肺癌组织及 17例正常肺组织中SP -B的表达 ,并用图像分析仪对SP -B阳性细胞数及纤维化面积作定量分析 .结果 :个旧矿工肺癌癌周Ⅱ型肺泡上皮细胞数比其他地区非矿工肺癌和正常肺组织都高 (P <0 0 1) ,个旧矿工肺癌矿粉沉着及纤维化明显高于其他地区非矿工组 ,肺泡Ⅱ型上皮细胞增生与肺癌组织的纤维化程度呈正相关 (γs=0 96 1) .结论 :Ⅱ型肺泡上皮增生与个旧矿工肺癌明显的纤维化有关 ,SP -B阳性细胞见于增生和异常增生的Ⅱ型肺泡上皮 ,并与肺鳞癌有移行过度 ,提示部分肺鳞癌有可能起源于Ⅱ型肺泡上皮 .

云南白药对血管平滑肌增殖基因Myocardin的影响研究

目的:研究云南白药对活性氧诱导的SM-Myocd细胞增殖的影响。方法:采用不同浓度过氧化氢(H_2O_2)作为外源性活性氧刺激SM-Myocd细胞增殖,应用MTT、Western blot测定等方法观察给予不同浓度云南白药干预处理,观察云南白药对H_2O_2作用后SM-Myocd细胞增殖的影响。结果:H_2O_2具有促进SM-Myocd细胞增殖的作用,其浓度为50um时增殖作用最为显著(P<0.05);云南白药能够抑制H_2O_2促SM-Myocd细胞的增殖作用,其浓度为10ug/ml时抑制作用最为显著(P<0.05)。结论:云南白药具有减轻H_2O_2对SM-Myocd细胞的损伤作用,对动脉粥样硬化斑块形成、血管成形术后再狭窄等心血管疾病的防治具有应用前景,可望成为新的干预靶点。

干扰肿瘤相关巨噬细胞的P2X4受体表达可抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭

目的研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及分子机制。方法将16只健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组、对照组(8只/组),利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核,建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21天处死小鼠,取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织,采用HE染色观察小鼠胶质瘤形态,利用免疫荧光检测Iba-1、P2X4受体的表达情况;应用GL261条件培养基将RAW264.7细胞诱导为TAMs,采用RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关标志物及P2X4受体在TAMs的mRNA表达情况;采用Westernblot检测P2X4受体在TAMs的蛋白表达情况;采用siRNA P2X4,下调TAMs中P2X4受体的蛋白表达,RT-qPCR、Westernblot检测siRNA P2X4转染后TAMs中IL-1β、IL-18的mRNA及蛋白表达;利用transwell侵袭及迁移实验检测siRNA P2X4转染后TAMs对GL261细胞侵袭迁移能力的影响。结果与对照组相比,荷瘤小鼠脑胶质瘤组织中有较高数量的Iba-1阳性细胞(P<0.0001),且P2X4受体在Iba-1阳性细胞中的表达增高(P=0.001);使用GL261条件培养基刺激RAW264.7细胞转化为TAMs后,M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调(P=0.0001、0.001),M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNF-α表达也上调(P=0.006、0.001),但以M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调更为显著,同时TAMs中P2X4受体蛋白表达水平及mRNA水平均增高(P=0.005、0.014)。干扰TAMs中P2X4受体表达引起其IL-1β、IL-18的mRNA(P<0.01)及蛋白表达水平(P<0.01,P<0.05)降低,并抑制TAMs促进胶质瘤细胞侵袭和迁移的能力(P=0.004、0.017)。结论降低肿瘤相关巨噬细胞P2X4受体表达可能通过IL-1β、IL-18影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭。

小胶质细胞参与新生儿缺氧缺血性脑损伤所致突触异常的研究

目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后突触异常的机制。方法:采用改良的Rice-Vannucci法建立C57BL/6J和CX3CR1GFP转基因小鼠的HIBD模型。用TTC染色、HE染色、Fluoro-Jade B(FJB)染色、体重称量和行为学测试确定HIBD模型建立成功。Western blot检测吞噬相关蛋白和突触相关蛋白在脑内的表达。通过免疫荧光染色法检测突触与小胶质细胞的关系。结果:HIBD后,损伤同侧大脑出现神经元核固缩、核碎裂、核溶解;FJB染色结果显示坏死神经元增多;体重和行为学评分降低;吞噬相关蛋白溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)和髓系细胞触发受体2(TREM2)及突触相关蛋白突触致密蛋白95(PSD95)表达增加,神经元核抗原(NeuN)表达减少;免疫荧光结果显示CD11b+细胞在梗死边缘区表达LAMP1和PSD95;共聚焦显微观察证实小胶质细胞在HIBD后表达TREM2,且与突触蛋白(SYP)共定位。结论:HIBD后脑内驻留巨噬细胞——小胶质细胞的吞噬功能被激活,并通过TREM2上调吞噬功能而介导突触丢失,进而在HIBD后的行为异常中发挥作用。

LEA、CDw75在大肠腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨LEA、CDw75在大肠腺癌组织中的表达及其临床意义。方法免疫组化方法检测11例正常大肠黏膜、43例大肠腺瘤、51例大肠腺癌不伴有淋巴结转移、21例大肠腺癌伴有淋巴结转移组织中LEA和CDw75的表达,并随访到45例大肠腺癌患者,对检测结果进行统计学分析和预后评估。结果(1)LEA和CDw75在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠腺癌组织中的表达呈逐步升高态势(P<0.05);并与大肠腺癌分化程度有一定关系(P<0.05),但与患者是否伴有淋巴结转移无关(P>0.05);(2)LEA和CDw75在绒毛状腺瘤中的表达高于管状腺瘤(P<0.05);(3)Cox回归生存分析结果显示患者性别、年龄、临床分期、LEA和CDw75表达是影响大肠腺癌患者预后的因素。结论(1)LEA和CDw75在大肠腺癌发生发展中有一定作用;(2)患者的性别、年龄、临床分期、LEA和CDw75表达强弱可作为大肠腺癌预后判断的参考指标。

早期活体判断新生小鼠缺氧-缺血性脑损伤程度

目的探讨早期活体区分缺氧-缺血性脑损伤(HIBD)程度的方法,为后续研究不同程度HIBD的分子机制奠定基础。方法采用改良Rice-Vannucci法构建C57BL/6 J小鼠HIBD模型。模型建立后1 d和3 d经活体剪开小鼠头皮行脑组织大体观察,区分轻重损伤。其后运用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、激光散斑脑血流成像、HE染色、Fluoro-Jade B(FJB)染色及术前、术后体重差,验证活体观察脑损伤程度的可靠性。结果HIBD后1 d和3 d经活体剪开小鼠头皮行脑组织大体观察,可将其区分为轻度损伤(HI-M)组和重度损伤(HI-S)组。HI-S组损伤侧出现明显的梗死灶,脑血流量显著减少,大量神经元坏死,体重较术前显著降低。HI-M组损伤侧脑血流量仅在HIBD后3 d减少,形态学观察到损伤侧皮层和海马区神经元排列疏松,体重较术前降低。结论剪开头皮行脑组织大体观察是早期活体情况下区分HIBD轻度及重度脑损伤的可靠方法。

云锡矿工肺癌及其他地区肺癌窖蛋白-1表达变化

目的探讨窖蛋白-1(caveolin-1)在正常肺组织、云锡矿工肺癌及其他地区肺癌中的表达及其作用,并对云锡矿工肺癌及其他地区肺癌中的caveolin-1表达进行比较研究。方法收集正常肺组织15例、云锡矿工肺癌组织40例及其他地区肺癌组织40例,采用免疫组化方法检测caveolin-1表达。结果15例正常肺组织中支气管上皮细胞caveolin-1表达均呈阴性;caveolin-1在云锡肺癌组织中及其他地区肺癌组织中的表达阳性率分别为65.0%、57.5%,2组肺癌中caveolin-1表达与正常肺组织中caveolin-1表达差异具有统计学意义(P<0.01),且caveolin-1在云锡矿工肺癌中的表达高于其他地区肺癌。结论①caveolin-1在正常肺组织的支气管上皮细胞中呈阴性表达,而在肺癌组织中呈阳性表达,提示caveolin-1可能是一个癌基因;②caveolin-1在云锡矿工肺癌中的表达强度高于其他地区肺癌,其机制仍需进一步研究。

云锡矿粉诱发F344大鼠肺癌的病理改变

目的建立云锡矿粉(无氡)诱发F344大鼠肺癌的动物模型,探讨其肺癌发生过程及不同阶段的病理变化。方法190只大鼠随机分为矿粉组(100只)、呋喃甲醛组、生理盐水组及正常对照组(各30只)。除正常对照组外,其他3组分别以质量分数为6%的矿粉悬液、体积分数为2%的呋喃甲醛及生理盐水每次0.2 ml经气管灌注,每周1次,从灌注1周后定期分批处死大鼠,最后处死的1只大鼠染尘100周。光学显微镜及电子显微镜观察矿粉作用下肺组织的形态改变,免疫组化检测高分子和低分子角蛋白确定诱发肺癌的组织类型,Pollak染色观察肺纤维化的进展。结果矿粉组大鼠最早期出现肺部炎症,随着炎症消退见肺间质纤维增生,肺泡及支气管上皮单纯性增生、乳头状增生及鳞状化生,继而出现肺泡非典型腺瘤样增生、鳞状上皮非典型增生,最终出现肺癌。共发生肺癌14例,其中腺癌9例、鳞癌2例、复合癌3例,其他3组均未发生肺癌,矿粉组癌变率与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。鳞状化生及鳞癌也可发生于肺泡并表达高分子角蛋白。矿粉组肺纤维化31例,纤维化程度随矿粉沉着增多而呈进行性加重。结论无氡云锡矿粉具有诱癌性,F344大鼠矿粉诱发性肺腺癌及鳞癌都可发生于肺泡,Ⅱ型肺泡上皮是否是肺腺癌及外周型肺鳞癌的起源细胞值得深入研究。