大肠杆菌nmpC基因的快速敲除

旨在利用Red重组系统和Xer重组系统获得大肠杆菌NmpC外膜蛋白基因删除菌株。采用PCR扩增nmpC基因片段,构建pMD-nmpC载体,EcoR I酶切并经Pfu补平酶切缺口后与difGm片段连接,得到重组质粒T-nmpC∷difGm,PCR扩增获得突变盒nmpC::difGm,电转化突变盒片段入大肠杆菌细胞,PCR扩增验证是否获得没有抗性标记的ΔnmpC基因删除菌株。结果显示,成功构建了重组质粒T-nmpC∷difGm,在Red重组酶和Xer重组酶的介导下,进行同源重组和抗生素标记去除,并经PCR验证得到ΔnmpC基因删除菌株。首次成功获得大肠杆菌ΔnmpC无抗生素标记基因删除菌株,该基因删除菌株可为深入研究NmpC的功能提供研究基础。