核酸检测试剂盒检测一致性评估体系构建初探

目的对某血液核酸检测试剂盒检测的性能进行评估,构建一致性评估体系,分析检测结果的影响因素。方法收集本站无偿献血者标本18644份,ELISA检测剔除乙肝表面抗原(HBsAg)双阳性标本189份,分别采用考核试剂与对照试剂(Roche公司)对18455份标本进行HBV DNA平行检测,结果不符的标本采用第三方试剂(Grifols公司,HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA单检灵敏度分别为4.5 IU/mL、2.4 IU/mL、17.3 IU/mL,明显优于其他同类试剂,故将其作为确证试剂)进行确证,比较2种方法之间的一致性。结果本研究中均未检测到HCV RNA、HIV RNA阳性的标本。18455份标本初次检测中,考核试剂与对照试剂检测结果一致的阳性标本有12份,结果一致的阴性标本有18378份,结果不一致的标本有65份,阳性符合率为85.17%,阴性符合率为99.66%,2种试剂的符合率为99.65%。为了进一步明确65份不一致的标本的真实感染情况,采用乙肝5项定性和核酸单检的方法对其进行检测,综合乙肝三系和核酸检测结果进行对感染状态进行综合评定,结果显示,考核试剂与对照试剂检测结果一致的阳性标本有60份,结果一致的阴性标本有18371份,结果不一致的标本有24份,阳性符合率为86.96%,阴性符合率为99.92%,2种试剂的符合率为99.87%。计算Kappa值为0.83、约登指数(Youden指数)为0.40。以假阳性率(1-特异性)为横坐标,以真阳性率(灵敏度)为纵坐标绘制ROC曲线,ROC曲线下面积为0.705。选取189份HBsAg双阳性标本进行一致性检测,对考核试剂和对照试剂的检测Ct值作相关性分析和线性拟合,相关系数r=0.972。以考核试剂与对照试剂定量值的对数值均值为横坐标、差值为纵坐标构建Bland-Altman模型,有96.30%的考核试剂的差分值位于置信区间内。结论通过构建一致性评估体系,认为考核试剂与对照试剂在检测效能上相仿,适用于血液HBV DNA的常规筛查工作,能够有效保障血源筛查的安全性及有效性。

ELISA与NAT检测在血液HBV筛查中的关系研究

目的分析ELISA检测与病毒核酸扩增(NAT)检测血液HBV的符合率,探讨这2种方法在血液HBV筛查中的关系。方法选取59 483份献血者血液标本,先用国产和进口2种不同的ELISA试剂检测HBs Ag,将ELISA检测双试剂阳性、单试剂阳性、阴性的标本进行NAT检测HBVDNA,检测模式为6人份混样检测,混样NAT检测结果阳性的标本再进行单人份拆分NAT检测。观察ELISA与NAT检测血液HBV结果的符合率。结果59 483例血液标本中ELISA检测双试剂阳性NAT检测阳性的标本25例,ELISA检测单试剂阳性NAT检测阳性的标本30例,ELISA检测阴性NAT检测阳性120例,ELISA检测双试剂阳性NAT检测阴性的标本6例,ELISA检测单试剂阳性NAT检测阴性的标本38例,ELISA检测阴性NAT检测阴性的标本59 264例。ELISA检测双试剂阳性、单试剂阳性与NAT阳性的符合率分别是80.6%和44.1%,总符合率为55.5%。结论在献血者血液HBV筛查中,ELISA检测与NAT检测技术各具优势,互为补充,两者联检对降低HBV输血传播的发生,保障血液安全具有重要作用。

无偿献血者戊型肝炎病毒核酸筛查的研究

目的了解无偿献血者中戊型肝炎病毒(HEV)的实际感染状况及核酸筛查的可行性与实用性。方法选取2021年4月~2021年5月金华市中心血站1 017名无偿献血者的血液标本,采用核酸检测方法(NAT)ChiTaS BSS1200血液核酸检测系统检测其HEV RNA,对其中阳性的标本再采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其IgM抗-HEV和IgG抗-HEV,并采用基因测序法做HEV基因分型。结果本组无偿献血者HEV RNA阳性检出率0.98‰(1/1 017),该个体IgM和IgG抗-HEV均为阴性,其HEV基因4型。结论无偿献血人群中确实存在HEV RNA阳性感染者;NAT筛查献血者HEV RNA是可性和有效的。

HBsAg阴性HBV DNA阳性样本300例补充试验结果分析

目的分析乙肝表面抗原(HBsAg)阴性乙肝病毒DNA(HBV DNA)阳性标本的补充试验结果。方法选择2013年至2021年间的献血者样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛查,无反应性标本用核酸检测技术(NAT)方法检测,对HBV DNA检测呈反应性的部分样本再进行乙肝五项进行补充试验。结果对498279份ELISA阴性的样本进行NAT检测,共检出HBV DNA阳性886例,隐匿性乙肝(OBI)检出率为1.78‰,对其中300份样本进行乙肝五项补充试验,发现抗-HBc阳性27例,抗-HBe、抗-HBc两项阳性62例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性11例,抗-HBs、抗-HBc阳性163例,抗-HBs阳性10例,五项全阴共有27例。结论献血者中存在血清学阳性OBI和血清学阴性OBI,补充试验对指导献血者就医,提升血站服务具有重要意义。

乳糜血浆对酶联免疫吸附试验的影响分析

目的:分析乳糜血浆对ElISA检测的影响。方法:使用不同程度的乳糜血浆组与澄清血浆对照组分别稀释经确认阳性的高浓度HBsAg、anti-HCV、anti-TP血液至临界值附近,分别于立刻、4℃下静置1 d、3 d与7 d后(HBsAg为5 d)进行监测并与对照组分别使用t检验进行比较。结果:HBsAg和anti-TP检测检测各个时段中度乳糜血浆与对照组结果无显著差异,重度乳糜血浆结果高于对照组;anti-HCV检测中度、重度乳糜血浆各个时段结果与对照组均无显著差异。结论:中度乳糜以下标本可直接进行ELISA实验;重度乳糜标本阴性结果可直接报告,阳性结果需去除乳糜层或吸取下层无乳糜微粒血浆经双孔复试后再报告结果。