乳鼠成骨细胞的培养及鉴定

无菌采取5日龄SD大鼠的颅盖骨,用胰蛋白酶预消化后,漂洗,剪碎,再用Ⅱ型胶原酶消化获得成骨细胞。通过倒置相差显微镜观察,并用碱性磷酸酶和矿化结节染色鉴定,利用微量滴定（MTT）法测定一个培养周期的成骨细胞活性分布,探讨一种经济、高效的原代成骨细胞培养方法。倒置相差显微镜形态观察结果显示,未贴壁的细胞呈圆形,贴壁生长的细胞呈不规则梭形、三角形或多角形,单核,有1-3个核仁;碱性磷酸酶和钙化结节染色均呈阳性（阳性率≥98.06%）;MTT法结合形态学观察结果显示,成骨细胞培养至第10 d时活性最强。证实用改良的二次酶消化法能够在短时间内获得大量成骨细胞,且所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。

镉胁迫下钙对鲫鱼镉吸收和抗氧化酶活性的影响

为探讨钙对镉致鲫鱼毒性效应的影响,以鲫鱼为材料,试验分5组,分别为空白对照Ⅰ组,单独染镉Ⅱ组(镉0.05mg·L^(-1)),镉钙联合组(Ⅲ组:镉0.05 mg·L^(-1)+钙40 mg·L^(-1);Ⅳ组:镉0.05 mg·L^(-1)+钙80 mg·L^(-1);Ⅴ组:镉0.05 mg·L^(-1)+钙120mg·L^(-1)),水体染毒处理35 d后,检测鲫鱼肌肉、鳃中镉质量分数,肝胰脏中T-AOC、CAT、T-SOD活性及MDA质量摩尔浓度。结果表明,染镉组和镉-钙联合组鲫鱼肉、鳃Cd^(2+)的质量分数均显著(P<0.05)高于对照组,而镉-钙联合组鲫鱼肉、鳃中Cd^(2+)的质量分数均低于单独染镉组,且鱼鳃中Ⅳ和Ⅴ组差异显著(P<0.05)。鲫鱼肝胰脏T-AOC、T-SOD和CAT活性表现为单独染镉组均显著低于(P<0.05)对照组;而镉-钙联合组其活性均高于单独染镉组,其中T-AOC、CAT活性在两个处理间的差异均达显著水平(P<0.05),T-SOD活性仅在Ⅳ和Ⅴ组间差异显著(P<0.05)。肝胰脏中MDA质量摩尔浓度表现为染镉组和镉-钙联合组均显著高于(P<0.05)对照组,而镉-钙联合组又显著低于(P<0.05)单独染镉组。由此可见,在水体中补充适量的钙剂可降低镉在鲫鱼体内的蓄积,并且对镉致鲫鱼肝胰脏抗氧化系统损伤有修复作用。

磷对体外大鼠成骨细胞增殖分化及钙化功能的影响

在体外培养大鼠成骨细胞的过程中添加磷(0、1、2、4 mmol/L),检测不同时间内的细胞增殖能力、碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白表达及钙化功能,探讨了磷对成骨细胞增殖分化及钙化的影响。结果表明,磷能促进成骨细胞增殖,随着磷浓度的增加,增殖作用减弱,只在添加磷后第6、7 d极显著高于对照组;磷能显著或极显著地抑制碱性磷酸酶活性,即作用第5 d时,4 mmol/L磷组显著低于1 mmol/L磷组;作用第8 d时,4 mmol/L磷组显著低于1 mmol/L磷组,2 mmol/L磷组极显著低于4 mmol/L磷组;磷能诱导骨桥蛋白的表达(P<0.01),12、mmol/L高于4 mmol/L磷组;磷能诱导钙化,钙化结节个数极显著高于对照组,钙化结节平均面积只有1 mmol/L磷组显著高于对照组,随着磷浓度的变大,钙化结节平均面积逐渐减小而钙化结节个数则逐渐增多。表明添加不同浓度的磷均能抑制成骨细胞的早期分化,促进其增殖,诱导细胞基质成熟及钙化,利于新骨的形成,但4 mmol/L磷组效果较差。

沂河表层底泥重金属污染及其风险性评价

为了解临沂沂河干流小埠东橡胶坝至汤头段滨河大道开发造成的重金属污染状况,用火焰法原子吸收分光光度法对河道内表层底泥的重金属含量进行了研究,并采用地积累指数（Igeo）和潜在风险指数（RI）两种指标相结合的方法对其进行安全风险评价.结果表明,汤头至小埠东段河道内重金属污染以Cd为主,阳光沙滩呈极强污染,北外环桥和汤头呈强度污染,解放路桥、鸿福寺和新河村呈中～强度污染;单一元素潜在生态风险因子（Eir）评价阳光沙滩为极强生态污染,其他各点为很强生态污染;其次是Pb,在阳光沙滩呈极强污染,解放路桥、北外环桥、新河村和汤头为中度污染,鸿福寺为轻～中度污染.Eir评价在阳光沙滩处为强生态污染,其余各点轻微生态污染.依据潜在生态风险指数RI将河道分成三个风险功能区：解放路桥、鸿福寺、新河村为中等污染区,北外环桥、汤头为重污染区,阳光沙滩为极重污染区.

磷对成骨细胞活性[Ca^(2+)]_i及细胞周期的影响

在体外培养4 d SD大鼠成骨细胞(OB)的基础上,添加不同浓度磷(0、1、2、4 mmol/L)作用48 h后,观察细胞超微结构,测定钙离子浓度([Ca2+]i);作用36 h后,检测OB细胞周期。磷作用48 h后,4 mmol/L磷组OB内线粒体减少,总蛋白含量随磷浓度的增加而减少,4 mmol/L磷组显著低于对照组、1 mmol/L磷组和2 mmol/L磷组(P<0.05);OB内[Ca2+]i浓度在磷各组均增加(P<0.01),2 mmol/L磷高于1 mmol/L磷(P<0.05),4 mmol/L磷高于1 mmol/L磷(P<0.01);磷对细胞周期变化不明显,仅1 mmol/L磷抑制细胞滞留在S期(P<0.05)。表明,添加磷作用48 h后,均促进OB内[Ca2+]i沉积,促进OB的体外矿化,4 mmol/L磷抑制OB的代谢活性,促进OB提前成熟,利于新骨的形成。

母鼠妊娠期铅镉联合暴露对仔鼠脑组织的氧化损伤及乙酰半胱氨酸的保护效应

45只怀孕SD母鼠被随机分为9组,即A组(对照组,饮用蒸馏水)、B组(铅组,300 mg/L)、C组[铅+N-乙酰半胱氨酸(N-NAC)组,300 mg/L+20 mmol/L]、D组(镉组,10 mg/L)、E组(镉+NAC组,10mg/L+20 mmol/L)、F组(低剂量铅镉联合组,150 mg/L+5 mg/L)、G组(低剂量铅镉联合+NAC组,150mg/L+5 mg/L+20 mmol/L)、H组(高剂量铅镉联合组,300 mg/L+10 mg/L)、I组(高剂量铅镉联合+NAC组,300 mg/L+10 mg/L+20 mmol/L)。采用饮水染毒,染毒时间为21 d,分娩后每窝随机选取6只乳鼠测定脑匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乙酰胆碱酯酶(TChE)活性和丙二醛(MDA)的含量。结果表明,低剂量铅镉联合作用具有中间效应(介于铅、镉单独毒性作用之间),而高剂量铅镉联合作用表现协同或叠加效应。NAC拮抗组与染毒组比较,MDA含量显著降低,SOD、GSH-Px、TChE、CAT活性有升高趋势,说明NAC可以提高大鼠的抗氧化能力,对母鼠铅镉暴露所致新生鼠脑脂质过氧化损伤有一定的保护作用。

中药制剂防治肉鸡肾性传染性支气管炎的实验研究

将某养殖场已确诊为肾性传染性支气管炎的 2 5日龄肉鸡 30 0只 ,随机分为 6组 ,应用研制的复方中药制剂——禽速康口服液按不同剂量组合进行治疗试验。结果表明 ,禽速康 (3m L/ kg)与肾舒宝 (40 m g/ kg)联合疗法 ,对肉鸡肾性传染性支气管炎有较好的疗效 ,用药 3d可控制发病鸡死亡 ,治愈率达 82 %。经大群推广试验表明 ,禽速康与肾舒宝联合防治肉鸡肾性传染性支气管炎 ,效果确实 ,防治有效率达 93.75 %。

SD大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

采用机械研磨、筛网过滤和酶消化相结合的方法获取肾小管节段进行原代培养，以免疫组织化学法和细胞化学染色法鉴定培养细胞。结果表明，肾小管上皮细胞围绕肾小管节段呈岛屿状向四周逐渐生长并于第4～7天处于对数生长期，培养细胞角蛋白ck18表达阳性，碱性磷酸酶染色阳性，证实培养细胞为近端肾小管上皮细胞，且纯度较高。

山楂黄酮对BRL-3A肝细胞DNA损伤的修复作用及其机制

目的:探讨山楂黄酮对BRL-3A肝细胞DNA损伤的影响及其机制。方法:MTT法检测不同浓度的山楂黄酮对乙醇损伤肝细胞的影响;单细胞凝胶电泳分析细胞DNA的损伤程度并计算Olive尾距;试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等生理生化指标;实时定量PCR检测基因SOD的表达变化。结果:0.2,0.4和0.8 mg/mL的山楂黄酮能够显著修复乙醇诱导BRL-3A肝细胞的DNA损伤,这种修复作用与细胞抗氧化指标SOD、MDA和GSH-Px的改善密切相关。结论:山楂黄酮能够通过抗氧化修复肝细胞的DNA损伤,山楂黄酮具备潜在的肝损伤治疗价值。

奶牛硒和维生素E营养状况与围产期健康的关系

围产期是奶牛生产疾病的高发期,分娩与开始泌乳对奶牛造成巨大的代谢应激,导致用于维持免疫系统功能的营养物质缺乏,使动物处于氧化应激状态,机体表现免疫抑制。硒和维生素E均参与机体的抗氧化防御系统,它们之间具有协同作用,在抗氧化,提高机体的免疫反应,降低围产期乳房炎、胎衣不下等疾病的发生方面发挥重要作用。本文对奶牛硒和维生素E营养状况与围产期健康的关系进行了综述。

钙磷对RANKL诱导番鸭破骨细胞生成及活性的影响

分离了1~7日龄番鸭长骨骨髓细胞,与不同因子（Ⅰ组,对照;Ⅱ组,30 ng/ml sRANKL;Ⅲ组,30ng/ml sRANKL＋6 mmol/L Ca＋3 mmol/L P）共培养。倒置显微镜观察细胞形态,抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）试剂盒进行组织化学染色,培养7 d后取象牙片用1%甲苯胺蓝染色,光镜及扫描电镜观察吸收陷窝,形态分析系统计算吸收陷窝面积。结果表明,第一次更换培养液后7 d,Ⅱ组多核OC数极显著低于对照组（P〈0.01）,Ⅲ组多核OC数极显著低于对照组和Ⅱ组（P〈0.01）。Ⅱ组和Ⅲ组吸收陷窝数量明显多于对照组,陷窝深度明显深于对照组,陷窝面积极显著大于对照组（P〈0.01）,但Ⅱ、Ⅲ组陷窝面积大小差异不显著。故认为,钙磷（6 mmol/LCa＋3 mmol/L P）对sRANKL诱导番鸭OC骨吸收活性无显著抑制效应,但能极显著抑制番鸭OC的生成,减少多核OC数量。

1α,25-二羟维生素D_3对大鼠成骨细胞超微形态结构的影响

研究了不同浓度1α,25-二羟维生素D3(0,10-9,10-8,10-7mol/L)对体外培养SD大鼠成骨细胞(Osteoblast,OB)超微形态结构的影响。结果表明:与对照组比较,10-9mol/L组细胞铺展较好,表面突起、线粒体数量增多;10-8mol/L组细胞趋于扁平,表面突起减少且呈现细长状,内质网数量增多,线粒体减少;10-7mol/L组细胞外基质中大量丝状纤维连接成网状,胞内细胞器较少,出现大量分泌小泡,胞浆内含有大量钙颗粒沉积。说明,高浓度1α,25-二羟维生素D3能够抑制OB增殖,促进细胞的分化及功能表达。

昆嵛山不同植被带线蚓群落结构特征

为明确昆嵛山不同植被带线蚓分布特征及影响因子,于2011年9月对山东省昆嵛山不同植被带线蚓群落结构进行调查。共采集线蚓科环带动物351条,隶属4属10种,其中白线蚓属5种,半线蚓属2种,线蚓属2种,玛利安蚓属1种。叉肾半线蚓(Hemienchytraeus bifurcatus)、白线蚓属种5(Fridericia sp5)和滇池白线蚓(Fridericia dianchiensis)为优势种,平均密度分别为2 458、2 125和1 333条·m-2,相对丰度分别为16.5%、14.2%和8.9%。不同植被带线蚓密度和生物多样性整体表现为针阔叶混交林区最大,阔叶林区次之,针叶林区和农田区较小;其中线蚓密度均值为14 917条·m-2,Shannon-Wiener多样性指数均值为0.92,Margalef多样性指数均值为0.22,物种丰富度指数均值为4,Simpson优势度指数均值为0.52;应用非度量多维标度排序法研究群落结构相似性,发现S1和S2站位相似性较高,S5和S6站位相似性较高,S3、S4站位分别与其他站位群落结构存在较大差异。典范对应分析表明土壤水分、总氮和硝态氮含量为影响区域线蚓群落结构的主要因子。

枣庄市中区鲫鱼重金属含量及其安全评价

本研究分别取枣庄市中区不同市场上20个鲫鱼的肌肉样品,测定其重金属含量,并根据GB18406.4-2001《无公害水产品安全要求》对鱼肌肉进行了评价。结果表明:各市场鲫鱼体内重金属含量均在无公害水产品安全范围之内,符合人体消费卫生标准。各市场鲫鱼肉综合污染指数Cu均呈清洁级,Cr在新华、龙头和齐村农贸市场呈微污染,在朝阳市场呈轻污染;Cd在新华和齐村农贸市场为清洁级,在龙头和朝阳市场是微污染;Pb未检出。各市场均值污染指数均呈清洁级。

新薛河典型生境底栖动物功能性状及其多样性

功能性状对环境变化敏感,在生物多样性与生态系统功能关系的研究中扮演关键角色;基于生物性状的功能多样性与生态系统过程密切相关,是了解生态系统和群落功能的关键所在。基于新薛河底栖动物3个季度的调查数据,对功能性状和功能多样性时空动态及其对环境梯度的响应进行了研究。研究结果表明10个功能性状的等级性状间均存在显著差异。空间格局上,33个等级性状中有21个在河段间差异显著,涉及10个功能性状中的9个;而在时间序列上,仅有12个等级性状于各季节间差异显著,涉及10个功能性状中的6个。功能多样性于各河段间差异显著,表现为D≥E、A≥C>B;而于各季节间整体表现为差异不显著;底栖动物各功能性状之间存在一定的权衡关系;水文条件是影响研究区域底栖动物功能多样性的主要因素;功能性状及功能多样性对河流生境质量具有较好的响应性。

新薛河底栖动物物种多样性与功能多样性研究

研究功能多样性与物种多样性关系及其随环境梯度的变化规律,有助于理解生物在群落中的共存机制;然而,二者间关系的研究在淡水生态学中尚鲜见报道。通过对新薛河典型河段(A缓流河段、B断流河段、C有机污染河段、D对照河段、E人为干扰河段)底栖动物季节性调查,就物种多样性和功能多样性时空动态及关系进行了研究。结果表明:在空间序列上,物种多样性指数在B河段均最低,表明间歇性断流对物种多样性影响重大。功能丰富度在D河段最高,A河段最低;功能均匀度在A河段高于其他河段;功能分离度在A、B河段最高,D河段最低。在时间序列上,物种丰富度和Shannon指数均值在10月份最低,4月份最高;均匀度指数在12月份最低,10月份最高。3个功能多样性指数于各季节间差异显著、相互独立,主要受水文条件和底栖动物生活史影响。相关分析表明,功能多样性指数间无显著相关性;功能丰富度同物种丰富度和Shannon指数相关显著,功能均匀度同物种均匀度相关显著。逐步回归分析发现,功能丰富度受物种丰富度和Shannon指数影响显著,功能均匀度受物种均匀度影响显著;功能多样性和物种多样性指数间拟合度总体不高。研究结果进一步表明:相对物种多样性,功能多样性对生境梯度变化响应更加全面。

新薛河上游溪流典型生境底栖动物群落结构比较研究

群落时空格局研究是后续深入开展相关研究的基础。基于2012年山东省新薛河底栖动物调查数据,就新薛河上游典型溪流生境底栖动物群落结构进行了比较研究。结果表明:共采集底栖动物108种,隶属10纲,74属;短脉纹石蛾(Cheumatopsyche sp.)、长钝直突摇蚊(Orthocaldius vaillanti)、拟长跗摇蚊属一种(Paratanytarsus sp.E)、Neozarelia sp.为研究区域优势类群,相对丰度分别为25.1%、9.8%、9.0%、8.6%。各河段优势物种组成、密度、生物量、生物多样性均存在显著差异。非度量多维标度排序和多响应置换过程分析从群落层面验证了不同河段群落结构的差异;且发现,流量越小,群落分化越明显。通过指示物种和双向聚类分析,进一步明确了物种组成对群落结构的影响。总之,不同生境底栖动物物种组成和群落结构存在较大差异,栖境多样性对生物多样性的维持和保护具有重要意义。

钙磷对体外培养成骨细胞增殖、分化和矿化影响的研究

目的研究钙、磷对体外培养成骨细胞(OB)增殖、分化及矿化的作用,探讨钙、磷对骨代谢的影响。方法在体外培养OB的基础上,分别添加1、2、4mmol/L钙、1、2、4mmol/L磷及2mmol/L钙+1mmol/L磷(钙磷比2∶1)、1mmol/L钙+2mmol/L磷(钙磷比1∶2)。检测细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)含量及其mRNA表达情况。结果与对照组比,饲料中添加4mmol/L钙从D2开始促进OB增殖,差异显著(P<0.05),添加1、2mmol/L钙从D5开始差异显著(P<0.05),而钙磷比2:1与1:2到D8差异才显著(P<0.05)。除1mmol/L钙组外,各试验组从D2起均抑制细胞内ALP活性(P<0.05),在D5抑制其mRNA表达(P<0.01),在D2、D8促进其mRNA表达(P<0.05)。除1mmol/L钙组外,各试验组在D2均促进Col-Ⅰ分泌(P<0.01),但钙各组和1mmol/L磷组在D5、D8及2mmol/L磷组和钙磷比(1:2)组在D8均抑制其分泌(P<0.05)。各试验组,在D2、D8均促进Col-ⅠmRNA表达(P<0.01),在D5除钙磷比(1:2)组外均抑制其mRNA表达(P<0.01)。各试验组促进OPNmRNA表达(P<0.01),除1、2mmol/L钙组外,各实验组从D2起均促进其分泌(P<0.0)。结论添加钙及2种钙磷比(2:1,1:2)均能抑制成骨细胞早期分化,诱导其增殖及重叠生长,促进其基质成熟及矿化,而磷对其增殖作用不明显。