邪毒壅盛证H_(22)荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究

目的揭示H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证肿瘤组织基因表达的特征。方法采用GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray等技术及芯片分析方法,观察H22荷瘤小鼠邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果筛选到邪毒壅盛证独特性高表达的基因32个,其中包括Tcte3、Phf7、Ldhc等参与睾丸发育、精子或卵子发生的基因22个,Adipoq、Nrcam、Tnfaip6等与肿瘤有关的基因4个,以及Atp8b3、Pnpla3、Retn等其他功能的基因6个。筛选到邪毒壅盛证独特性低表达的基因2个,有Cort和LOC668417。结论邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。

人Cdc25C基因克隆及其原核表达载体的构建与表达

目的:构建人Cdc25C基因的克隆载体和原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达.方法:从人肝癌细胞株Bel-7404中提取总R N A,经RT-P C R法扩增人C d c25C c D N A后,将其正确插入克隆载体pMD18-T和表达载体pET-32a(+),并转化至BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Transetta(DE3)三种感受态大肠杆菌中,分别采用0.25 mmol/L IPTG和ArtMediaTM Protein Expression自动诱导表达培养基诱导表达,并对纯化的融合蛋白进行考马斯亮蓝染色和质谱分析鉴定.结果:成功扩增了Cdc25C基因,并获得p M D18-T-C d c25C克隆载体和p E T-32a(+)Cdc25C表达载体;重组质粒在BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Transetta(DE3)三种感受态大肠杆菌中均诱导表达出TRx-His-Cdc25C融合蛋白;考马斯亮蓝染色和蛋白质谱分析结果显示基因重组蛋白与目的蛋白相符.结论:获得肿瘤相关抗原Cdc25C重组蛋白,为后续研究奠定基础.

活血化瘀法调节DEN肝癌大鼠相关基因的生物信息学分析

目的:研究活血化瘀法对DEN大鼠肝癌基因表达谱的影响,初步探讨活血化瘀治疗肝癌的分子机制。方法:利用DAVID、PATHWAY MINER、STRING和pSTIING等在线分析工具,对前期检测的活血化瘀法干预前后DEN大鼠肝癌基因表达谱变化进行生物信息学分析。结果:活血化瘀法调节的差异基因454个,包括上调表达274个和下调表达180个。这些差异基因表达产物主要位于细胞的胞外区域,及细胞突起和突触,主要涉及神经元分化、细胞组分形态、细胞黏附、钙离子结合等生物过程或分子功能;参与多条信号通路,但主要与单核细胞的增殖和分化,及肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)相关。这些差异蛋白的相互作用主要集中在16个蛋白,其中被活血化瘀法下调的Vim和Mtr在更为复杂的转录因子网络图谱中仍处于中心节点位置,结合文献挖掘发现它们在肝癌细胞中发挥了非常重要的作用。结论:活血化瘀法对DEN肝癌大鼠的治疗是多方位的,目前对活血化瘀药抗肿瘤的争议可能与具有很强的活跃基因表达的能力,引起一些基因或信号通路在肿瘤细胞中过度激活或抑制所致;Vim和Mtr基因可能是活血化瘀治疗肝癌的重要靶点,但针对Mtr的干预要防止引起促癌/抑癌基因表达失衡。

乳酸脱氢酶C_4在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)在邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织的表达水平及其意义。方法采用Affy-metrix Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array及其方法检测乳酸转运和氧化相关基因在H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异,芯片重复两次;并采用实时荧光定量PCR对两种高乳酸亲和力的脱氢酶基因Ldhb和Ldhc在各种证候中的表达量进行检测。结果乳酸转运相关基因的表达要高于氧化相关基因,尤其以H22接种后早期最明显;Ldhb基因的表达在H22接种后早期、中期和晚期变化不明显,而Ldhc基因在H22接种后早期气虚、中期和晚期的表达也不明显,且与Ldhb表达量相近,但它在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中表达量显著升高。结论在荷瘤小鼠肿瘤组织中,尤其是H22接种后早期,肿瘤细胞产生的乳酸作用不仅在于氧化产能;LDH-C4可能代替LDH-B4参与了早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织缺氧肿瘤细胞的代谢拯救途径。

中晚期气阴阳虚证H_(22)荷瘤小鼠肿瘤组织差异表达基因的分析

目的:揭示H22荷瘤小鼠中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的特征。方法:采用GeneChipMouse Exon 1.0 ST Array等技术及芯片分析方法,观察H22荷瘤小鼠中晚期气阴阳虚证与其他3个典型证候早期邪毒壅盛和单纯气虚证,及中期阳气虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果:①筛选到中晚期阴虚证独特性高表达的基因12个,包括与蛋白酶或其抑制因子有关的基因Mmp10、Slpi等4个,与B淋巴细胞有关的基因Cxcl13、Pou2af1等3个,及其他相关的基因Igl-V1、Abpg等5个;②筛选到中晚期阴虚证独特性低表达的基因12个,包括与小鼠生殖、发育有关的基因Ldhc、Fabp9、Mael等9个,及其他功能类基因Cxcl9、Atp8b3等3个。结论:中晚期阴虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。

不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤ABC转运蛋白家族基因转录特征

目的:观察不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤组织ABC转运蛋白家族基因表达的特征。方法:对来源于早期邪毒壅盛和单纯气虚、中期阳气虚和中晚期气阴阳虚四种证候小鼠H22肿瘤组织4张Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray数据标准化处理后,筛选其中的ABC转运蛋白基因进行差异分析。结果:从芯片中共筛选出与ABC转运蛋白有关的基因47个,以邪毒壅盛小鼠肿瘤基因转录最活跃,气虚次之,阳气虚最低;四种常见证候间共有25个基因转录具有明显差异;Abce1和Abcf1等7个基因中在四种常见证候肿瘤中转录水平最高。结论:Tap1(Abcb2)和Abcd2等6个高表达基因可能是邪毒壅盛型小鼠肿瘤增长快的重要因素;不同证候荷瘤小鼠肿瘤组织中的ABC转运蛋白基因转录既存在一定共性又存在很大差异,进一步证明了H22荷瘤小鼠证候客观存在的物质基础,为中医辨证论治提供分子依据。

“对分课堂”模式在医学生物化学本科教学中的尝试与思考

随着社会信息化和知识经济的迅猛发展,目前中国高等教育正经历着一场悄无声息的变革,树立"以学生为中心"的教育理念已成为大学教育势不可挡的新思潮[1-2]。课堂教学作为大学本科人才培养的关键渠道,不仅是培育"金课"的主阵地,也是落实这一理念的最后一公里。因此,将先进的教育理念和教学方法融入课堂,实现从“教中心”到“学中心”的转变,对推动课堂教学改革、促进以学生为本、提高创新人才的培养至关重要。

早期气虚证H_(22)荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征

目的:揭示H22荷瘤小鼠早期气虚证肿瘤组织基因表达的特征。方法:利用实验中获得的外显子芯片数据分析H22荷瘤小鼠早期气虚证与邪毒壅盛、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证等3个证候肿瘤组织基因表达的差异。结果:与其它三种证候相比,在早期气虚证小鼠肿瘤组织中,1上调表达的基因有8个,其中包括H2-Eb2和Sla等4个TCR或BCR有关的基因,和P2ry1、Cobra1等4个其他功能类的基因。2下调表达的基因有18个,包括MMP8/9/10等3个MMPs家族基因,S100a8、S100a9等2个S100家族基因,Lcn2、Clec4d等5个细胞因子和粘附分子类基因,以及Slc6a9、Ddit4等其他功能类的基因8个。结论:早期气虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量差异性表达的基因,上调表达的数量少,下调表达的数量多,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。

黑老虎果毒理实验及其对血脂的调节作用

研究成熟黑老虎果的毒性及其对血脂的调节作用。对实验小鼠进行急性毒理实验,同时进行30d喂养实验,并观察小鼠血脂的变化。结果表明:雌雄小鼠经口最大耐受剂量(MTD)>20mL/kg(以体质量计),属无毒级;30d喂养实验各项观察指标正常,黑老虎果对小鼠的体质量、血液、脏器等均无显著影响;该果能明显降低小鼠血液中胆固醇水平。可以认为,成熟黑老虎果是值得开发的无毒且可调节血脂的珍稀野生水果。

TCTE3 mRNA在人肝癌细胞株中的表达特征

探讨TCTE3 mRNA在人肝癌细胞株中的表达水平及意义。采用实时荧光定量PCR技术分别检测TCTE3基因在常规培养或缺氧诱导(CoCl2为诱导剂)的人肝癌细胞株中的表达情况。TCTE3 mRNA在常规培养的人正常肝细胞株L02,肝癌细胞株Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和QGY-7701中不表达或极低表达;但经缺氧诱导后,SMMC-7721细胞中的TCTE3mRNA表达量逐渐升高,4h达到最大,随后逐渐降低,与HIF1a mRNA表达的曲线变化有一定相似之处,只是这种变化的时间要早于HIF1a基因。在缺氧状态下肝癌细胞TCTE3 mRNA表达增加,且这种上调表达可能对HIF1a mRNA的表达有一定的促进作用。

黑老虎果皮体外抑菌活性的初步研究

目的研究黑老虎果皮及其提取物的体外抑菌效果,确定黑老虎果皮对伤寒沙门氏菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度和有效部位。方法采用滤纸扩散法观察黑老虎果皮及其乙醇提取液和各相萃取液的抑菌作用;用二倍稀释法测定最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果黑老虎果皮及其乙醇提取物对伤寒沙门氏菌有抑制作用,最小抑菌浓度为31.25mg/ml,最小杀菌浓度为125 mg/ml,抑菌物质主要存在于乙醚萃取相中。结论黑老虎果皮对伤寒沙门氏菌有显著地抑制作用。

基于PI3K/Akt通路探讨健脾清热活血方含药血清对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、周期及P-β-catenin表达的影响

目的:观察健脾清热活血方对人结肠癌SW480细胞凋亡、增殖、周期及P-β-catenin蛋白的影响,探讨该方防治结肠癌可能机制。方法:培养人结肠癌SW480细胞,分别予空白胎牛血清、不同浓度健脾清热活血方含药血清及PI3K阻断剂LY294002干预24 h,MTT法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及细胞周期,免疫荧光染色法检测P-β-catenin核内转位。结果:健脾清热活血方含药血清组细胞增殖抑制率及凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05);同时S期细胞比例显著升高、G1期细胞比例显著降低(P<0.05)。健脾清热活血方含药血清组及LY294002组细胞P-β-catenin以膜表达为主,而空白对照组P-β-catenin以膜表达缺失及核内表达增加为主。结论:健脾清热活血方可能通过调控P-β-catenin核内转录,阻滞SW480细胞周期于G1期,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,从而发挥防治结肠癌的效用。

肝癌小鼠不同阶段有关证候肾上腺差异表达的基因分析

目的:揭示肝癌小鼠不同阶段常见证候肾上腺基因表达的特征。方法:采用实验小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22肝癌小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因。结果:筛选到不同阶段一致上调的基因73个,一致下调的基因26个。其中一致上调的基因包括Hp、C3、Anxa1、Procr、C2、Il4ra、Cd14、Ptprc、Cd52、C4b以及Eno3、Xdh、Gpx3等。一致下调的基因涉及到神经系统相关基因如Plp1、Mbp、Aldh1a1、Cck和Atn1,与水电解质代谢有关的基因如Aldh1a1和Slc22a17等,与信号转导有关的基因如Cxcr4、Spag5和Stmn3等,以及参与转录调控和蛋白质生物合成的基因,如Hspa1a、Dnajb1、Thra和Hhex等。结论:H22肝癌小鼠在疾病发生发展过程中,存在证候的演变及肾上腺组织基因表达的差异,不同阶段一致上调或下调的差异表达基因可能是肝癌小鼠及其证候区别于正常小鼠的特征之一。

健脾清热活血方干预PI3K-Akt/mTOR信号通路调控CDK1表达防治溃疡性结肠炎相关癌变

目的:观察健脾清热活血方对溃疡性结肠炎相关癌变小鼠组织形态、超微结构、PI3K-Akt/mTOR信号通路中相关指标及CDK1的表达变化,探讨其防治溃结相关癌变的可能机制。方法:140只SPF级Balb/c小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阻断剂组、治疗组及对照组,每组20只;除外正常组,其余各组采用DMH/DSS复合法制备溃结癌变模型,模型组予等剂量生理盐水,阻断剂组予PI3K阻断剂LY294002干预,治疗组予不同剂量健脾清热活血方药,对照组予美沙拉嗪,连续干预16周。应用光镜及电镜观察溃结癌变小鼠结肠组织形态学及超微结构变化;Western-blot及Real-time PCR检测结肠黏膜P110、P85、P-AKT、mTOR、CDK1蛋白及其mRNA表达变化。结果:模型组见黏膜上皮脱落,溃疡形成,腺体萎缩,部分有浸润癌表现,治疗组所见黏膜损伤程度较模型组有不同程度改善,其中以中、高剂量组结肠黏膜损伤改善情况显著,部分可见黏膜充血并肿胀,不典型增生及淋巴滤泡出现(P<0.05)。与正常组比较,模型组P110、P85、CDK1蛋白表达量上升(P<0.05);与模型组比较,治疗组P85、CDK1蛋白表达下降(P<0.05)。与模型组比较,治疗组P85、P-Akt基因表达下调(P<0.05)。各组间P110、mTOR基因表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾清热活血方可能通过下调P85、P-Akt,介导CDK1表达,诱导炎症缓解,修复肠道黏膜,发挥防治UCAC的效用。

阳气虚和气阴阳虚证荷瘤小鼠肾上腺基因表达的差异性

目的:揭示H22荷瘤小鼠阳气虚证和气阴阳虚证肾上腺基因表达的特征。方法:采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠中期阳气虚证及中晚期气阴阳虚证肾上腺基因表达的差异。结果:①筛选阳气虚证独特上调基因52条、独特下调基因11条;气阴阳虚证独特上调和下调基因分别为23条和4条。②阳气虚证肾上腺独特上调的基因涉及到蛋白水解类,如Klk1家族、Ctrc、Ctrb1、Ren1、Ela3、Cpa1、Prss2、Cpb1;脂类代谢基因,如Clps、Pnlip、Pnliprp1、Cel;精子发生类基因,如Tnp2、Tnp1、Crisp1、Prm1、Prm2、Smcp等;激素相关蛋白,如Pip、Abpg等。阳气虚证独特下调的基因涉及脂代谢类,如Scd1、Fasn、Acaca、Acss2、Pnpla3。③气阴阳虚证独特上调基因,包括参与炎症应答类基因,如S100a8、S100a9、Alox5ap、Orm1、Kng1、Mpo;参与血凝聚与正调控细胞增殖基因,如Fga、Fgb、Fgg、Prtn3、Fgl1等;参与离子运输,如Lcn2、Hpxn、Ltf等。气阴阳虚证独特下调基因仅4条。结论:H22荷瘤小鼠阳气虚证和气阴阳虚证肾上腺存在大量的基因表达改变,构成了这两个证候内在的特征。

不同证候H22荷瘤小鼠垂体一致上调或下调的基因

目的:观察常见不同证候荷瘤小鼠垂体基因表达的特征。方法:采用H22荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证等4个证候及正常小鼠垂体基因的表达,筛选出不同证候一致上调或下调的基因。结果:荷瘤小鼠一致上调的基因有Alas2、Ube2l6、Sgk、BC055107、Cdh26、Bhlhb2、Nr1d2、Slc39a14、Serpina3n、Ms4a6c、Lcp1、Dhx8、Il1r1、S100a8、S100a9、Cxcl1、Hp、Csf1r、RIKEN cDNA2610307008gene、Phactr3、Mknk1、Aloxe3、Aqp11等23个;一致下调的基因有2310047A01Rik、Hoxa10、Cryaa、Hspa1a、Dub2a、Mpz、Klk1、Naaladl1、Prph1等9个;其中部分基因在一些证候中的表达有显著的改变。结论:肿瘤发生后,H22荷瘤小鼠垂体存在大量基因表达的差异,其中部分与证候有关。

常见证候荷瘤小鼠神经内分泌免疫组织基因转录的总体特征

目的揭示常见证候荷瘤小鼠神经-内分泌-免疫组织基因转录的总体特征。方法采用小鼠标准化四诊及辨证方法,及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛(邪毒)和气虚、中期阳气虚、中晚期气阴阳虚等4个常见证候下丘脑、垂体、肾上腺、睾丸、脾脏、胸腺、肿瘤RNA的转录与剪接。结果正常昆明种雄性小鼠下丘脑、垂体、肾上腺RNA电泳的28 s峰低于18 s,而睾丸、脾脏、胸腺、肿瘤相反。肿瘤发生的早期,下丘脑、垂体、肾上腺基因表达模式发生显著改变,邪毒尤甚,出现了失代偿。下丘脑28 s RNA迅速抬升并持续,气虚强于邪毒。垂体RNA总量降低,28 s陡降,邪毒尤甚。肾上腺RNA电泳特征类似垂体,气虚与邪毒相近,中晚期气阴阳虚尤甚。睾丸变化不明显。随着病情发展,脾脏重量持续增加,而胸腺相反,重量持续下降,蛋白合成和糖代谢下降。肿瘤组织蛋白合成与糖代谢,邪毒大于气虚。以上7个组织与正常对照组相比,有9 127个基因表达发生差异、51 126个外显子剪接发生差异。结论神经-内分泌-免疫网络组织基因转录的差异是荷瘤小鼠不同证候内在重要的物质基础。

邪毒壅盛和气虚证H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺基因转录的差异

目的揭示H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证肾上腺基因表达的特征。方法采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注早期2个证候表达量大、差异显著的基因。结果①筛选邪毒壅盛证上调和下调基因20条和7条,气虚证上调和下调基因4条和7条。②邪毒壅盛证上调的基因涉及到信号转导与免疫应答的Pomc1、Tnfaip6、Ccrl2、Rgs1等,调控转录的Bhlhb2、Ell2、Atf3、Hivep2、Klf4等,参与代谢调节的Usp37、Chka、Dusp10等;邪毒壅盛证下调基因有Hbxip、H2-T22、Ndufs6,Tgfb1、Mgat4b、Cdkl3等。③气虚证独特上调基因有Pde10a、Ol-fr1305、Olfr46、Cyp3a13等;气虚证独特下调基因涉及到激素类Gh、Pomc1、Prl、Cga和原癌基因Junb。结论荷瘤小鼠邪毒壅盛证和气虚证肾上腺存在大量基因表达的改变,这可能是证候内在的本质之一。