PCR法快速检测临床标本中结核杆菌DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）快速检测临床标本（脑脊液、胸水、腹水、血、痰液）中的结核杆菌ＤＮＡ，特异性扩增片段１２３ｂｐ，为结核杆菌的特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性达１０ｆｇＤＮＡ。临床标本的ＰＣＲ检测阳性率（２３．３％）明显高于抗酸染色涂片（２．９％）和细菌培养（５．７％）的阳性率（Ｐ＜０．０５）。通过设立对照系统及对扩增产物酶切分析，表明该法无假阴性结果（特异性１００％）。研究表明，ＰＣＲ法适于快速检测不同标本中的结核杆菌ＤＮＡ。

PCR制备地高辛素标记的探针检测轮状病毒核酸

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，制备了轮状病毒第９基因部分片段的地高辛标记的ｃＤＮＡ探针。ＤＮＡ－ＲＮＡ斑点杂交表明该探针具有轮状病毒Ａ组的特异性，可检出１０ｐｇＨＲＶ－ＲＮＡ。实验中选择了粪便标本提取核酸后点膜和粪便上清直接点膜进行斑点杂交，两种方法的结果一致；同时将斑点杂交法与ＰＡＧＥ法的结果进行了比较。实验结果表明用ＰＣＲ技术直接制备地高辛索标记的ｃＤＮＡ探针具有方便、快速、标记率高、特异性强的特点，具有一定的应用前景。

PCR法在疱疹病毒性脑炎诊断及疗效观察中的应用

选择疱疹病毒科病毒ＤＮＡ多聚酶基因高保守区中的一对引物，一次ＰＣＲ可同时扩增疱疹病毒科的４种病毒［单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ１）、单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ２）、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）、及巨细胞病毒（ＣＭＶ）］相应的ＤＮＡ片段。根据扩增产物分子的大小及对扩增产物酶切分析，可将标本中的４种病毒准确分型。用该法检测临床疑为病毒脑炎患者和其他中枢神经系统疾病患者（对照组）的脑脊液（ＣＳＦ），脑炎组ＣＳＦ阳性率３０％（９／３０），对照组ＣＳＦ阳性率６．７％（２／３０）；其中８例为ＨＳＶ１阳性，２例为ＣＭＶ阳性，１例为ＨＳＶ２阳性。２例病毒脑炎患者经用无环鸟苷抗病毒治疗７～１０ｄ后其ＣＳＦ中的ＨＳＶ１ＤＮＡ由阳转阴。由此说明ＰＣＲ法不仅可早期诊断疱疹病毒性脑炎，还可显示抗病毒药物的疗效。

琼脂糖电泳法检测轮状病毒RNA

琼脂糖电泳法检测轮状病毒ＲＮＡ卓礼梅，严泳楷（中山医科大学微生物学教研室，５１００８９）４０～５０％需住院治疗的婴幼儿急性胃肠炎病例与轮状病毒感染有关〔１，２〕，因此轮状病毒感染的诊断极为重要。常用的方法有电镜法、酶联免疫吸附试验和聚而烯酰胺凝胶电泳...

应用聚合酶链式反应和原位杂交方法检测胎儿组织中人微小病毒B19核酸序列

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测了７例胎儿的１２份组织标本，在４份脑组织和１份脾组织中扩增出７００ｂｐ片段，经酶切鉴定证明其为特异性片段。用地高辛标记的人微小病毒Ｂ１９（ＰＶＢ１９）ＤＮＡ探针对ＰＣＲ检测阳性标本进行原位杂交，在２份脑组织和１份脾组织中检出了ＰＶＢ１９ＤＮＡ阳性颗粒，ＰＣＲ和原位杂交方法结合应用可为胎儿ＰＶＢ１９感染的病原学诊断和致病机理的研究提供一套持异、敏感和准确的实验方法。

用聚合酶链反应检测胸液结核杆菌的临床价值

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测５３例结核性胸液，并与涂片镜检及培养方法对比。ＰＣＲ检测胸液结核菌阳性率达６９．８％，明显高于涂片镜检７．５％及培养５．７％，Ｐ＜０．００５。表明ＰＣＲ是快速检测胸液结核菌的好方法。

用聚合酶链反应技术诊断结核病

用聚合酶链反应技术对结核杆菌特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因１２３ｂＰ的片段进行扩增。该法检测人型结核杆菌灵敏度可达到１０ｆｇＤＮＡ，对１４９份结核患者临床标本检测结果显示ＰＣＲ总阳性率（６９．１％）明显高于直接涂片荧光镜检（１５．４％）与细菌培养（１０．１％）的阳性率（Ｐ＜０．０１）。研究表明ＰＣＲ是一种特异、敏感、快速诊断结核病的好方法，值得推广。

PCR检测急性脑炎病人脑脊液疱疹病毒DNA

本研究选用一对通用疱疹病毒属 DNA 多聚酶基因高保守区寡核苷酸引物作脑脊液标本DNA 多聚酶链反应(PCR),扩增产物作 SmaI 酶切分析,区分单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型(HSV_1、HSV_2)、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(MCV)。结果46例成年临床疑诊急性病毒性脑炎病人中的21例(45.7%)脑脊液中检测出疱疹病毒 DNA 而得到确诊,其中 HSV_1 16例、HSV_2 3例、MCV 2例,未发现 EBV 阳性。结果提示,通用引物 PCR 是诊断急性疱疹病毒性脑炎的有效方法。

新生儿轮状病毒无症状感染的聚合酶链反应研究

选用与 A 组人类轮状病毒(Human Romvirus,HRV)编码 VP7蛋白的第9基因(或8)两个保守序列互补的引物,建立检测 A 组 HRV dsRNA 的聚合酶链反应技术,扩增产物片段约342bp。经逆转录—聚合酶链反应(RT—PCT)检测18例无腹泻症状新生儿89份粪便标本,并与聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法进行比较,结果前者检出 HRV 核酸54份(60.7%),而后者则检出35份(39.3%),PCR 结果可能比较接近新生儿排泌轮状病毒的实际情况。

聚合酶链反应快速诊断疱疹病毒性脑炎

选择疱疹病毒科病毒 DNA 多聚酶基因高保守区中的1对引物,1次聚合酶链式反应可同时扩增疱疹病毒科的4种病毒(HSV1,HSV2,EBV,HCMV)相应的 DNA 片段。根据扩增产物的分子量大小及对扩增产物酶切分析,可将标本中的4种病毒准确分型。用该法检测临床疑为病毒性脑炎患者和其他中枢神经系统疾病患者(对照组)的脑脊液(CSF)。脑炎组 CSF 阳性率30%(9/30),对照组 CSF 阳性率6.7%(2/30);其中8例为 HSV1阳性,2例为 HCMV 阳性,1例为 HSV2阳性。本法最早可在发病第3d 的病人 CSF 中检出 HSV1-DNA,检测敏感性达10fg HSV1-DNA。

通用引物检测畸胎标本疱疹病毒及其酶切鉴定

通用引物检测畸胎标本疱疹病毒及其酶切鉴定左丽卓礼梅董熙昌郭辉玉先天性畸形是严重影响儿童健康发育的重要疾患。疱疹病毒是重要的致畸因素，巨细胞病毒（ＣＭＶ）、１，２型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ１，２）和ＥＢＶ（ＥＢ病毒）都有致畸的报道。由于不易获得相应标本和实...

聚合酶链反应诊断新生儿轮状病毒无症状感染的研究

选用与Ａ组人类轮状病毒（ＨｕｍａｎＲｏｔａｖｉｒｕｓ，ＨＲＶ）编码ＶＰ７蛋白的第９（或８）基因片段中保守序列互补的两个引物，建立检测Ａ组ＨＲＶＲＮＡ的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，扩增产物片段约３４２ｂｐ。经检测３５例无腹泻症状新生儿１２９份粪便标本，并与聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）方法进行比较，结果前者检出ＨＲＶ核酸７７份（５９．６９％），而后者则检出４９份（３７．９８％），ＰＣＲ结果可能比较接近新生儿排泌轮状病毒的实际情况。