胰腺癌化疗方案的选择及疗效评价

胰腺癌是一种恶性程度极高的肿瘤,其治疗极具挑战。近年来发现药物治疗不仅在局部进展期胰腺癌术前及术后辅助治疗中起着举足轻重的作用,同时也是晚期胰腺癌的主要治疗手段,可使胰腺癌患者的生存时间及生活质量得到改善。以吉西他滨、氟尿嘧啶类药物为基础的传统化疗在晚期胰腺癌治疗中疗效有限,目前分子靶向治疗研究已取得了一定的进展。基于胰腺癌诊治相关指南或共识并结合现有胰腺癌治疗领域重要的临床试验研究,阐述了胰腺癌的化疗选择方案及疗效评价,相信随着新药的研发及新技术的应用,未来胰腺癌的治疗一定会有新的突破。

胰腺癌微环境治疗策略的进展与思考

胰腺癌恶性程度较高,明显的间质纤维化及肿瘤异质性是胰腺癌的重要特征,也是胰腺癌患者对目前传统化疗应答欠佳、预后极差的重要原因。因此,寻找有效的治疗策略是提高胰腺癌患者生存率的关键问题。鉴于胰腺癌"间质化"及"异质性"的特性,国内外学者致力于阐明肿瘤微环境在胰腺癌发展过程中的作用机制及寻找有效的微环境靶向治疗策略,以提高胰腺癌患者治疗反应率,实现对于胰腺癌患者精准治疗的目的。本文通过对胰腺癌的微环境研究现状及在精准治疗理念下的靶向胰腺癌微环境的最新进展进行概述,为进一步提高胰腺癌患者的生存率提供新思路。

抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达

目的:构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.方法:以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板,扩增TNFα-scFv目的基因,构建穿梭质粒pDONR221-TNFα-scFv,测序证实质粒含有目的基因.与骨架质粒pAd-CMV-V5-DEST腺病毒骨架载体进行同源重组,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv.表达克隆转染293细胞,包装重组腺病毒,并鉴定和病毒滴定.结果:TNFα-scFv基因成功克隆到腺病毒载体中,转染293细胞后成功包装出重组腺病毒,病毒滴度为2.5×1011TCID50/mL,Western blot检测到TNFα-scFv基因在293细胞中高水平表达.结论:成功构建了带有TNFα-scFv基因的重组腺病毒载体,为进一步研究提供实验基础.

特异性蛋白1在胰腺癌中的生物学作用及对细胞因子网络的影响

目的探讨特异性蛋白1(Sp1)在胰腺癌中表达和生物学功能并初步分析Sp1调控的细胞因子网络。方法Western blotting检测不同胰腺癌细胞系(BxPC3、AsPC1、CFPAC1、PANC1、Capan1、HS-766T、SW1990和HPAF-II)的Sp1水平;慢病毒感染构建稳定干扰和过表达Sp1的胰腺癌细胞系,IncuCyte生长曲线和平板克隆形成实验检测增殖活力,划痕实验和Boyden小室实验检测迁移和侵袭能力。悬液芯片进一步研究干扰Sp1前后的细胞因子变化并分析调控的信号通路和生物学功能。结果与正常胰腺上皮细胞HPDE相比,胰腺癌细胞系中Sp1呈不同程度的表达,其中BxPC3细胞的最高,而AsPC1细胞的最低。接下来成功构建稳定干扰和过表达Sp1的胰腺癌细胞系,体外实验证明Sp1促进胰腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力。悬液芯片结果:干扰Sp1后一组炎性因子、趋化因子和基质金属蛋白酶类发生变化,其中51个上调(>2倍)、26个下调(<0.5倍)。GO分析显示,差异表达的因子与细胞生长增殖、炎症反应、免疫反应、淋巴细胞迁移和趋化反应等密切相关。信号通路分析显示差异表达基因涉及细胞因子与其受体反应、趋化因子信号通路、TNF、TGF-β、JAK/STAT和uPAR等。成功构建Sp1调控差异细胞因子的网络模式图。结论胰腺癌高表达Sp1可通过分泌大量细胞因子来激活相应信号通路,进而调控微环境,共同促进胰腺癌侵袭和转移。下一步需要深入研究Sp1在细胞因子调控网络中的核心作用机制。

慢病毒介导稳定表达HBcAg的P815/c细胞株的建立及鉴定

研究旨在建立稳定表达HBcAg的P815/c細胞株,为评价针对HBcAg的乙肝疫苗的免疫效果提供体外感染的细胞模型。通过构建携带HBcAg基因的慢病毒表达载体质粒pLenti-Ubc-HBcAg-EGFP-3FLAG4RES-Puro,载体质粒携帯有加强型绿色荧光蛋白(eGFP)及嘌呤霉素(Puromycin)抗性标记基因,与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒pLP/VSVG共转染人胚肾293T细胞进行包装,得到携帯有HBcAg基因的重组慢病毒颗粒LV-HBcAg-Puro。经纯化、鉴定后转染小鼠肥大瘤细胞株P815细胞72h后,通过加入并维持2μg/mL的嘌呤霉素杀死未被有效感染的细胞,药物筛选约10 d后,免疫荧光及流式细胞仪检测表达GFP的细胞比例在98%以上,Western Blot可检测到转染后细胞内HBcAg的蛋白表达。成功构建稳定表达HBcAg基因的细胞株P815/C,为研究小鼠体内针对HBcAg的疫苗诱发的CTL反应提供了细胞杀伤实验的靶细胞。

规范地方政府收费的若干思考

我国地方政府收费作为高度集中的计划经济条件下的产物，暴露出一些值得注意的问题。造成这种局面的原因是多方面的，应从划分事权、界定地方各级政府的职能范围及理顺价格体系方面入手。

胞质转导肽-HBcAg_(18-27)-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用

目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用.方法:体外分离、培养HBV转基因小鼠及近交系C57BL/6小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白介素(interleukin,IL)-4培养5d,再加入实验组10μg/mL CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组10μg/mL CTP-HBcAg18-27、10μg/mL HBcAg18-27-Tapasin及空白组RPMI1640完全培养液.流式细胞术测定DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达,ELISA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测T淋巴细胞增殖反应,流式细胞仪检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子.结果:体外成功诱导小鼠髓源性DC;CTP-HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达;并且CTP-HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平及诱导DC增殖T淋巴细胞增殖能力明显高于对照组及空白组[IL-12p70转基因小鼠(F=205.85,P=0.000);C57BL/6小鼠(F=406.20,P=0.000)];流式细胞仪检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平也高于对照组[转基因小鼠(F=155.45,P=0.000);C57BL/6小鼠(F=392.90,P=0.000)],同时HBV转基因小鼠DC表面分子及在T淋巴细胞增殖中的作用要比C57BL/6小鼠低.结论:分子伴侣Tapasin修饰胞内化抗原肽能促进HBV转基因小鼠髓源性DC的分化、成熟,并能增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力及诱导CTL的产生.

胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin通过激活PI3K/Akt通路抑制HBV转基因小鼠特异性CTL凋亡

目的探讨胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路抑制HBV转基因小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T cell,CTL)凋亡。方法 HBV转基因小鼠随机分组,100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin、50μg CTPHBcAg18-27-Tapasin、50μg CTP-HBcAg18-27及生理盐水组经肌肉免疫小鼠,每周一次,共3次。流式细胞仪检测脾细胞中胞内细胞因子水平及细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白PI3K、P-Akt及P-mTOR表达的变化。结果 100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫转基因小鼠后,能有效上调特异性CTL数量(2.74±0.20)%,高于对照组50μg CTP-HBcAg-18-27-Tapasin(2.42±0.53)%及50μg CTP-HBcAg18-27(1.70±0.56)%和空白组(0.66±0.71)%(F=741.45,P=0.000);同时,100μg CTPHBcAg18-27-Tapasin融合蛋白有效抑制特异性CTL凋亡(6.29±0.02)%,低于对照组50μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin(7.72±0.15)%及50μg CTP-HBcAg18-27(26.30±1.13)%和空白组(58.26±0.23)%(F=5313,P=0.000),并伴随凋亡相关蛋白PI3K、P-Akt及P-mTOR上调(F=52.61、18.32和94.18,P<0.05)。结论 CTP-HBcAg18-27-Tapasin能有效诱导HBV转基因小鼠特异性CTL的表达,抑制其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的激活有关。

进展期胃癌免疫治疗不良反应的相关因素及预后分析

目的·探索应用程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂行免疫治疗的进展期胃癌患者的免疫相关不良反应(immune-related adverse events,irAEs)的特征及预测因素,并分析irAEs与患者预后的相关性。方法·选择2018年6月—2021年10月于上海交通大学医学院附属仁济医院应用PD-1抑制剂治疗的进展期胃癌患者140例。根据患者有无irAEs发生,将其分为irAEs组和非irAEs组。收集并分析2组患者的临床特征、irAEs的表现及预后情况。采用多因素Logistic回归模型分析影响irAEs发生的相关因素,并建立irAEs的预测模型。运用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC curve,ROC曲线)对不同指标预测irAEs发生的能力进行评估。采用Kaplan-Meier生存曲线分析irAEs与预后的相关性。运用Cox比例风险模型分析影响患者预后的相关因素。结果·共计132例患者完成随访,其中有63例(47.7%)患者发生irAEs。比较2组患者的临床特征的结果显示,年龄≥65岁、Ki-67指数、白细胞计数、中性粒细胞计数、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)计数的组间差异具有统计学意义(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,Treg计数为影响irAEs发生的保护因素(P=0.030)。ROC曲线提示,Treg+Ki-67+年龄(≥65岁)联合指标可较好地预测irAEs的发生(AUC=0.753,95%CI 0.623~0.848,P=0.000)。Kaplan-Meier生存曲线的结果显示,irAEs组患者的无进展生存期(progression-free survival,PFS)较非irAEs组有所延长(P=0.001)。Cox比例风险回归分析提示,irAEs是患者PFS的独立影响因素(P=0.006)。结论·Treg计数是行PD-1抑制剂免疫治疗的进展期胃癌患者发生irAEs的独立影响因素,且irAEs的发生可延长患者的PFS;Treg+Ki-67+年龄(≥65岁)联合指标可对该不良反应的发生进行较好的预测。

CTP-Ub-HBcAg原核表达载体的构建及其表达

目的构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白的表达。方法以质粒pcDNA3.1(-)-Ub-HBcAg中的Ub-HBcAg融合基因为模板设计引物,上游引物带有CTP基因序列,进行PCR扩增,PCR产物克隆到原核表达质粒pMAL-c2x中,菌落PCR阳性克隆测序鉴定,鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并进一步通过直链淀粉树脂亲和层析法纯化融合蛋白,Western blotting鉴定。结果 PCR扩增得到820 bp大小的条带,为CTP-Ub-HBcAg融合序列。该序列被克隆至表达质粒pMAL-c2x中,阳性克隆菌落测序正确,并在DE3中获得诱导表达。Western blotting鉴定为70 KD的CTP-Ub-HBcA融合蛋白。结论构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并成功表达,为进一步研究该融合蛋白的功能提供了实验基础。

诗画常德展魅力 文旅融合谱新篇

沅江下游,武陵山下,有一座历经6000多年历史的古城--常德。常德气候宜人、地貌多样、水肥地美、物产丰饶,被誉为洞庭湖畔的“明珠”。常德市是长江经济带、长江中游城市群、环洞庭湖生态经济圈的重要城市,曾先后荣膺中国优秀旅游城市、国家园林城市等称号。近年来,常德以打造国内外知名旅游目的地和区域旅游集散地为目标,大力推进文旅产业高质量发展,吸引了世界各地游客纷至沓来。

风起洞庭西--湖南农垦西洞庭、西湖管理区大力发展数字农业

"湖广熟,天下足"这一说法,自明朝起就广为流传。长期以来湖南便是物产丰饶的天下粮仓,而洞庭湖区的冲积平原更是著名的"鱼米之乡"。又是一年盛夏,我们沿着杭瑞高速,来到洞庭湖西畔的常德西洞庭、西湖管理区。目光所及之处,只见广袤的原野上,牛羊成群,绿意盎然;整齐的大棚里,芦笋拔节,青翠诱人;葱茏的果园里,柑橘初挂果,香梨正丰收。而操控这一切的,竟然是手机中的APP。如果不是亲眼所见,你很难想象,传统的养殖、种植竟能够在手掌中完成。这种颠覆了我们认知感的发展趋势,显示着数字农业正在洞庭之西悄然兴起。

中国原创音乐剧能否走过20年?

2019年,作为点唱机音乐剧中最成功的代表,音乐剧《妈妈咪呀!》开始了她演出的第20个年头,而且从现在的演出趋势来看,其伦敦驻演还会持续下去。2019年,由李宗盛的作品集制作的原创音乐剧《当爱已成往事》也将走上舞台,接受观众的检验;而背后同样制作公司出品的周杰伦作品音乐剧《不能说的秘密》,却在今年9月经历了了郑州站演出取消退票的风波。

胞质转导肽介导的蛋白转导技术及其在医学领域中的应用

胞质转导肽(CTP)是一种可携带生物活性大分子(蛋白、多肽、核酸等)转运到细胞胞质的新型转导肽.大部分CTP以及CTP融合蛋白拥有胞质定位而非细胞核定位特点.另外,CTP具有独特的器官或组织趋向性,以及高效的膜穿透能力,这些显著特点使其在感染性疾病、癌症、白血病等疾病治疗领域受到广泛关注.此文综述了CTP的分子结构、转导特点及其在医学领域中的应用.

胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞抑制转基因小鼠HBV复制

目的 探讨经分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg18-27经CTP转导体内诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用. 方法 20只HBV转基因小鼠随机分组,100 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin,50μg CTP-HBcAg18-27-Tapasi,50 μg CTP-HBcAg18-27及等渗盐水组经肌肉免疫小鼠,每周一次,共3次.流式细胞仪检测脾细胞中CTL水平,微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清中HBsAg水平,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBVDNA水平,肝脏HE染色及免疫组织化学方法检测HBsAg表达.数据用均数±标准差((x-)±s)表示,用SPSS16.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),组间两两比较采用LSD法. 结果 100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫转基因小鼠后,能有效上调特异性CTL数量(2.70％±0.20％),其水平高于对照组50 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin (1.66％±0.53％)及50μg CTP-HBcAg18-27 (1.26％±0.56％)和空白组(0.75％±0.71％),F=741.45,P=0.000.肝脏HE染色及免疫组织化学结果显示实验组肝组织中炎性细胞的数量明显增多及HBsAg的表达显著减少,同时对小鼠血清中HBsAg及HBV DNA有明显的抑制作用. 结论 分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg 18-27经CTP转导免疫HBV转基因小鼠后能增加特异性CTL数量,显著降低血清中HBsAg及HBV DNA水平,同时抑制肝脏中HBsAg的表达.

强制泛素化HBcAg融合基因重组慢病毒对小鼠体内细胞毒性T细胞的诱导作用

目的观察强制泛素化HBcAg（Ub-HBcAg）融合基因重组慢病毒（Lv）对小鼠体内细胞毒性T细胞（cIL）的诱导作用。方法包装重组LV、Ub及HBcAs基因分别获得LV-HBcAg及LV-Ub-HBcAg融合基因；选取Balb／c小鼠32只，分为磷酸盐缓冲液组（PIGS组，4只，200vLPBS）、LV组（4只，200uL PBS和2×107拷贝LV的混悬液）、慢病毒HBc鲰融合基因组（LV-HBcAg组，12只，200vLPBS和2X107拷贝LV-HBcAg的混悬液）、慢病毒Ub-HBcAg融合基因组（LV-Ub-HBcAs组，12只，200t,LPBS和2X107拷贝LV-Ub-HBcAg的混悬液），所有组别的小鼠均采用尾根部皮内注射。免疫后提取小鼠T细胞，流式细胞术双标法检测胞内IFN-γ水平，ELISA法检测T细胞培养液上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的分泌水平，CCK-8试剂盒检测T细胞增殖反应。结果LV-Ub-HBcAg组诱导的CTL数量高于LV-HBcAg组（t=2．30，P〈0．05）；LV-Ub-HBcAg组T细胞的增殖反应强于LV-HBcAg组（t=2．25，P〈0．05）；免疫后LV-Ub-HBcAg组分泌的IFN-γ（44．57±2．91pg／mL）和IL-2（152．77±12．39pg／mL）高于LV-HBcAg组分泌的IFN-γ（37．23±0．84pg／mL）和ID2（101．24±5．09pg／mL），差异均有统计学意义（t=2．12、2．66，P〈0．05），LV-Ub-HBcAg组和LV-HBcAg组细胞因子Ⅱ，4和IL-10分泌差异无统计学意义（t=0．83、1．00，P〉0．05）。结论LV-Ub-HBcAg能够有效刺激T细胞增殖、活化，促进Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的分泌。抗原强制泛素化能够促进抗原蛋白的有效提呈，诱导更高水平的免疫应答。

同期双原发胃癌合并肾平滑肌肉瘤:1例报告

目的:报道1例罕见的胃癌合并肾平滑肌肉瘤病例,探讨其临床特点及诊治方法,以提高对独立多部位原发恶性肿瘤的认识。方法:通过对1例胃癌合并肾平滑肌肉瘤的同时性双原发肿瘤患者的诊治过程分析,结合国内外相关文献报道,总结该类患者的临床诊治经验。结果:本例胃癌合并肾平滑肌肉瘤患者在体检时发现右肾占位,外科手术切除后病理诊断为右肾平滑肌肉瘤。术后胃镜活检确诊为胃窦腺癌。化疗3个周期后行胃肿瘤手术切除。术后发现颈部淋巴结和肺转移,穿刺病理诊断为平滑肌肉瘤转移。经化疗、放疗和靶向治疗后,患者病情稳定,生存期已超过3年。结论:同时性双原发胃癌和肾平滑肌肉瘤极为罕见,诊断需排除原发肿瘤转移可能。本例患者在肾平滑肌肉瘤术后随访期间确诊原发胃窦腺癌。左侧颈部淋巴结为胃癌常见转移部位,而该例患者病理确诊为肾平滑肌肉瘤转移。虽处于肿瘤晚期,经多学科协作综合治疗,在保证患者较好的生活质量的同时,延长了生存期。

常德大胜村:短视频成新农具,流量成了新农资

“壶瓶飞瀑布,洞口落桃花。虎港流碧水,大胜耸丹霞。”湘西北的石门县壶瓶山镇大胜寨,拥有典型的丹霞地貌,胜景无边。大胜寨脚下、壶瓶山集镇的西北角,有一个大胜村。现在的大胜村由原大胜村、上磨山村、下磨山村合并而来,有村民483户1485人。村里山丘连绵,产业发展一度停滞不前。2008年起,大胜村大力发展生猪养殖、茶叶种植。现在全村养猪3000多头,1200亩茶叶年收益近500万元。原本贫瘠的村庄土里淘金,家家户户住上小楼房,300多户人家有了小汽车,生活水平不断提高。

津市创新推出“三本存折”折射乡村文明新风

“绿色存折”“红色存折”“爱心存折”,激发乡村治理活力。在常德津市毛里湖镇青苗社区里,各家庭院洒扫干净,紫薇、月季舒展身姿,道路旁的休闲椅被志愿者擦洗得一尘不染。恬静、文明、美丽的村庄在津市随处可见。该市乡村治理取得良好成效,“三本存折”功不可没。