人脐带间充质干细胞源小细胞外囊泡通过抑制THBS1减轻糖尿病肾病大鼠肾脏损伤

目的:探究人脐带间充质干细胞来源小细胞外囊泡(hucMSCs derived small extracellular vesicles,hucMSC-sEVs)对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠肾脏损伤的修复作用及可能机制。方法:分离培养hucMSCs并从培养上清液中提取hucMSC-sEVs。高脂联合链脲佐菌素构建DKD大鼠模型,将大鼠随机分为对照组、DKD组和hucMSC-sEVs组,每组6只,hucMSC-sEVs组在造模8周后进行尾静脉注射hucMSC-sEVs,24周后收集肾组织。肾脏组织切片进行HE染色、过碘酸雪夫(PAS)染色和天狼星红染色,观察大鼠肾组织病理学改变和纤维化样改变;蛋白质印迹检测肾组织中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达;免疫组织化学染色、免疫荧光染色和蛋白质印迹检测大鼠肾组织血小板反应蛋白1(THBS1)及其受体CD36和CD47的表达水平。结果:与对照组相比,DKD组大鼠肾脏发生明显的病理改变,如肾小球基底膜增厚和系膜增生,肾小管扩张伴有空泡变性,间质发生明显纤维化改变伴炎症细胞浸润,肾组织中Bax表达明显增加(P<0.05),Bcl-2表达显著下降(P<0.01),THBS1及其受体CD36和CD47的表达水平明显增加(P<0.001);与DKD组相比,hucMSC-sEVs组大鼠肾组织病理损伤和纤维化水平明显缓解,Bax表达显著下降(P<0.01),Bcl-2表达显著增加(P<0.01),肾脏中THBS1及其受体CD36和CD47的表达水平显著降低(P<0.001)。结论:HucMSC-sEVs可明显减轻DKD肾组织损伤发挥保护作用,其机制可能与靶向抑制THBS1的表达有关。

茶皂素对志贺菌感染的保护作用及其机制研究

目的:探究茶皂素(TS)对志贺菌感染性肠炎的保护作用及其机制研究。方法:实验分体外实验和体内实验。体外实验:通过微量肉汤稀释法检测TS对志贺菌的抗菌活性;使用酶标仪检测不同浓度TS作用下菌液的600 nm下的吸光度(A_(600)),绘制生长曲线;通过平板菌落计数检测细菌数。体内实验:将15只小鼠分为对照组、福氏2a志贺菌301株(Sf301)组和TS组,每组5只。Sf301组和TS组连续8 d分别灌胃无菌水或TS,于第3天制备志贺菌感染小鼠模型。用疾病活动指数(DAI)评价小鼠的一般情况。于第8天处死小鼠,测量各组小鼠结肠长度,取结肠组织行HE染色,观察病理学变化;取小鼠盲肠内容物与粪便进行平板计数,检测志贺菌载量;用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测结肠炎症因子的mRNA表达水平。结果:(1)体外实验:TS的最小抑菌浓度(MIC)为1024μg/ml,不同浓度的TS(256、512、1024μg/ml)的平板菌落计数、A_(600)依次减小,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)体内实验:对照组、TS组小鼠结肠分别为(7.70±0.24)、(7.35±0.41)cm,与Sf301组[(6.13±0.05)cm]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。组织病理学结果显示Sf301组结肠上皮细胞脱落,杯状细胞减少,炎性细胞浸润。而TS组结肠黏膜较完整,无炎性细胞浸润。与Sf301组比较,TS组小鼠盲肠内容物细菌载量更低(P<0.05)。TS组的肿瘤坏死因子-α水平低于Sf301组,白细胞介素-10水平高于Sf301组(均P<0.05)。结论:TS可有效抑制志贺菌,通过减少志贺菌载量和抑制炎症缓解志贺菌感染性肠炎。