反相高效液相色谱中流动相线性梯度洗脱条件下溶质保留时间预测的新方法

在计算溶质的梯度保留时间时 ,根据流动相在色谱柱内的分布规律 ,对溶质在色谱柱内的迁移距离和流动相梯度同时进行校正 ,从而建立了一种预测溶质线性梯度洗脱条件下保留时间的新方法。该方法在不同的仪器系统中 ,对于弱保留和强保留溶质在不同线性梯度洗脱条件下保留时间的预测 ,都具有良好的准确度。以 15种氨基酸和 8种苯的同系物为例 ,该方法对于弱保留溶质保留时间的预测 ,相对平均误差分别为 3 70 %和 4 90 % ,远小于文献方法得到的结果 (2 3 6 1%和 31 16 % ) ;对于强保留溶质保留时间的预测 ,相对平均误差分别为 0 2 1%和6 0 1% ,略小于文献方法得到的结果 (0 81%和 6 6 9% )。

反相高效液相色谱中复杂体系二元多台阶梯度分离条件快速优化方法

提出了一种反相高效液相色谱中二元多台阶梯度分离条件快速优化方法。通过数次线性梯度初始实验 ,求得溶质的保留方程。在此基础上 ,利用重叠分离区域图 (OSRM)方法 ,快速求得复杂样品的最佳多台阶梯度分离条件。该方法只需要几个小时就可以完成对复杂样品分离条件的优化 ,并通过对中药川芎提取物的分离加以验证 。

反相高效液相色谱三元流动相台阶梯度分离条件的快速优化方法

根据溶质在色谱柱内的迁移规律 ,建立了一种利用线性梯度实验快速获得溶质保留值方程系数 ,然后以串行色谱响应函数为优化指标进行多台阶梯度分离条件优化的方法。与利用等度实验获得保留值方程的方法相比 ,该法可以大大缩短优化时间。通过该方法对芳香胺和衍生化氨基酸样品进行了分离 ,获得了满意的分离度 ,表明该方法的预测精度很好。

选择性反应监测技术在蛋白质组学研究中的进展及应用

选择性反应监测(SRM)技术作为一种重要的定向蛋白质分析技术,通过选择性检测特定母离子和子离子来排除非目标组分的干扰,增强了检测灵敏度和定量准确度,具有选择性高、重复性好、灵敏度高、动态范围宽等优点,已被广泛应用于定量蛋白质组学研究,在生命科学领域发挥着至关重要的作用。本文从分析通量、检测灵敏度、定量方法以及相关软件资源4个方面,对近期SRM技术的研究进展进行了综述。然后,对SRM技术在蛋白质组学研究包括生物标志物验证、蛋白质翻译后修饰研究、生物工程以及信号通路分析等领域中的应用进行了概述。最后,本文对SRM技术的应用以及发展前景进行了展望。

可调移动重叠分离图法用于高效液相色谱多台阶梯度分离条件优化的研究

计算机辅助高效液相色谱(HPLC)分离条件优化可以低成本、快速地得到优化的分离条,因而已较为广泛地用于复杂样品的分离分析。基于移动重叠分离图方法,又发展了一种新型的多台阶梯度分离条件的优化方法可调移动重叠分离图法。该方法通过预测不同流动相条件下各组分的保留时间、峰宽和分离度,绘制出对于样品中各组分的重叠分离区域图。在对当前台阶流动相组成进行优化的同时,考虑其对后面一到两个台阶上流出组分保留的影响,实时地重新绘制对于后面台阶上流出组分的重叠分离区域图。通过观察当前台阶流动相条件对当前台阶和后面台阶上流出组分分离的影响,综合考虑样品中所有组分的分离情况,找到更接近全局最优的分离条件。通过扫描的方法对优化得到的分离条件进行微调,能够进一步提高分离效果。采用文献数据对可调移动重叠分离图法的应用加以说明,在二元流动相体系下,证明了该方法在HPLC方法建立方面的优越性。

氨基酸的咔唑-9-乙基氯甲酸酯柱前衍生高效液相色谱分析

采用一种新型氯甲酸酯类荧光衍生试剂咔唑_9_乙基氯甲酸酯(CEOC)对氨基酸进行柱前衍生,并通过荧光检测的方法进行高效液相色谱 (HPLC)分析 ;在HypersilBDSC18 柱上对19种氨基酸衍生物进行了分离 ,衍生物的激发和发射波长分别为λex=293nm ,λem=365nm ,当衍生化缓冲液pH为9.0,衍生试剂总量 (摩尔数)为氨基酸总量的4倍时 ,衍生化产率最大 ,平均检出限可达22.8fmol。

基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法研究进展

定量蛋白质组学已经成为后基因时代的重要研究方向之一。目前该领域的研究主要采用无标记定量方法和稳定同位素标记定量法。其中,基于稳定同位素标记的蛋白质组定量方法发展非常迅速,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。本文分析了基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法,包括相对定量方法和绝对定量方法,并对其发展进行了展望。

毛细管电色谱-质谱联用技术进展

毛细管电色谱 质谱联用技术结合了毛细管电色谱高分离性能和质谱强定性能力的特点 ,近年来得到较快的发展。本文系统综述了CEC MS接口技术及在复杂样品分离分析中应用的最新进展。引用文献 4

神经元网络用于PCDD定量构效关系的研究

研究了不同PCDD（全名Polychlorinateddioxin）同系物分子结构的表达及特征参数的选择，应用神经元网络方法对其分子结构与色谱保留值进行了关联。对49种PCDD同系物在DWS往上不同温度下保留时间进行了预测，结果95％以上的数据点相对误差小于10％，而80％以上的数据点相对误差小于5％。

毛细管反相电色谱中电渗流测定方法的研究

根据反相高效液相色谱中同系物保留值的碳数规律,通过迭代分析的方法测定了毛细管电色谱中的电渗流速率,并与一般的测定方法加以比较,探讨了影响电渗流速率测定结果的可能原因。

反相毛细管电色谱中中性化合物的保留及有机改性剂对其保留值的影响

以硫脲作为电渗流标记物测定的死时间和以苯同系物线性回归方法测定的死时间为基础 ,将液相色谱中溶质保留值方程应用到电色谱中 ,得到了容量因子与二元流动相体系中有机改性剂含量之间的关系曲线;通过实验数据说明了一些极性的电中性化合物在电场作用下也会发生迁移而引起保留值的变化 ,且这种变化还受有机改性剂含量的影响。

基于等质量肽段末端标记策略的质谱鉴定新算法

等质量肽段末端标记(Isobaric peptide termini labeling,IPTL)是一种使用轻、重同位素分别对肽段的C端和N端进行等重标记的技术。在对使用这种标记技术得到的数据进行一级谱分析时,由于肽段的质量相同,不会增加样本的复杂性,而在处理二级谱的数据时,可利用成对的b、y离子进行分析。本研究利用IPTL方法得到的实验数据设计了一种新的打分算法:全部离子打分算法(All ions scoring algorithm,AISA)。AISA在对数据进行处理时,可以同时得到定性和定量信息。在Q-Exactive He La和Human-HCC-HL数据集上的蛋白定量覆盖率分别达到99%和100%。在Q-Exactive He La 2D RPLC数据集上,AISA算法鉴定到的PSM、唯一肽段和蛋白质分别比Morpheus高15%、26%和22%。在Human-HCC-HL数据集上,AISA算法鉴定到的PSM、唯一肽段和蛋白质分别比Morpheus高24%、39%和27%。在Q-Exactive He La和Human-HCC-HL数据集上蛋白质定量比值的平均值非常接近1,分别为1.18和0.90;在0.5~2.0区间内的定量比值分别为91%和94%。

新型固定化铁离子亲和色谱整体柱的制备及评价

以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体,制备了含有高活性基团的整体材料基质。以次氨基三乙酸为配体,通过固载Fe3+,发展了一种固定化Fe3+亲和色谱(Fe-IMAC)整体柱的制备方法。该整体柱不仅对磷酸化肽具有很好的选择性,而且富集容量大、回收率高、重现性好。此外,利用该整体柱实现了牛奶蛋白质酶解产物中磷酸化肽段的选择性富集。本实验研制的Fe-IMAC整体柱有望用于磷酸化蛋白质组研究。

蛋白质组末端肽富集策略研究进展

蛋白质的末端不仅是蛋白质合成的起点和终点,更参与并调节蛋白质的各项生理功能。研究蛋白质的末端不仅对于蛋白质的结构和功能注释十分必要,还为揭示蛋白酶的作用机理提供重要信息。该文着重针对近年来蛋白质组末端肽富集策略方面取得的进展进行综述,并对蛋白质末端组学技术在蛋白酶作用底物和位点分析中的应用进行了概述。此外,还对蛋白质末端组学研究的发展前景进行了展望。

基于准等重二甲基化标记的高通量蛋白质组选择性交叉标记装置

面对生物学及精准医学等领域多变量、大样本量的蛋白质组定量分析的需求,高通量的定量标记及分析已经成为近年来蛋白质组学方法发展的趋势。发展了一种基于准等重二甲基化标记策略的高通量肽段末端选择性交叉标记装置(pIDL-StageTip),借助简单的装置及离心力,有效地增加了定量标记的通量,并保证了肽段末端两步标记反应时间的可控性及操作的简便性。通过优化酸性条件下NaBD_3CN与NaBH_3CN体系的标记条件,得到了标准蛋白质酶解产物100%的标记效率、95%以上的标记选择性;在人源蛋白质组复杂体系下,标记效率大于99%,标记选择性为100%。基于该装置的定量方法具有很高的定量准确度及精密度。该装置为实现高可操作性、高准确度、高通量的蛋白质组定量标记提供了一个可靠的解决方案。

芯片自由流电泳的研究进展

芯片自由流电泳(μ-FFE)是一种连续微制备或预分离技术,已在细胞、细胞器、蛋白质等生物样品的分析中发挥了重要作用。本文系统综述了μ-FFE的研究进展,侧重于介绍各种自由流芯片的结构、分离模式和应用。此外,还对μ-FFE的发展方向进行了展望。

SUMO化蛋白质组的富集策略研究进展

蛋白质的SUMO(Small ubiquitin-like modifier)化修饰是生物体内一类重要的翻译后修饰,与核转运、转录调控、基因完整性维持和细胞周期调控等重要生物学过程密切相关。然而由于SUMO本身天然丰度低以及氨基酸序列冗长,SUMO化修饰的分析鉴定一直是研究的热点和难点。为实现SUMO化蛋白质组的深度覆盖分析,发展高效的SUMO化蛋白质/肽段的富集方法十分必要。该文对SUMO化蛋白质组不同富集方法的原理、特点以及最新研究进展进行了综述,并对其发展前景进行了展望。

反相液相色谱中测定死时间的新方法

本文根据同系物保留值的碳数规律 ,提出了一种测定反相液相色谱死时间的新方法 ,并以烷基苯同系物为例 ,加以实验验证。结果表明 ,以这种方法测得的死时间准确可靠 ,并且与正相色谱中的情况类似 ,反相液相色谱中死时间标记物与固定相之间也存在着相互作用。

深度覆盖的蛋白质组精准鉴定与定量新技术

蛋白质,尤其是低丰度蛋白质,种类和含量的变化在调控生命过程中发挥着至关重要的作用。因此深度覆盖的蛋白质组精准鉴定与定量新技术对深入认识蛋白质机器的动态变化规律具有重要意义。针对目前蛋白质组定性定量分析领域存在的可变剪切和新生肽链组鉴定灵敏度低、蛋白质组精准定量覆盖度低以及纯化蛋白质全序列测定准确度低等关键科学问题,通过发展可变剪切和新生肽链组的高灵敏鉴定技术、基于高效标记和特征肽段的蛋白质组精准定量技术、基于高效分离的蛋白质组深度覆盖定量技术以及纯化蛋白质的全序列高准确测定技术等具有原始创新性的新一代蛋白质组学分析技术,显著提高蛋白质组分析的灵敏度、精准度和覆盖度,并将发展的新技术示范性用于与生物医药、国家安全和人口健康领域密切相关的耐药菌、耐辐射球菌、人肝癌高低转移细胞株等的深度覆盖蛋白质组精准定量分析,进而为满足国家重大领域的实际需求提供关键技术支撑。

基于二辛基化标记的蛋白质组N末端肽富集方法

蛋白质末端的研究不仅对于蛋白质的结构和功能注释十分必要,还能够为蛋白酶作用机理的揭示提供重要信息.针对传统蛋白质组N末端肽富集需要采用大量去除材料导致N末端肽回收率低,以及步骤繁琐、样品损失等问题,本文发展了一种基于二辛基化标记的蛋白质组N末端肽反向富集方法,可以在单次反相色谱分离中实现非N末端肽的去除.以酵母蛋白质酶解产物为样品对方法进行考察,结果表明,该方法具备较高的二辛基化标记效率(93%),且非N末端肽经二辛基化标记后能够显著偏移至强保留区.将其应用于酵母蛋白质N末端组的分析,共鉴定到237条蛋白原始N末端肽和133 neo-N末端肽,较富集前分别提高了2.1和3.3倍.此外,将该方法结合多种酶切方式,使N末端肽和neo-N末端肽的鉴定数目进一步提高37%和60%,促进了蛋白质N末端组鉴定覆盖度的提高.