应用Nissl/GFAP荧光标记流式细胞术检测神经干细胞分化的研究

目的:探寻一种能快速准确地对神经干细胞分化结果进行定量鉴定的检测方法。方法:采用神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)免疫荧光和Nissl荧光染色观察体内神经元尼氏小体的染色情况;采用NeuN免疫荧光和Nissl荧光染色观察体外神经干细胞诱导分化后的神经元尼氏小体的荧光染色情况;体外诱导神经干细胞分化后,收集细胞悬液进行胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光和Nissl荧光标记,显微镜和流式细胞术检测神经干细胞分化情况。结果:NeuroTrace Nissl 530/615红色荧光染色剂除了对体内、外NeuN阳性神经元的尼氏小体染色外,所有细胞的细胞核也呈阳性信号;神经干细胞分化后的细胞悬液滴片可观察到GFAP免疫荧光阳性的星形胶质细胞,其Nissl荧光仅能标记细胞核,而GFAP阴性细胞除细胞核阳性信号外,还可观察到尼氏小体;流式细胞术可通过GFAP和Nissl两个荧光通道明显区分神经干细胞诱导分化后的神经元和胶质细胞。结论:应用Nissl/GFAP荧光标记流式细胞术可快速准确地计数神经干细胞诱导分化后的神经元和胶质细胞的数量及比例。