白桦脂醇通过ER/MAPK信号通路对A375细胞黑素合成及机制

目的：研究植物雌激素成分白桦脂醇及加入受体阻断剂（ICI182780）后对A375细胞的黑素合成及机制的影响。方法：将1μmol·L^（-1）白桦脂醇作用于A375黑素细胞,实验分为空白组（DMEM完全培养液）,雌二醇组（1×10^（-3）μmol·L^（-1））,白桦脂醇组（1μmol·L^（-1））,白桦脂醇＋ICI182780组（1μmol·L^（-1）＋1μmol·L^（-1））。用Na OH裂解法检测黑素含量、蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR法（Real-time PCR）测定雌激素受体/丝裂原激活的蛋白激酶（ER/MAPK）通路中关键蛋白激酶p38 MAPK,ERβ,c-Jun氨基末端激酶（JNK）,细胞外信号调节激酶2（ERK2）和小眼畸形相关转录因子（MITF）,酪氨酸酶（TYR）,酪氨酸酶相关蛋白-1（TRP-1）,酪氨酸酶相关蛋白-2（TRP-2）的蛋白及其mRNA表达。结果：与空白组比较,白桦脂醇组和白桦脂醇＋ICI182780组对A375细胞黑素合成有显著抑制作用（P〈0.01）;1μmol·L^（-1）的白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白表达有不同程度的抑制作用（P〈0.05,P〈0.01）,对ERK2,MITF,TRP-1 mRNA的表达也有不同程度的抑制作用（P〈0.05,P〈0.01）。与白桦脂醇组比较,ICI182780可以逆转白桦脂醇对A375细胞黑素合成的抑制作用（P〈0.01）;ICI182780可以逆转白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白表达的抑制作用及对ERK2,MITF,TRP-1 mRNA的表达的抑制作用（P〈0.05,P〈0.01）。结论：白桦脂醇能够通过ER/MAPK信号通路下调MITF,TYR,TRP-1及TRP-2蛋白表达量,从而减少黑素合成。

补骨脂素对A375细胞黑素合成及ER/MAPK信号通路调控机制探讨

目的：探讨补骨脂素对A375细胞黑素含量、酪氨酸酶活性的影响及作用机制。方法：以密度2×105个/孔的细胞数接种于6孔板中,将细胞分为空白组、雌二醇组、补骨脂素组、补骨脂素＋雌激素受体（ER）阻断剂组（ICI182780）（浓度分别为1×10-3,1,1μmol·L^（-1））。采用Na OH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性;蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法测定ER/丝裂原激活的蛋白激酶（ER/MAPK）通路中关键蛋白激酶p38,c-Jun氨基末端激酶（JNK）,细胞外信号调节激酶2（ERK2）和小眼畸形相关转录因子（MITF）,多巴氧化法检测酪氨酸酶（TYR）,酪氨酸酶相关蛋白-1（TRP-1）,酪氨酸酶相关蛋白-2（TRP-2）的蛋白含量及相应mRNA表达。结果：与空白组比较,补骨脂素组对A375细胞中的黑素合成及TYR活性具有显著抑制作用（P〈0.01）,对A375细胞中雌激素受体β（ERβ）蛋白的表达具有明显的抑制作用（P〈0.05）,对p38 MAPK,ERK2,JNK的蛋白表达极显著的抑制作用（P〈0.01）,对MITF,TYR,TRP-1,TRP-2的蛋白表达极显著的抑制作用（P〈0.01）,对ERK2,p38 MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达显著被抑制（P〈0.01）;与补骨脂素组比较,ICI182780能够逆转ERβ,ERK,MITF,TYR,TRP-1的蛋白表达（P〈0.01）及p38MAPK,JNK,TRP-2的蛋白表达（P〈0.05）,同时能显著阻断补骨脂素对ERK2,p38MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达作用（P〈0.01）。结论：补骨脂素通过ER/MAPK信号通路下调MITF和TYR,TRP-1,TRP-2的表达量,从而减少黑素合成。