野马鼻肺炎病毒的分离鉴定

从新疆昌吉州吉木萨尔野马饲养繁殖中心送检的野马病料中分离到１株病毒，我们对其进行了鉴定。该病毒株在ＢＨＫ－２１细胞上连传６代出现典型的细胞病变，用适应ＢＨＫ－２１细胞的病毒接种鸡胚成纤维细胞、乳豚鼠肾原代细胞、豚鼠睾丸细胞均出现程度不同的细胞病变。在电镜下可见到典型的马鼻肺炎病毒粒子。病毒对５－碘脱氧尿核苷、氯仿、乙醚等敏感。在ｐＨ３．０下失活，５６℃３０ｍｉｎ灭活。病毒能被马鼻肺炎病毒标准阳性血清所中和。病毒接种乳豚鼠出现典型致死性肝炎。结果表明，所分离病毒为马鼻肺炎病毒，并将该毒株定名为ＰＨ９３－１。

新疆马鼻肺炎的血清学调查

对新疆 11个地、州的 2 1个县 (市 )的 2 82 1份血清样品用微量补体结合试验进行了马鼻肺炎血清学调查。结果 ,仅在吉木萨尔县和奇台县境内检出 2 5份阳性血清。调查表明 ,虽然在新疆境内存在马鼻肺炎 。

野马马鼻肺炎病实验诊断

野马马鼻肺炎病实验诊断单文鲁杜建陈德胜白惠敏卢伟东（新疆农业大学畜牧分院，乌鲁木齐８３００５２）刘福元（乌鲁木齐畜牧兽医草原检疫总站）普氏野马为甲级濒危物种，它原产于中国新疆、甘肃和蒙古人民共和国的干旱荒漠、半荒漠平原地带。１８７６年由俄国人Ｐｒｚｅ...

马鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis)及诊断

马鼻肺炎是由马疱疹病毒引起的马属动物传染病。国际兽医局 (OIE)把马鼻肺炎列为B类疾病 ,被《国际动物卫生法典》(1999)列入法定报告疾病目录。本病在世界各地广泛发生 ,给世界养马业带来很大危害。病毒中和试验为国际贸易替代诊断方法 ,补体结合试验为常用的血清抗体调查和回顾性诊断方法 ,PCR方法可快速、特异。

非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究

用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白Ｐ７２ 基因的重组杆状病毒（Ｂａｃｐ７２）作载体，在ｓｆ９细胞中表达并得到重组Ｐ７２蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可得到分子量在 ７２ｋＤａ左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 Ｐ７２蛋白进行 ＥＬＩＳＡ检测，证明该蛋白具有生物学活性。用Ｐ７２作为间接法的包被抗原，对ＥＬＩＳＡ反应条件进行了优化。确定最佳包被液为ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、最佳封闭液为１％ＰＣＴ、最佳血清稀释液为４％ＰＥＧ６０００／ＰＢＳ、最佳冲洗液为０．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ（ｐＨ７．２）。本实验反应体系采用５０μｌ的微量法，可节约试剂及抗原。反应在２小时内即可完成，达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于－２０℃的冰箱中，至少可以保存５个月。阻断试验和交叉试验表明ＥＬＩＳＡ法有良好的特异性。间接ＥＬＩＳＡ比Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果，与我国实际情况相符。用Ｂａｃｐ７２表达的非洲猪瘟病毒Ｐ７２蛋白抗原作为间接ＥＬＩＳＡ的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱株基因组B节段的克隆和序列分析

用蛋白酶K法分离提取了鸡传染性法氏囊病病毒强毒株Gx及其致弱株Gt的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板用长距离一步法扩增出全长基因B节段 ,将其克隆入PMD18_T载体 ,进行了测序 ,并用DNAStar软件进行序列分析。测序结果表明 ,克隆的Gx株B节段全长为 2 82 7bp ,与超强毒参考株UK6 6 1的同源性为 88 2 % ,与强毒参考株Harbin_1株的同源性达 96 3% ;克隆的Gt株B节段全长为 2 82 7bp ,与弱毒参考株P2的同源性达 99 5 %。而Gx株与Gt株B节段的核苷酸的同源性只有 89 8% ;vvIBDV_Gx。

应用一步PCR法检测并鉴定马疱疹病毒1型和4型

聚合酶链反应 (PCR)可作为一种快速检测并鉴别马疱疹病毒 1型 (EHV 1)和马疱疹病毒 4型 (EHV 4)的诊断方法。PCR引物是根据编码EHV 1和EHV 4的糖蛋白B(gB)基因上的共有的核苷酸序列或型特有的核苷酸序列设计的。利用这两种病毒的型特异性混合引物 ,在一步PCR反应中检测并鉴别EHV 1和EHV 4,而同一疱疹病毒科的单纯疱疹病毒 1型 (HSV 1)、伪狂犬病毒 (PRV)、马立克氏病病毒 (MDV)均无特异性扩增。应用建立的PCR方法检测了普氏野马流产胎儿病料 ,实验结果表明 ,这种PCR方法是一种直接检测并鉴定EHV 1和EHV 4的快速、敏感的诊断方法 ,同时 ,它可在一步PCR反应中直接鉴别这两种病毒 ,可用于病料中EHV 1和EHV 4检测的初步筛选。

抗犬细小病毒高免血清的制备和应用

应用差速离心和密度梯度平衡离心技术从患 CPV 性肠炎的犬粪便和肠内容物中提纯的 CPV 抗原接种犬,制备了高效价的抗血清。用该血清共治疗78头病犬,治愈率达82%(64/78).实践表明,自制的高免血清对患 CPV性肠炎的病犬具有治疗和控制疾病发展的作用,特别是早期病例,仅用抗血清即可治愈,对中期病犬结合支持和对症疗法可大大提高治愈率,有很高的应用价值。

新疆幼畜和人非典型轮状病毒的调查和鉴定

自１９８４至１９９４年１０年间，在新疆采集了绵羊、山羊羔、仔猪、犊牛、骆驼羔和鸡的粪样１９５９份，以及住院腹泻婴幼儿、无症状新生儿和成人腹泻的粪样２５５份，共２２１４份。用ＰＡＧＥ法检测了这些粪样中的轮状病毒和非典型轮状病毒。按Ｓａｉｆ电泳型分组法，检出的各组轮状病毒是：Ａ组２７６份，在成人腹泻和驼羔中未检出；Ｂ组２６份，都是从羊羔和仔猪中检出；Ｃ组２２份，都是从仔猪中检出；Ｄ组２份，在鸡中检出；似Ｅ组１份，从仔猪中检出。取检出的各组非典型轮状病毒９株，即羊羔Ｂ组２株（ＫＢ－６３和ＬＢ－６０），仔猪Ｂ组４株（ＭＰＢ－１、２，ＳＰＢ－３、４），仔猪Ｃ组２株（ＳＰＣ－１１、ＺＰＣ－１２），仔猪似Ｅ组１株（ＭＰＢ－５），口服接种剥夺初乳的本种动物，接种后１２－１６小时动物都发生急性水样腹泻，并检出大量病毒。对这９株病毒和１株成人腹泻轮状病毒（ＡＤＲＶ），用ＥＬＩＳＡ和对流免疫电泳检测Ａ、Ｂ组组抗原，结果ＡＤＲＶ、羊羔Ｂ组、仔猪Ｂ组和似Ｅ组共８株病毒都只有Ｂ组组抗原。用Ａ、Ｂ组轮状病毒生物素核酸探针斑点杂交分别检测８株和１０株病毒，血清学检测为Ｂ组者都只与Ｂ组有杂交信号。Ｃ组的两株则既无Ａ、Ｂ组组抗原，也不与Ａ、Ｂ?

从绵羊羔和山羊羔腹泻粪样中检出B组轮状病毒

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,从新疆巴里坤县的22份绵、山羊羔腹泻粪样中,检出11份具有B组轮状病毒的RNA电泳图型,联合电泳表明,绵羊羔与山羊羔的B组轮状病毒电泳图型完全相同,电镜观察表明,该病毒与典型轮状病毒(A组)具有相同的形态特征,但易降解破碎,口服接种剥夺初乳的绵羊羔和山羊羔,经11～13小时羔羊发生急性水样腹泻,并排出大量病毒,经A组轮状病毒组抗原ELISA检测,不具有共同组特异抗原,但经对流免疫电泳检测,它与成人腹泻轮状病毒(B组)具有共同组特异抗原,从而证实我国存在与国外报道相同的羊B组轮状病毒,既感染绵羊羔也感染山羊羔。是引起绵,山羊羔急性腹泻的不可忽视的病原之一。

套式PCR分型检测马鼻肺炎病毒的方法研究

马鼻肺炎病毒亚型１和亚型２被重新分类并命名为马疱疹病毒１型（ＥＨＶ－１）和马疱疹病毒４型（ＥＨＶ－４）。聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术可应用于检测并区分ＥＨＶ－１和ＥＨＶ－４。选择编码ＥＨＶ－１和ＥＨＶ－４的糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因作为引物。外侧引物为ＥＨＶ－１和ＥＨＶ－４ ＤＮＡ共有的核苷酸序列。内侧引物分别为ＥＨＶ－１或ＥＨＶ－４ ＤＮＡ特有的核苷酸序列。将琼脂免疫扩散试验检测为阴性的７１份马血清样品进行ＰＣＲ检测，其中检出３份血清为阳性，并确诊为ＥＨＶ－１型。结果表明，套式ＰＣＲ的灵敏度比一般ＰＣＲ提高１００倍左右，从而建立了一种快速、敏感、特异的检测并区分ＥＨＶ－１和ＥＨＶ－４的方法，确诊了从新疆普氏野马上分离的ＰＨ９３－１株为ＥＨＶ－１型。

伊犁地区雏鸡群沙门氏菌病的分离及病菌药物敏感性的调查

选择发病雏鸡群作为调查对象,研究伊犁地区鸡群中沙门氏菌病的流行情况。实验共调查发病鸡群23个,分别分布在伊犁地区的3个县城和5个乡镇,分出沙门氏菌的鸡群为20个。对这些沙门氏菌株,选用圆纸片扩散实验法(Kirby-Baueer Disc Diffusion)作药敏实验,结果所实验的12种药物中,丁胺卡那、头孢噻肟、氧氟沙星和利福平等药表现出较好的抑菌杀菌效果,但是所有实验沙门氏菌都有耐药现象存在。

反义RNA重组逆转录病毒逆转录套式PCR检测方法的建立

为探求一种快速检测反义RNA重组逆转录病毒效价的新方法,用脂质体介导法将反义RNA重组逆转录病毒载体pLXSA、pLXSB分别转染包装细胞系PA317,经G418筛选,获得数个稳定的产毒细胞克隆,择优挑选7个细胞克隆扩增培养,收集细胞上清,用异硫氰酸胍-酚一步法提取病毒RNA,进行逆转录套式PCR,检测细胞上清中的反义RNA重组逆转录病毒效价,同时用传统方法(小鼠成纤维放大法)进行测定。2种方法检测结果的比较表明,逆转录套式PCR法的特异性和敏感性均高于小鼠成纤维放大法,是一种敏感性高、特异性强、操作简便、快速的检测逆转录病毒效价的新方法。

狂犬病快速诊断方法的建立和应用

根据狂犬病病毒核蛋白基因保守区序列设计1对引物,建立了用于狂犬病病毒特异性核酸检测的RTPCR技术。该技术可从狂犬病病毒CVS株、8202株和SRV9株的含毒细胞培养物及鼠脑组织中,扩增出443bp的核酸片段,检出核酸的敏感性约为3pg。对30份不同种动物脑组织的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合,但前者可在3h内直接对组织匀浆进行诊断,具有快速。

mRNA差异显示技术及其改进

分子生物学的首要任务之一就是比较不同细胞间或同一细胞不同时间与空间基因表达的差异。在多种基因检测技术中 ,mRNA差异显示技术作为研究细胞、组织在不同条件下 ,基因表达水平差异的重要手段 ,以不可替代的优势已被广泛用于生物学领域。该技术与传统的消减杂交等方法进行比较具有简便、快捷、灵敏、高效等优点 ,但也存在假阳性率高、易污染等缺点。为了克服以上缺点又不断涌现出一些改进技术。文章对该技术的原理。

新城疫病毒F48E9感染CEF细胞特异性表达基因的筛选鉴定

分别以NDVF48E9和LaSota株感染鸡胚成纤维细胞,于感染后8h提取NDV感染CEF细胞总RNA,通过mR NA差异显示技术筛选病毒感染诱导表达的特异性基因。主要方法是先以锚定引物经反转录后,然后以9～10bp随机引物为上游引物,以锚定引物Oligod(T)18为下游引物,进行PCR扩增,PCR产物采用8%的尿素变性PAGE胶电泳进行分离鉴定。对于特征性差异带进行第二次PCR扩增,克隆后测定其核苷酸序列。结果我们发现数个差异条带,选取差异带在500bp以内的条带,经测序后显示经NDVF48E9感染后,有一条差异条带特异性表达的基因所编码的蛋白与Receptor(TNFRSF)_interactingserine_threoninekinase2有47%同源,是一个新基因,其蛋白功能不明确,有可能和细胞的凋亡有关。

一株电泳型独特的猪B组轮状病毒的分离鉴定

１９８９年春，在新疆某猪场采集的仔猪腹泻粪样中，以ＰＡＧＥ法检出一株电泳型独特的非典型轮状病毒，其电泳型与Ｃｈａｓｅｙ等［１］报道的猪Ｅ组轮状病毒相似，该毒株样品口服接种剥夺初乳仔猪可在１２～１６ｈ后引起仔猪急性水样腹泻，并可在剥夺初乳仔猪体内稳定传代，但在用ＥＬＩＳＡ和ＣＩＥ法检测时发现该毒株不具有Ａ组轮状病毒组抗原，而具有Ｂ组轮状病毒组抗原．后用Ａ、Ｂ组轮状病毒全基因核酸探针斑点杂交检测，它与Ａ组探针无杂交信号，而与Ｂ组探针则有杂交信号。证明该毒株为一电泳型独特的仔猪Ｂ组轮状病毒．

止泻散及921—止泻合剂对人工感染犊、羔、仔猪的轮状病毒及非典型轮状病毒性腹泻防治试验报告

在畜牧业发展中,幼畜腹泻造成了很大危害,每年因腹泻死亡的羔羊约20万头,仔猪约8万头,犊牛约5万头。引起腹泻的病因很多,根据国内外的资料和我们调查研究的结果表明,轮状病毒(GARV)和非典型轮状病毒(GBRV、GCRV)也是幼畜腹泻的重要病源之一。 我们自1986年～1992年间先后使用研制的中草药剂止泻散及921—止泻合剂对人工试验的犊牛、羔羊及仔猪的轮状病毒和非典型轮状病毒性腹泻进行了防治试验,取得了较为满意的效果。

山羊B组轮状病毒KB－63株动物感染实验

以山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３株（本室分离鉴定）口服接种剥夺初乳的新生山羊羔、绵羊羔、犊牛以及仔猪。该毒株可在接种后１２～１７ｈ内引起山羊羔、绵羊羔，以及犊牛发生急性腹泻，并排出大量病毒，其核酸电泳图型及组抗原检测也与原接种病毒一致。当该毒株接种剥夺初乳仔猪时。