补阳还五汤增强GPX4表达抑制铁死亡减轻脑缺血再灌注损伤

目的探讨补阳还五汤减轻脑缺血再灌注损伤是否通过增强GPX4的表达抑制铁死亡的机制。方法选取健康雄性SD大鼠48只,随机分为4组:假手术组(Sham组)、模型组(MCAO/R组)、补阳还五汤组(BYHWD组)、阳性对照药组(DFO组)。所有实验动物均建MCAO/R模型(假手术组仅剥离)。BYHWD组给予补阳还五汤灌胃处理,DFO组给予DFO腹腔注射处理,其余组予以生理盐水灌胃处理。再灌注72 h进行指标评定及取材。神经功能评分检测神经功能;TTC染色测定脑梗死面积;尼氏染色观察脑组织形态结构;生化试剂检测血清GSH、丙二醛(MDA)、脑组织铁含量;免疫荧光和Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠神经功能损伤明显,脑梗死体积增多,脑组织病理学损伤明显,尼氏体数量减少,脑组织铁含量、血清MDA含量明显增加,血清GSH含量、脑组织GPX4的蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤组大鼠神经功能明显好转,脑梗死体积降低,脑组织病理学损伤减轻,脑组织铁含量、血清MDA含量降低,血清GSH含量,脑组织GPX4的蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论补阳还五汤抑制脑缺血再灌注损伤可能通过增强GPX4的表达抑制铁死亡而发挥作用。

补阳还五汤通过PI3K/AKT通路调控自噬抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用

目的探究补阳还五汤通过PI3K/AKT通路调控自噬抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用。方法大鼠随机分为5组(n=10):假手术组(Sham)、模型组(Model)、补阳还五汤组(BYHWD)、PI3K抑制剂组(LY294002)与溶媒剂组(Vehicle)。除Sham组外,其余各组均缺血2 h,再灌注72 h造模处理。Zea Longa评分评估神经缺损、TTC检测脑梗死体积、HE观察脑部缺血半暗带(ischemic penumbra,IP)损伤、免疫荧光检测LC3B、Western blot检测PI3K/AKT通路与自噬标志蛋白。结果BYHWD组与Model组相比,大鼠神经功能评分降低、脑梗死体积减小、脑部IP病理损伤减轻,PI3K与p-AKT/AKT表达增加,LC3Ⅱ/Ⅰ降低,p62升高(P<0.05);BYHWD的调控作用被LY294002减弱(P<0.05)。结论补阳还五汤通过激活PI3K/AKT通路抑制细胞自噬,从而减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤。

破裂颅内动脉瘤急诊介入栓塞治疗189例临床分析

目的 探讨应用血管内介入栓塞技术治疗急性期颅内破裂动脉瘤的临床疗效.方法 对以蛛网膜下腔出血（SAH）为首发症状的侣9例（198个）颅内动脉瘤早期（出血后3d内）采用血管内介入栓塞治疗.患者术前Hunt-Hess分级l-II级105例,m级48例,Ⅳ级34例,Ⅴ级2例;均采用电解或水解脱式微弹簧圈栓塞治疗,其中32例宽颈动脉瘤采用球囊瘤颈成型弹簧圈栓塞术,16例宽颈或者梭形动脉瘤采用支架辅助弹簧圈栓塞术.1例假性动脉瘤单纯采用带膜支架植入闭塞,1例载瘤动脉单纯采用球囊闭塞,2例动脉瘤采用胶水或者胶水加弹簧圈栓塞.结果 198个颅内动脉瘤完全致密栓塞166个,不完全致密栓塞21个,不完全栓塞10个,栓塞失败1个;术中发生出血6例.术后发生再出血2例,死亡3例.结论 对Hunt-Hess分级Ⅰ～Ⅳ级的患者实施急诊介入治疗安全可靠,可避免动脉瘤再次破裂出血,防止或减少并发症,明显降病死率和致残率.

原生质体融合结合基因编辑技术显著提高酿酒酵母2-苯乙醇产量

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)已用于生产天然2-苯乙醇(2-phenylethanol,2-PE),但其产量低,耐受性差。该研究筛选出3株具有不同优良性状的酿酒酵母菌株,其中菌株LSC-1的2-PE产量为3.41 g/L,菌株NGER对2-PE的耐受性达3.60 g/L,菌株S.C-1耐热性好并能在41℃下生长。以这3株菌为亲本,通过2轮原生质体融合获得融合子菌株RH2-16,对2-PE的耐受性提高了20%。以L-苯丙氨酸为底物,发酵转化36 h,2-PE产量达到4.31 g/L,与亲本菌株LSC-1和2-PE工业生产菌株CWY132相比,分别提高26.4%和38.1%。利用CRISPR/Cas9系统,在RH2-16中构建了含突变的Ras特异性鸟嘌呤核苷酸交换因子CDC25(W1416C)菌株,2-PE的产量提高了8%。在RH2-16中过表达艾氏途径合成2-PE关键基因ARO8,ARO10和ADH2未能提高2-PE产量。研究为筛选合成2-PE等天然产物的新型酿酒酵母菌株及其育种提供了一种有效策略。

补阳还五汤通过miR-148a-3p抑制大鼠星形胶质细胞凋亡而减轻脑缺血再灌注损伤

目的:探究补阳还五汤是否通过激活微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)靶向调控胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)而抑制大鼠氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)星形胶质细胞凋亡。方法:取对数生长期的大鼠星形胶质细胞系CTX TNA2,随机分为5组:空白对照组(CON组)、模型组(OGD/R组)、补阳还五汤含药血清(BYHWDS)组、miR-148a-3p抑制物组(inhibitor组)和BYHWDS+inhibitor组,每组每种检测重复3次。除CON组外,其余各组氧糖剥夺6 h后复氧复糖24 h,并于复氧复糖的同时给予相应药物处理(但转染于造模前操作)。采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTS法检测各组细胞活力变化;qRT-PCR检测miR-148a-3p、GFAP mRNA和caspase-3 mRNA的表达水平;Western blot检测GFAP、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9和cleaved caspase-9蛋白水平;annexin V-FITC/PI染色检测CTX TNA2细胞的凋亡情况;免疫荧光双染观察GFAP、caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果:与CON组相比,OGD/R组和inhibitor组的细胞皱缩,突起严重萎缩、变形,细胞碎片增多,细胞活力显著降低(P<0.01),miR-148a-3p表达水平降低(P<0.01),GFAP和caspase-3的mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),GFAP蛋白表达水平,cleaved caspase-3/caspase-3、Bax/Bcl-2和cleaved caspase-9/caspase-9比值,以及细胞凋亡水平均显著升高(P<0.05)。与OGD/R组和inhibitor组相比,BYHWDS组和BYHWDS+inhibitor组细胞形态较损伤后有所恢复,突起萎缩减轻,连接有所增加,细胞活力显著升高(P<0.01),miR-148a-3p表达水平升高(P<0.01),GFAP和caspase-3的mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),GFAP蛋白表达水平,cleaved caspase-3/caspase-3、Bax/Bcl-2和cleaved caspase-9/caspase-9比值,以及细胞凋亡水平均显著降低(P<0.05)。结论:补阳还五汤能上调miR-148a-3p表达而调低靶基因GFAP,从而抑制OGD/R大鼠CTX TNA2细胞凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用。

马齿苋和海桐皮煎剂体外抗阴道毛滴虫作用的研究

阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis）是寄生在人体阴道和泌尿道的一种常见病原体,由其引起的阴道毛滴虫病是一种性传播疾病。该病在世界范围内广泛流行,人群感染比较普遍,全世界每年有超过1.7亿人感染[1]。阴道毛滴虫具有一定的侵袭性,

补阳还五汤防治脑缺血再灌注损伤的研究进展

补阳还五汤是益气活血的代表方,其根据气虚血瘀理论而立,具有补气行血、活血化瘀的作用,广泛应用于缺血性脑卒中的临床防治。梗死组织周边缺血半暗带的恢复再通是缺血性脑卒中的首选治疗方法,然而脑血流再灌注会引起一系列的病理过程,这被称为脑缺血再灌注损伤(CIRI)。研究显示,CIRI主要通过脑神经元兴奋性氨基酸毒性增强、钙超载、氧自由基损伤、炎症反应、细胞凋亡等途径造成神经细胞损伤。补阳还五汤可以通过抑制兴奋性氨基酸毒性、减轻钙超载、抑制氧自由基损伤、减轻炎症反应、抑制细胞凋亡等防治CIRI。本文研究近年来发表的补阳还五汤防治CIRI的相关文献,现将其研究进展进行综述。

桃叶珊瑚苷改善孕期艾司氯胺酮暴露诱发子代小鼠注意缺陷多动障碍的机制:缰核GABA能神经元

目的评价桃叶珊瑚苷改善孕期艾司氯胺酮暴露诱发子代小鼠注意缺陷多动障碍(ADHD)的机制与缰核GABA能神经元的关系。方法SPF级健康C57BL/6野生型孕鼠,于孕中晚期腹腔注射艾司氯胺酮建立子代小鼠ADHD模型。取艾司氯胺酮暴露孕鼠的子代小鼠24只,于出生后14 d时,采用随机数字表法分为2组(n=12):ADHD+生理盐水组(AN组)和ADHD+桃叶珊瑚苷组(AA组)。取非艾司氯胺酮暴露孕鼠的子代小鼠24只,于出生后14 d时,采用随机数字表法分为2组(n=12):对照+生理盐水组(CN组)和对照+桃叶珊瑚苷组(CA组)。CA组和AA组腹腔注射桃叶珊瑚苷40 mg/kg,1次/d,连续7 d;CN组和AN组以等容量生理盐水替代。出生后14 d时,于缰核区置入16通道微丝阵列电极,记录小鼠在埋珠实验中掩埋珠子时缰核兴奋性神经元/抑制性神经元数量比值。于出生后21 d(腹腔给药结束后)时,行O形高架迷宫实验和埋珠实验分别评估子代小鼠冲动及刻板样行为,随后采用免疫荧光法检测缰核谷氨酸脱羧酶2(GAD2)的表达。结果与CN组比较,AN组缰核兴奋性神经元/抑制性神经元数量比值升高,GAD2表达下调,开放臂停留时间延长,进入开放臂次数和掩埋珠子数量增多(P<0.05),CA组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与AN组比较,AA组缰核兴奋性神经元/抑制性神经元数量比值降低,GAD2表达上调,开放臂停留时间缩短,进入开放臂次数和掩埋珠子数量减少(P<0.05)。结论桃叶珊瑚苷改善孕期艾司氯胺酮暴露诱发子代小鼠ADHD的机制,可能与增加缰核GABA能神经元数量有关。

淫羊藿苷对失血性休克复苏模型小鼠认知功能及星形胶质细胞焦亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷对失血性休克复苏模型小鼠认知功能及星形胶质细胞焦亡的影响。方法:48只SPF级健康雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为4组(每组n=12):假手术对照组(C组)、失血性休克复苏组(H组)、失血性休克复苏+淫羊藿苷组(HI组)和失血性休克复苏+淫羊藿苷+SSK1组[HIS组,其中SSK1为p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化激动剂]。H、HI和HIS组小鼠通过股静脉放血回输法建立失血性休克复苏模型;HI和HIS组在复苏第2天行淫羊藿苷(10 mg/kg)灌胃,连续7 d;C组和H组仅向小鼠灌胃含二甲基亚砜的等量0.9%氯化钠溶液。HIS组小鼠在复苏第2天行SSK1(0.5 mg/kg)腹腔注射,连续7 d;C、H和HI组仅向腹腔注射含二甲亚砜的等量0.9%氯化钠溶液。于术后15 d,采用新物体识别实验和恐惧条件实验评价小鼠认知功能。通过免疫荧光染色法测定小鼠海马区神经元特异标记蛋白微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)及焦亡神经胶质细胞特异蛋白并计算海马CA1区神经元含量及星形胶质细胞焦亡率;通过Western blot法检测海马区焦亡相关炎性因子白介素(interleukin,IL)-1β、IL-18、磷酸化p38MAPK和总p38MAPK的表达。采用SPSS 21.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验。结果:新物体识别实验结果显示,4组小鼠的新物体识别指数差异有统计学意义(F=50.75,P<0.05)。H组、HI及HIS组小鼠新物体识别指数[(22.7±6.9),(40.1±7.0),(22.5±7.5)]显著低于C组(58.5±11.2),HI组小鼠新物体识别指数高于H组,HIS组小鼠新物体识别指数低于HI组(均P<0.05)。恐惧条件实验显示,4组小鼠僵住时间百分率差异有统计学意义(F=60.54,P<0.05)。H组、HI及HIS组小鼠僵住时间百分率[(21.8±5.0)%,(38.4±7.4)%,(21.3±4.2)%]显著低于C组[(49.1±7.0)%],HI组小鼠僵住时间百分率高于H组,HIS组小鼠僵住时间百分率低于HI组(均P<0.05)。免疫荧光结果显示,H组、HI及HIS组小鼠海马CA1区MAP2荧光强度[(35.3±9.3)%,(63.3±6.1)%,(28.7±10.3)%]低于C组(106.7±19.7)%,而星形胶质细胞焦亡率[(24.5±4.2)%,(9.3±1.5)%,(22.1±3.3%)]高于C组(3.4±2.0)%,HI组小鼠MAP2荧光强度高于H组,星形胶质细胞焦亡率低于H组,HIS组小鼠MAP2荧光强度低于HI组,星形胶质细胞焦亡率高于HI组(均P<0.05)。Western blot结果显示,H组、HI及HIS组小鼠海马组织中IL-1β、IL-18、磷酸化p38MAPK/总p38MAPK比值显著高于C组,HI组小鼠海马组织中IL-1β、IL-18、磷酸化p38MAPK/总p38MAPK比值显著低于H组,HIS组小鼠海马组织中IL-1β、IL-18、磷酸化p38MAPK/总p38MAPK比值显著高于HI组(均P<0.05)。结论:淫羊藿苷能够减轻失血性休克后认知障碍及星形胶质细胞焦亡,其机制可能与抑制磷酸化p38MAPK上调相关。

桃叶珊瑚苷对注意缺陷多动障碍模型小鼠行为及星形胶质细胞过度活化的作用

目的:探讨桃叶珊瑚苷对注意缺陷多动障碍(attention deficit/hyperactivity disorder,ADHD)模型小鼠行为及星形胶质细胞过度活化的作用。方法:清洁级C57BL/6雌性野生型孕鼠12只,采用孕期腹腔注射艾司氯胺酮(15 mg/kg)法建立子代小鼠ADHD模型。子代小鼠按照窝别匹配原则分为对照+生理盐水组、对照+桃叶珊瑚苷组、艾司氯胺酮+生理盐水组和艾司氯胺酮+桃叶珊瑚苷组(每组n=15)。子代小鼠出生后14 d,对照+桃叶珊瑚苷组和艾司氯胺酮+桃叶珊瑚苷组小鼠给予桃叶珊瑚苷(5 mg/kg,1次/d)灌胃,对照+生理盐水组和艾司氯胺酮+生理盐水组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液,连续给灌胃5 d,子代小鼠与母鼠同笼饲养至出生后21 d。子代小鼠出生后21 d,通过旷场实验、高架十字迷宫实验评估子代小鼠行为学指标;免疫荧光法检测小鼠杏仁核区谷氨酸脱羧酶2(glutamic acid decarboxylase 2,GAD2)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,Sholl analysis定量分析星形胶质细胞形态变化。采用GraphPad Prism 9.0.1软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis检验。结果:(1)行为学实验结果显示,4组小鼠旷场实验中总路程以及高架十字迷宫实验中开放臂停留时间均差异有统计学意义(F=236.90,H=39.92,均P<0.001)。艾司氯胺酮+生理盐水组小鼠的运动总路程[(7044±249)mm,(22891±2175)mm,P<0.05]和开放臂停留时间[12.69(9.86,17.24)s,2.72(0.57,3.87)s,P<0.05]均高于对照+生理盐水组。艾司氯胺酮+桃叶珊瑚苷组小鼠的运动总路程[(22891±2175)mm,(8252±839)mm,P<0.05]和开放臂停留时间[12.69(9.86,17.24)s,5.45(1.13,10.99)s,P<0.05]均低于艾司氯胺酮+生理盐水组。(2)免疫荧光结果显示,4组小鼠杏仁核区GAD2、GABA、GFAP荧光强度均差异有统计学意义(F=145.50,50.08,53.83,均P<0.05)。与对照+生理盐水组比较,艾司氯胺酮+生理盐水组小鼠杏仁核区GAD2[(100.00±9.60)%,(24.86±4.14)%,P<0.05]、GABA[(100.00±16.84)%,(25.48±5.70)%,P<0.05]荧光强度均下调,GFAP[(100.00±18.02)%,(223.80±25.85)%,P<0.05]荧光强度上调;与艾司氯胺酮+生理盐水组比较,艾司氯胺酮+桃叶珊瑚苷组小鼠杏仁核区GAD2[(24.86±4.14)%,(56.08±6.55)%,P<0.05]、GABA[(25.48±5.70)%,(52.59±15.74)%,P<0.05]荧光强度上调,GFAP[(223.80±25.85)%,(157.10±22.10)%,P<0.05]荧光强度下调。(3)Sholl analysis结果显示,4组小鼠星形胶质细胞突起与同心圆的交点数目差异有统计学意义(F=12.47,P<0.05)。与对照+生理盐水组比较,艾司氯胺酮+生理盐水组星形胶质细胞突起及突起分支与同心圆交点数目增加[(2.07±0.48)个,(1.67±0.72)个,P<0.05];与艾司氯胺酮+生理盐水组小鼠比较,艾司氯胺酮+桃叶珊瑚苷组星形胶质细胞突起及突起分支与同心圆交点数目减少[(1.20±0.78)个,(2.07±0.48)个,P<0.05]。结论:桃叶珊瑚苷能够改善ADHD模型小鼠多动行为,其机制可能与桃叶珊瑚苷能够抑制小鼠脑杏仁核区星形胶质细胞过度活化相关。

补阳还五汤对缺血性卒中大鼠半暗带脑组织环状RNA表达谱的影响

目的:探讨补阳还五汤对缺血性卒中半暗带脑组织环状RNA(circRNA)表达谱的影响。方法:21只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(2.74 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组7只。以线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注72 h,激光散斑血流仪监测造模情况,行为学检测评价神经功能缺损程度,TTC染色观察脑梗死体积百分比。收集模型组和补阳还五汤组的半暗带样本进行高通量测序和相关生物信息学分析,对表达差异显著的circRNA进行RT-qPCR验证。结果:补阳还五汤组mNSS评分和脑梗死体积百分比均较模型组显著降低(P<0.01)。模型组和补阳还五汤组之间存在71个差异表达的circRNA,生物信息学分析显示与缺血性卒中有关,并对RT-qPCR验证过3个的circRNA构建circRNA-miRNA-mRNA网络。结论:补阳还五汤减轻缺血性卒中的过程中circRNA表达谱发生变化,故circRNA可作为其发挥药效的潜在靶点。