单侧海马损毁诱发双侧齿状回细胞增殖的研究

目的探讨成年大鼠单侧海马锥体细胞被损毁后,海马齿状回(dentategyrus,DG)神经干细胞/前体细胞(neuralstemcells/progenitorcells)原位激活的时间变化规律。方法用海人酸(kainicacid,KA)建立单侧海马损毁模型,用5溴脱氧尿嘧啶核苷(5bromodeoxyuridine,BrdU)标记增殖的细胞,免疫组织化学染色检测损毁后不同时间点损毁侧及对侧海马DG表达BrdU的细胞数。结果空白对照组和各时间点假损毁组双侧海马DG区均可见到少量BrdU阳性细胞,组间无显著性差异(P>0.05);与对照组比较,实验组双侧DGBrdU阳性细胞均于损毁后第3d起明显增多(P<0.01),第5d达高峰(P<0.01),第9d下降至对照组水平;损毁侧阳性细胞数目较对侧略多。结论成年大鼠单侧海马损毁可增强双侧海马DG的神经发生,其机制可能与损毁引起的机体激素水平、神经递质、神经营养因子浓度的改变以及损毁侧局部微环境变化有关。

稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53Tα-突触核蛋白单克隆SH-SY5Y细胞株的建立

目的利用分子克隆技术构建含人野生型(WT)及致病突变A30P(G88C)、A53T(G157A)α-突触核蛋白基因(α-synuclein gene,SNCA)的重组真核表达载体pLentiVENUS-YFP-SNCA,通过慢病毒转染的方法获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53Tα-synuclein单克隆SH-SY5Y细胞株。方法提取红白血病细胞K562细胞总RNA,以RT-PCR法扩增SNCA,SNCA与克隆载体PMD-19T的体外连接(T-A克隆)后进行基因测序,将测序正确者以限制性内切酶酶切后与真核表达载体pLentiVENUS连接,建立野生型重组真核表达载体。取正常SNCA与克隆载体连接体,利用单核苷酸差异引物定点突变法构建SNCA的两个突变型A30P、A53T,经基因测序、酶切与真核表达载体pLentiVENUS连接,建立突变型的重组真核表达载体。以磷酸钙沉淀法转染293T细胞制备的慢病毒转染SH-SY5Y细胞,利用流式细胞仪BD AriaⅢ进行96孔板单细胞分选以获得稳定过表达人野生型及致病突变型A30P、A53Tα-突触核蛋白的单克隆细胞株,并通过倒置荧光显微镜、蛋白免疫印迹、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriotion-polymerase chain reaction,Rt-PCR)、鉴定各单克隆SHSY5Y细胞株是否过表达。结果 Rt-PCR及电泳结果显示所获得目的基因,基因测序结果正确;重组真核表达载体pLentiVENUS-SNCA经限制性内切酶酶切和基因测序证明构建成功。倒置荧光显微镜显示除对照组(未转染组)外,空载体转染组及载体与SNCA重组后转染组均有荧光蛋白表达;但蛋白免疫印迹结果显示载体与正常或突变的SNCA重组后转染组的蛋白含量高于空载体组。RT-PCR结果显示载体与正常或突变的SNCA重组后转染组的细胞RNA表达量高于空载体组。结论利用分子克隆技术和慢病毒转染技术成功建立过表达α-突触核蛋白的WT及A53T、A30P突变型SH-SY5Y单克隆细胞株。

生理学实验教学中引入中医元素的探索

生理学是西医院校医学生的一门专业基础课,生理学实验是生理学教学的重要组成部分。在当下培养复合型医学人才的导向下,文章认为有必要在生理学实验教学中适当引入中医药实验和实操,这不仅有利于医学生从中西医两个不同角度来探索生命活动规律,也有利于在专业课学习的同时进行思政教育,培养大学生的民族文化自信。在生理学实验课上,教师通过人体实操和动物实验的方式,让学生见证中医药的真实疗效,认识到实践在探索生命活动规律过程中的重要性以及中医在方法论上的独特之处,文章也对可能遇到的问题进行了分析。

新医科背景下医学机能学虚拟教研室建设的探索

新医科背景下虚拟教研室的建设是落实国家“双一流”专业建设目标、提升高校教学水平和人才培养质量的重要举措。苏州大学医学机能学团队积极响应国家需要与时代呼唤,与贵州医科大学和右江民族医学院联合申报跨校医学机能学虚拟教研室建设点,成为首批江苏省虚拟教研室建设培育点。教研室结合新医科人才培养要求,对教学理念、课程体系、教学内容和教学方法进行重构,为新医科背景下医学基层教学组织的构建与运行提供了有益参考。

灯笼草镇痛作用及其机理的研究

目的 :观察灯笼草的镇痛作用。方法 :采用扭体法、电刺激鼠尾 嘶叫法、钾离子透入法和辐射热 缩腿法等行为学指标以及丘脑束旁核神经元对伤害性刺激的放电反应的电生理指标。结果 :灯笼草能剂量依赖地提高大鼠电刺激鼠尾 嘶叫法的痛阈 ,剂量依赖地抑制醋酸引起的小鼠扭体反应 ,对炎症性痛敏及神经源性痛敏灯笼草也有镇痛作用 ,灯笼草还能明显抑制丘脑束旁核神经元对伤害性刺激的放电反应。纳洛酮能翻转灯笼草的镇痛作用 ,反复给予灯笼草能产生耐受 ,但与吗啡镇痛之间不存在交叉耐受。结论 :灯笼草具有镇痛作用 ,其镇痛作用可能涉及中枢阿片受体。

血清对骨髓基质干细胞分化的影响

目的 探讨血清对骨髓基质干细胞 (MSCs)向神经元样细胞分化的影响。方法 采用percoll液分离大鼠MSCs,体外扩增 ,单独应用BHA或BHA加血清定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。结果 BHA诱导 1 5h后加入血清 ,细胞的形态不再分化为神经元 ,而是逐渐变回原来的MSCs样形态 ,加入血清后 2d所有细胞均恢复MSCs形态。

人骨髓基质干细胞向神经元分化的实验方法改进

目的 改进人骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化的方法 ,使诱导分化后的神经元样细胞存活时间延长 ,为其将来可能的临床应用提供理论基础。方法 采用Percoll液分离成人骨髓基质干细胞 (hBMSCs) ,体外扩增 ,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达 ,应用丁羟茴醚 (BHA)和二甲基亚砜 (DMSO) ,NT 3和PDGF定向诱导hBMSCs分化为神经元样细胞。结果 hBMSCs在体外扩增后 ,流式细胞检测结果显示CD2 9、CD4 4表达阳性 ,CD11b、CD4 5表达阴性 ;加入诱导剂一定时间后 ,细胞形态发生改变 ,同时神经丝蛋白表达阳性 ,胶质纤维酸性蛋白表达阳性。结论 成人骨髓基质干细胞在体外可分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞 ,而且较单独使用BHA +DMSO诱导的方法延长了诱导后的细胞存活时间。

灯笼草消炎作用的实验观察

目的 观察灯笼草的消炎作用。方法 对用完全弗氏佐剂致炎后的急性期和慢性期佐剂性关节炎大鼠 ,予 4 .2 g/kg灯笼草灌胃给药 1周后分别测定其致炎后爪的局部周长和厚度的改变。 结果 灯笼草均能不同程度地减轻急性期和慢性期佐剂性关节炎大鼠致炎后爪的局部肿胀。

脑脊液对骨髓基质细胞作用的动态观察

目的 动态观察脑脊液对骨髓基质细胞向神经元方向分化的作用。方法 采用Percoll液分离大鼠骨髓基质细胞，体外扩增。当第2或第3代细胞生长达60％～70％融合时，加入不同病人脑脊液，分别于不同时间观察其形态学改变，取诱导后的细胞作免疫细胞化学鉴定。结果 在颅咽管病人脑脊液中骨髓基质细胞的分化速度较快，且发生政变的程度较大；而在脑外伤积水的病人脑脊液中骨髓基质细胞的分化速度相对较慢，且发生改变的细胞数较前者少。免疫细胞化学染色NSE呈弱阳性，NF呈弱阳性。结论 脑脊液可诱导骨髓基质细胞向神经元方向分化。

金课视角下神经生物学教学改革初探

"打造金课,淘汰水课"是教育部提出的明确要求,也是目前高校每门课程的建设目标。神经生物学是苏州大学临床医学本科生的专业基础课。在当下打造金课的导向下,苏州大学生理学与神经生物学系结合神经生物学的教学实际情况及存在的问题,研究和探索神经生物学课程改革的合理路径,既符合打造金课的新要求,又有利于提高医学人才的培养质量。文章结合金课建设标准,着重从学科教材、教学内容、教学方法、师资等方面,对神经生物学课程改革进行探索,以提升课程教学质量。

PBL教学法在心身医学理论教学过程中的应用探讨

目的:探讨以问题为基础的学习(PBL)在心身医学理论教学过程中的应用。方法:对苏州大学医学部临床专业五年制心理学专业2005-2007级80名学生的心身医学部分内容实施PBL教学,采用学生汇报学习成果和发放调查问卷的方式进行教学效果评价。结果:75%以上的学生认为PBL教学能激发学习兴趣、能提高沟通能力、提高分析问题解决问题的能力、提高检索文献组织分析医学信息的能力、提高自我学习能力。结论:PBL教学提高了学生的学习积极性和自我学习能力。

强制运动促进成年大鼠海马齿状回神经发生并提高学习能力(英文)

为了探讨强制运动对成年大鼠海马齿状回(dentategyrus,DG)神经发生的影响,强制大鼠在马达驱动的转轮中跑步,用5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记增殖细胞,巢蛋白(neuroepthelialstemcellprotein,nestin)标记神经干细胞/前体细胞,然后用免疫细胞化学技术检测大鼠DG中BrdU及nestin阳性细胞。为了解强制运动后DG增殖细胞的功能意义,采用Y-迷宫检测大鼠的学习能力。结果表明,强制运动组DG中BrdU及nestin阳性细胞数均明显多于对照组(P<0.05);强制运动对DG神经发生的效应有强度依赖性。Y-迷宫检测结果显示,强制运动能明显改善大鼠的学习能力。结果提示,在转轮中进行强制跑步能促进成年大鼠DG的神经发生,并改善学习能力。

内吗啡肽在小鼠树突状细胞的诱导表达

目的研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在小鼠树突状细胞的表达。方法从7～8周龄的C57BL/6J小鼠骨髓提取骨髓前体细胞培养,经CD11c(树突状细胞的特异性标记)免疫磁珠分选,获得纯化的树突状细胞。流式细胞仪分析表明,CD11c阳性细胞纯度达95%以上。免疫荧光染色研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在树突状细胞的表达;酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA)的方法,检测培养树突状细胞上清液中的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2的含量。结果免疫荧光染色表明,活化的树突状细胞内可分泌内吗啡肽-1和内吗啡肽-2;酶免疫测定检测结果表明,不同的Toll样受体(toll like receptor,TLR)配体活化树突状细胞促使分泌不同浓度的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2。结论活化的树突状细胞可诱导内吗啡肽的表达。

挂金灯镇痛作用的实验观察

目的 运用多种测痛方法观察挂金灯的镇痛作用。方法 5 0 0mg/kg或 80 0mg/kg的挂金灯在灌胃后30min、6 0min或 90min ,分别用扭体法、热板法、电刺激鼠尾 -嘶叫法 ,观察其对痛反应的影响。结果 挂金灯在灌胃后 6 0min能抑制小鼠的扭体反应 ,还能显著延长小鼠舔爪的潜伏期和抑制大鼠的嘶叫反应。 1mg/kg的纳洛酮能翻转挂金灯对大鼠的镇痛作用。

新生大鼠神经干细胞的体外分离和培养

目的改进大鼠神经干细胞的分离和培养方法。方法用出生1～3d的新生大鼠,取脑用刀片剁碎和吸管吹打的机械分离法代替酶消化法。用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞、神经元和星形胶质细胞。结果用机械分离法从新生大鼠脑组织分离神经干细胞的获得率较高,并培养出较多的神经球,还能分化成神经元和星形胶质细胞。结论该方法简便,能得到较多的神经球,细胞获得率也较高。

人骨髓间充质干细胞的分离培养和向神经细胞分化的研究

目的 分离骨髓后培养人骨髓间充质干细胞 (hMSCs) ,进行体外传代扩增 ,并探索体外诱导分化为神经元样细胞的方法。方法 抽取人骨髓血 ,percoll paque液 (1 0 73g/ml)分离 ,DMEM/2 0 %FCS培养传代 ,至第 3～ 5代时加入巯基乙醇 (BME) ,观察hMSCs分化为神经元样细胞的形态学变化。结果 hMSCs在体外可以实现数目扩增 ,在特定诱导剂的作用下向神经元样细胞分化。结论 采用少量骨髓样本 ,经培养获得充足的细胞量 ,满足定向诱导和细胞移植的需要。

灵芝和针刺对小鼠学习记忆的影响

目的 探讨灵芝和 (或 )针刺对小鼠学习记忆的影响。方法 采用跳台法和Y -迷宫法测定小鼠的学习记忆能力。给小鼠 12 0mg/ (kg·d)灵芝灌胃和 (或 )针刺连续 7d。 结果 与对照组相比较 ,灵芝能提高小鼠的学习记忆能力 ;灵芝 +针刺有一定的协同作用。结论 灵芝和 (或 )

BrdU免疫组织化学染色方法的改进(漂片法)

目的改进用漂片法进行BrdU免疫组织化学染色时的封闭液,以减少组织切片破损。方法用5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记大鼠踏转轮运动中所引起增殖细胞,通过ABC免疫组织化学方法染色。在染色过程中,比较不同的封闭液(羊血清、牛血清白蛋白、胰酶抑制剂)减少脑片破损的效果。结果踏转轮运动可使大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数明显多于对照组。加入不同的封闭液后,组织片破损率明显下降,尤其是加入牛血清白蛋白和胰酶抑制剂组,但胰酶抑制剂组有非特异性染色。结论牛血清白蛋白是较理想的封闭液。

槲皮素对血管性痴呆大鼠脑内Fos蛋白表达的影响

目的 观察槲皮素对血管性痴呆大鼠脑内c-fos表达及踏转轮运动的影响。方法 在大鼠连续灌胃给槲皮素 (2 0 0mg/kg)或同剂量的配药液 14天后 ,采用四血管闭塞法构建大鼠血管性痴呆 (vesseldementia ,VD)模型 ,进行踏转运动及Fos免疫组织化学观察。结果 与假手术组大鼠相比 ,VD大鼠踏转轮运动量显著降低 :VD模型构建 3h后 ,皮层 ,边缘系统及下丘脑的神经核团Fos表达显著增多。槲皮素使VD大鼠踏转轮运动明显增多 ,上述脑区Fos表达显著减少。结论 血管性痴呆对脑部造成一定程度的损伤 ,并减少大鼠的运动能力。而槲皮素则可以减轻血管性痴呆对脑部的损伤 ,增强运动量 。