内毒素的测定与临床意义

内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁中的成分 ,既可对机体产生许多致病作用 ,又可对机体发挥有益的生物学活性。本文对其主要检测方法如比色法、凝胶法、浊度法、酶联免疫吸附法、流式细胞术法等以及内毒素的检测对消化系统疾病、细菌感染性疾病。

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。

逆转录病毒滴度测定新方法的实验研究

[目的]研究一种简便、快速的能获取较高病毒滴度的体外培养方法。[方法]用质脂体转移法将逆转录病毒载体pLXIn转染到包装细胞PA317中,用G418筛选出抗性克隆,扩大培养,再收集上清,并测定病毒滴度。比较不同方法产生病毒的多少,为提高病毒滴度而进一步感染靶细胞奠定良好的实验基础。[结果]改良后的新方法(低温32℃、无CO2条件以及反复冻融法)较常规方法(37℃、5%CO2)可提高病毒滴度至少10倍。PTs,PTas和PLXIn组病毒颗粒数分别提高到1.3×105CFU/mL、1.2×105CFU/mL、1.5×105CFU/mL。[结论]逆转录病毒滴度测定新方法简便、快捷,能获取较高病毒滴度。

TIMP-1对人卵巢癌A_(2780)细胞生长的抑制作用

[目的]观察基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达水平对人卵巢癌细胞生长的影响。[方法]采用质脂体法将正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达外源基因的克隆并用RT-PCR鉴定后扩大培养。以未转染组细胞作为对照,分别用直接计数法、四氮唑蓝(MTT)比色法、平皿克隆形成试验测定3组细胞的增殖活性,利用流式细胞术检测肿瘤细胞周期与凋亡的变化。[结果]与对照组相比,转染TIMP-1对卵巢癌细胞A2780呈现增殖抑制效应:生长曲线示增殖速度减慢(P<0.01);在平皿上的集落形成能力下降(38±3.05)%;MTT法结果显示增殖抑制率增加(P<0.01);细胞周期显示G0/G1期比例增加(58.41±0.94)%。转染反义TIMP-1对卵巢癌细胞A2780呈现促增殖效应:生长曲线示增殖速度加快(P<0.01);在平皿上的集落形成能力增强(59±2.08)%;MTT显示增殖抑制率减小(P<0.01);细胞周期显示G0/G1期比例减小(44.82±0.31)%。[结论]体外转染TIMP-1基因提高TIMP-1的表达可抑制卵巢癌细胞的增殖,TIMP-1可能成为卵巢癌基因治疗的一个新靶点。

TIMP-1基因体外稳定转染对人卵巢癌A_(2780)细胞周期与增殖的影响

目的:探讨正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因对人卵巢癌细胞周期及增殖的影响。方法:将重组质粒正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达细胞株并扩增培养,采用MTT细胞计数法检测肿瘤细胞生长增殖率,流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果:经15～20 dG418筛选得到稳定表达细胞株,重组质粒TIMP-1稳定转染正义(PTs)组A2780细胞的增殖可明显受到抑制,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞。而反义(PTas)组细胞与之相反。结论:提示体外转染TIMP-1基因可使A2780细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖。可为临床基因治疗及相关基因药物研究提供实验依据。

糖化血红蛋白检测在糖尿病诊治中的临床价值

糖尿病是一种很常见的内分泌代谢疾病,其病因和发病机制尚未完全明确,然而它引起的并发症严重危害人们的身体健康。目前糖尿病已经成为威胁人类生命健康的第三大慢性病,不仅发病率高,且呈增长趋势,故糖尿病的早期发现和早期诊断刻不容缓。由于早期糖尿病起病隐匿,缺乏或无典型的临床症状,监测和控制血糖水平对糖尿病及其并发症的诊治非常关键。

免疫印迹法检测胰岛自身抗体系列在糖尿病分型诊断中的应用

目的探讨免疫印迹法检测胰岛自身抗体系列——抗谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、抗胰岛细胞抗体(ICA)、抗胰岛素自身抗体(IAA)在糖尿病分型诊断中的应用及临床意义。方法应用免疫印迹法联合检测187例糖尿病患者及30例健康体检者血清中的GADA、ICA、IAA。结果应用免疫印迹法检测T1DM组中GADA、ICA、IAA阳性率分别为65.22%、53.62%和28.99%,显著高于T2DM组(P<0.05)及正常对照组(P<0.05);T2DM组GADA、ICA、IAA阳性率分别为12.71%、11.02%和5.93%,与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05)。结论免疫印迹法检测胰岛自身抗体系列对于临床糖尿病的诊断及分型具有重要的临床应用价值。

糖尿病患者血清GAD-Ab、ICA、IAA联合检测的临床意义

[目的 ]探讨糖尿病患者血清谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD -Ab)、胰岛细胞抗体 (ICA)和胰岛素自身抗体 (IAA)的联合检测在临床中的重要意义。 [方法 ]用ELISA法测定 4 3例 1型糖尿病 (ID DM )患者、5 5例 2型糖尿病 (NIDDM )患者和 5 0例正常人血清中的GAD -Ab、ICA、IAA。 [结果 ]1型糖尿病组中GAD -Ab、ICA、IAA的阳性率分别为 76 .7%、37.2 %、2 5 .6 % ;2型糖尿病组中 3种抗体的阳性率分别为 9.1 %、1 0 .9%、1 0 .9% ;正常对照组中GAD -Ab、ICA、IAA均为阴性。 1型糖尿病患者的GAD -Ab、ICA、IAA阳性率都高于 2型糖尿病患者 (P <0 .0 5 )及正常对照组 (P<0 .0 5 )。 [结论 ](1 )测定GAD -Ab在糖尿病分型及预测中优于ICA和IAA。 (2 )GAD -Ab、ICA、IAA的联合检测是鉴别 1型糖尿病和 2型糖尿病的重要血清学指标。 (3)在预测 1型糖尿病发病及早期诊断中 ,GAD -Ab、ICA、IAA的联合检测可提高检出阳性率 ,避免漏诊 。

流式细胞术在159例急性白血病免疫分型中的应用

目的探讨急性白血病免疫分型的特点及其临床意义。方法利用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析。结果(1)在119例AML患者中髓系相关抗原CD13(91.59%)、CD117(86.97%)和CD33(84.03%)阳性表达率最高,还有14.28%的AML患者伴有淋系抗原的表达,主要为CD7(14.28%)和CD19(1.68%)。29例B-ALL患者,CD19和HLA-DR全部阳性(100%),其次为CD34(92.03%)、CD22(62.07%)。11例T-ALL患者,CD7表达的阳性率最高(100%),CD3(72.73%)和CD2(63.64%)次之。(2)AML患者中,除大多数AML-M3患者CD34和HLA-DR为阴性表达外,其他亚型患者CD13、CD117、CD33、CD34和HLA-DR均为高表达。结论在流式细胞仪上采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术分析,使得免疫分型的结果更为可靠。

三色流式细胞术分析急性淋巴细胞白血病免疫分型

本研究探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)各亚型免疫分型的特点及其临床意义。利用CD45/SSC双参数散点图设门方法,对40例ALL进行三色流式细胞术免疫表型分析。结果显示:采用CD45/SSC双参数散点图设门法能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和原始细胞群。40例ALL中B-ALL26例,T-ALL11例,HAL3例。26例B-ALL中CD19全部(100%)阳性表达,而11例T-ALL中CD7表达的阳性率最高(100%)。伴髓系抗原表达的ALL(My+ALL)比较常见,本实验中共有12例,约达到30.0%,经常累及B淋巴系统(占My+ALL的75.0%);在髓系抗原中以CD13表达阳性率最高;有3例患者为急性杂合性白血病(HAL),发病率为7.5%,且全部为髓系、B系共同表达,其中有2例患者CD34阳性表达,占66.67%。结论:在流式细胞仪上采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术分析,能排除正常细胞的干扰,使免疫分型的结果更为准确、可靠。

回春生治疗肝硬化双盲法临床疗效观察

回春生是大连医学院微生态学研究室研制的活菌制剂。给肝硬化患者口服,进行临床双盲观察。结果表明,对实验组(20例)和对照组(20例)进行比较,LLT(p<0.005),A/G(p<0.05),TTT(p<0.005)两组具有显著性差异。提示双歧杆菌制剂对肝硬化患者具有辅助治疗作用。

慢性淋巴细胞白血病免疫表型及凋亡相关蛋白分析

目的探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)免疫表型和凋亡相关蛋白表达特征及其临床意义。方法应用CD45/SSC设门方案,通过三色流式细胞术对150例CLL患者、105例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者骨髓或外周血进行免疫分型。结果 150例CLL患者均高表达CD19;HLA-DR、CD20、CD5、CD22、CD38、CD23阳性率依次为96.67%、95.33%、84.67%、86.67%、40.67%、60.66%;CD10、cCD79a、CD3、CD25、CD34、ZAP70、FMC7阳性率较低,依次为3.33%、15.33%、4.67%、1.33%、3.33%、11.43%、8.67%。其他抗体均无表达;与B-ALL患者相比,CLL患者CD5、CD20阳性率升高(P<0.05),CD10、CD34、CD22、Ccd79a阳性率降低(P<0.05),CD19、HLA-DR表达率无统计学差异(P>0.05)。CLL患者凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax阳性率分别为74.67%和7.33%。结论 CD5、CD20、CD19是CLL特异性免疫表型,ZAP70、CD38可作为预后判断指标,CLL细胞Bcl-2高表达、Bax低表达,在疾病发生、发展中意义重大。

晚期氧化蛋白产物通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路促进ECV304细胞基质细胞衍生因子1α的表达

目的观察晚期氧化蛋白产物对ECV304细胞基质细胞衍生因子1α表达的影响,并探讨其作用机制。方法牛血清白蛋白与次氯酸钠等量混合体外制备晚期氧化蛋白产物,RT-PCR法检测ECV304细胞基质细胞衍生因子1αmRNA的表达,Western Blotting法测定基质细胞衍生因子1α以及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白水平,以p38MAPK特异性阻断剂SB203580进行阻断实验,酶联免疫吸附法测定上清液中基质细胞衍生因子1α浓度。结果与对照组比较,200μmol/L晚期氧化蛋白产物处理ECV304细胞2h后基质细胞衍生因子1αmRNA及蛋白表达量显著升高(P均<0.05);基质细胞衍生因子1αmRNA表达量6h达高峰(P<0.01),之后逐渐下降,24h时与对照组比较差异无显著性;随时间的推移基质细胞衍生因子1α蛋白表达量逐渐升高,24h表达量最高(P<0.01)。晚期氧化蛋白产物作用15min后p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平明显增强(P<0.05),不同浓度(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)SB203580降低了晚期氧化蛋白产物刺激下基质细胞衍生因子1α蛋白的表达(分别为618.85±60.12、500.98±69.47和359.97±59.81,P<0.05或0.01)。结论晚期氧化蛋白产物可诱导ECV304细胞基质细胞衍生因子1α表达,p38MAPK通路是介导这一作用的重要途径之一。

阻断核心岩藻糖基化修饰抑制肾小管上皮细胞的间充质转化

目的:探讨阻抑核心岩藻糖基化修饰对肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)过程的影响。方法:利用转化生长因子β1(TGF-β1)建立肾小管上皮HK-2细胞EMT的模型,应用RNAi技术沉默HK-2细胞的α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因表达,光镜下观察FUT8基因沉默后细胞形态变化,免疫印迹及免疫细胞化学方法测定细胞表型标记物蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)的表达变化,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:TGF-β1孵育48 h后,HK-2细胞失去原有的上皮细胞形态,呈现纤维细胞形态,纤维细胞表型标记蛋白α-SMA、FSP-1及N-cad-herin表达明显升高,而上皮细胞表型标记蛋白E-cadherin表达明显下降,同时伴有FUT8基因表达上调,细胞凋亡增加,而提前转染FUT8 siRNA能明显减弱上述这些反应。结论:FUT8催化的核心岩藻糖基化修饰参与HK-2细胞的EMT过程;阻断核心岩藻糖基化修饰,能有效阻断肾小管上皮细胞的EMT过程。

替吉奥胶囊治疗晚期胃癌的临床研究

目的观察替吉奥胶囊(S-1)单药治疗晚期胃癌的近期疗效和不良反应。方法将39例晚期胃癌患者采用完全随机方法分为两组。试验组(n=20):采用替吉奥胶囊(80~120 mg/d),分早、晚2次餐后口服,d l^28,休息14 d为1周期,连用2周期后评价疗效。对照组(n=19):采用DCF方案治疗,即多西紫杉醇75 mg/m2,d l静脉滴注;顺铂75 mg/m2,d l静脉滴注;氟尿嘧啶300 mg/m2,d 1~5静脉滴注;亚叶酸钙200 mg/m2,d 1~5静脉滴注。每3周重复。2周期后评价疗效。结果试验组与对照组的有效率(35.0%与31.6%)和临床获益率(65%与57.9%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);试验组不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论 S-1治疗晚期胃癌疗效确切,安全。

流式细胞术检测多发性骨髓瘤免疫表型的研究

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞的免疫表型特征,为临床提供早期诊断、治疗及预后判断的依据。方法采用多色流式细胞术,通过CD45/SSC设门的方法。分析118例MM骨髓标本的免疫表型,并选取15例正常人浆细胞作为对照组。结果 118例MM患者中CD138、CD38、CD117、CD56、CD33、CD13、CD9、Lambda、Kappa、HLA-DR的阳性率依次为91.53%、94.92%、44.07%、72.03%、25.42%、17.80%、29.66%、39.83%、30.51%和62.71%,其他抗体阳性率极低或均不表达。结论流式细胞术免疫分型是检测MM细胞的有效方法,MM细胞的免疫分型有助于MM的准确诊断及预后监测。

肾小球系膜细胞金属蛋白酶1组织抑制剂对血管内皮生长因子及转化生长因子β_1表达的影响

目的:探讨高糖(葡萄糖25mmol/L)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)对血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:用高糖培养基体外培养未转染及分别用pcDNA3空载体、人反义TIMP-1基因重组真核表达载体转染的RMC24h,将细胞分为未转染组、空载体组及反义组,并设正常培养条件下的RMC作为正常对照组。RT-PCR检测各组RMC TIMP-1、VEGF及TGF-β1mRNA的表达。Western印迹检测胞质中TIMP-1、VEGF及TGF-β1蛋白的表达。免疫荧光检测各组RMC胞质中VEGF的表达。结果:高糖培养条件下未转染组及空载体组RMC大鼠TIMP-1、VEGF及TGF-β1mRNA表达均较对照组明显增加(P<0.01),而此两组间相应指标表达差异无统计学意义;反义组大鼠TIMP-1、VEGF mRNA表达较未转染组显著降低(P<0.01),而TGF-β1 mRNA表达则无变化。Western印迹也得到相同的结果。免疫荧光检测发现,未转染组及空载体组VEGF荧光表达较对照组显著增强,反义组荧光则较未转染组明显减弱。结论:高糖可促进RMC TIMP-1、VEGF及TGF-β1表达增加。在高糖条件下,TIMP-1可能位于VEGF上游,促进其表达;而TGF-β1表达并不受TIMP-1调控,高糖可能通过其他途径上调其表达。

大黄素对豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动的影响及相关机制

目的:观察大黄素(emodin)对豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动的影响及相关机制.方法:用四道生理记录仪记录豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动;用膜片钳记录豚鼠胃窦环形肌细胞上L型钙电流,观察L型钙电流在大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动中的作用.结果:大黄素在一定的浓度范围内增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动并呈剂量依赖性,给予5、10、15、20、25、50mol/L的大黄素后豚鼠胃窦环形肌自发性收缩的幅度分别为对照组的108.2%±6.2%、150.6%±8.3%、198.2%±7.6%、200.2%±8.6%、160.0%±6.8%、81.2%±6.2%.预先加入10mol/L的硝苯地平,完全阻断大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动.10mol/L和20mol/L的大黄素明显增强豚鼠胃窦环形肌细胞上钡电流(IBa),用10mol/L的大黄素灌流开始后200s左右时IBa电流峰值变化趋于稳定,20mol/L的大黄素灌流开始后170s左右时IBa电流峰值变化趋于稳定.加药后IBa电流峰值分别增加到对照组电流最大值的137.88%±5.79%和158.69%±6.11%.结论:大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩,细胞外钙通过L型钙通道内流入细胞内引起平滑肌收缩是大黄素促进豚鼠胃窦环形肌自发性收缩的作用机制之一.

抗核糖体P蛋白在神经精神病性系统性红斑狼疮的临床诊断价值

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythemato-是可累及全身任何脏器的自身免疫性疾病，侵犯中枢神经系统可表现为各种各样的神经、精神症状，此类型患者被称作神经精神病性系统性红斑狼疮（neuropsychiatric SLE, NPSLE），是SLE病情严重的表现，也是导致SLE患者死亡的主要原因之一，约17％-75％的SLE患者在病程中出现中枢或周围神经系统受累，所以早期发现系统性红斑狼疮的神经精神病损尤为关键。本研究利用ELISA监测SLE患者Rib—P，探讨Rib-P蛋白抗体对早期发现SLE神经狼疮的诊断价值。

血清TK1、CEA及CA199水平与结肠癌患者预后的关系

【目的】探讨血清胸苷激酶1(TK1)、癌胚抗原(CEA)及CA199表达水平的变化与结肠癌患者预后的关系.【方法】检测本院确诊并住院治疗的结肠癌确诊患者(结肠癌组)85例,结肠息肉患者78例及健康体检者80例的血清TK1、CEA及CA199表达水平并进行比较.同时检测结肠癌患者在出院前、术后6个月、术后12个月血清TK1、CEA及CA199的含量.【结果】结肠癌组患者血清TK1、CEA及CA199水平均高于结肠息肉组和对照组,且差异均有显著性(P<0.05);结肠息肉组血清CEA水平高于对照组(P<0.05),TK1和CA199水平虽高于对照组,但差异均无显著性(P>0.05).结肠癌复发患者的血清TK1、CEA及CA199水平均高于术前相关参数的水平,且差异有显著性(P<0.05).【结论】血清TK1、CEA及CA199的表达水平对结肠癌的发生发展有明显的关系,可作为预后随访的指标进行快速、便捷、准确的测定.