低抗凝肝素寡糖的制备、结构表征及免疫活性评价

以猪肠黏膜来源低抗凝肝素为原料,采用苄酯碱水解法制备了寡糖.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、高效凝胶渗透色谱（HPGPC）-多角激光光散射法（MALLs）联用、核磁共振波谱（NMR）和液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术对所制备寡糖的分子量分布及化学结构进行了表征.以该寡糖对活化X因子（FXa）及人凝血酶（FⅡa）活性的抑制作用评价了其抗凝血活性,并通过测定其对RAW264.7巨噬细胞吞噬能力及NO释放量的影响评价其免疫活性.结果表明,所制备寡糖的聚合度分布于2~22之间,平均分子质量为5300,无明显的抗凝血活性,但具有显著的免疫增强活性.

不同提取方法对褐藻糖胶理化性质的影响

目的比较不同提取方法对褐藻糖胶理化性质的影响。方法分别采用稀盐酸法和氯化钙从6种褐藻粗多糖中获得12种褐藻糖胶(Fucoidan),并进一步对其理化性质进行分析和比较。采用高效液相色谱法(HPLC)测定其单糖组成,离子色谱法(IC)测定其硫酸基含量,Folin-酚法测定其粗蛋白含量,高效凝胶渗透色谱与多角度激光散射仪联用法(HPGPC-MALLS)测定其绝对分子量。结果稀盐酸法提取褐藻糖胶的得率显著高于氯化钙法,但所得褐藻糖胶的硫酸基含量和绝对分子量都明显降低。结论稀盐酸法提取褐藻糖胶造成糖链断裂及硫酸基脱落,破坏褐藻糖胶的结构,因此采用氯化钙法更适合褐藻糖胶的提取。

青钱柳叶多糖的结构表征及其抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

目的从青钱柳Cyclocarya paliurus叶中提取分离多糖,对其结构进行表征,并评价其α-葡萄糖苷酶抑制活性。方法采用水提醇沉法制备粗多糖,经732阳离子交换树脂脱蛋白,50%乙醇沉淀,得青钱柳叶多糖CP50。利用高效凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射联用法(HPGPC-MALLS)测定CP50的相对分子质量,采用PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)测定单糖组成。采用甲基化分析、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、核磁共振氢谱(1H-NMR)对CP50的结构进行表征。采用PNPG法对CP50抑制α-葡萄糖苷酶活性进行评价。结果 CP50的相对分子质量为59 000,由半乳糖醛酸(GalA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、木糖(Xyl)、鼠李糖(Rha)和葡萄糖醛酸(Glc A)8种单糖组成,摩尔比为29.1∶25.6∶16.5∶9.3∶6.7∶6.1∶4.1∶2.6,分子中主要含有→4)GalA(1→、→4)Glc(1→和→4)Gal(1→糖苷键,在半乳糖的C6位存在分支结构。CP50能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,半数抑制浓度(IC50)为3.3μg/m L,远小于抗2型糖尿病药物阿卡波糖(193.6μg/m L),属于混合非竞争性抑制。结论 CP50单糖种类多、结构复杂,属于果胶类酸性多糖,且具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,具有潜在的开发应用价值。

酸性多糖中糖醛酸还原方法的改良

目的对酸性多糖中糖醛酸羧基还原条件进行改良并确定最佳还原条件。方法将钠型和氢型酸性多糖样品分别用不同缓冲液体系溶解,采用碳二亚胺-硼氢化钠(EDC-NaBH4)法还原,用高效液相色谱(HPLC)法测定糖醛酸还原率。结果氢型多糖中的糖醛酸比钠型多糖更容易还原;在改良的75%四氢呋喃-0.1mol·L-12-吗啉乙磺酸(THF-MES)缓冲体系中,氢型多糖中糖醛酸一次还原率达98.1%。结论该改良方法明显提高酸性多糖中糖醛酸还原率,且适用于甘露糖醛酸、透明质酸、低分子肝素及岩藻糖硫酸酯中糖醛酸的还原。

拟小叶喇叭藻和喇叭藻多糖对α-葡萄糖苷酶活性的影响

目的研究喇叭藻多糖对α-葡萄糖苷酶抑制活性。方法采用热水提取从拟小叶喇叭藻(Turbinaria conoides)和喇叭藻(Turbinaria ornata)中获得水溶性多糖TCP和TOP,并采用硫酸-苯酚法测定其总糖含量;用改良的咔唑法测定其糖醛酸含量;用Folin-酚法(Lowry法)测定其蛋白含量;用高效液相色谱法(HPLC)测定其单糖组成;用离子色谱法(IC)测定其硫酸根含量;用高效凝胶渗透色谱与多角度激光散射仪联用法(HPGPC-MALLS)测定其平均分子量;用PNPG显色法测定TCP和TOP对α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果 TCP和TOP具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,IC50值分别为204.1和113.2μg·mL^(-1),效果优于阿卡波糖(220.3μg·mL^(-1))。初步动力学研究表明其均为混合型抑制方式。结论热水提取自拟小叶喇叭藻和喇叭藻的多糖具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

伊拉兔肺中硫酸软骨素C的分离纯化及二糖组成分析

目的:从伊拉兔肺中提取分离硫酸软骨素C(chondroitin sulfate C,CSC),并对其进行二糖组成分析。方法:采用丙酮、氯仿-甲醇(2∶1)对兔肺进行脱脂,利用木瓜蛋白酶对脱脂粉进行酶解。提取的粗品经75%乙醇沉淀,氯代十六烷基吡啶(CPC)将其中的酸性多糖富集获得总糖胺聚糖TFH。采用Q-Sepharose Fast Flow树脂对TFH分级纯化获得TF-C。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生反相HPLC法分析单糖组成,利用硫酸软骨素酶ABC降解,SAX-HPLC法分析二糖组成。结果:所得TF-C不含蛋白质,主要由葡萄糖醛酸(Glc A)和氨基半乳糖(Gal N)组成,二糖组成以不饱和△UA-Gal NAc6S为主,含有少量的△UA-GalNAc4S。结论:首次从伊拉兔肺中分离获得低硫酸化高纯度CSC,为伊拉兔肺高值化产品的开发和利用提供了理论依据。

1种多棘海盘车内脏多糖的提取分离和结构表征

目的从多棘海盘车(Asterias amurensis)内脏中提取、分离纯化多糖,并对其基本理化性质和结构进行表征。方法采用沸水提取与酶解联用的方法从多棘海盘车内脏脱脂粉中提取粗多糖;采用Q Sepharose FF强阴离子交换和Sephacryl S-100凝胶渗透色谱对粗多糖进行分离纯化;采用硫酸-苯酚法、Folin-酚法、高效凝胶渗透色谱-十八角激光散射仪(HPGPC-MALLS)和高效液相色谱(HPLC)分别进行总糖含量,蛋白含量,分子量和单糖组成进行分析;采用甲基化、红外光谱(IR)、气质联用(GC/MS)和一维、二维核磁共振波谱(NMR)法对纯化多糖结构进行表征。结果从多棘海盘车内脏中提取粗多糖的收率为3.3%。经过离子交换和分子排阻色谱分离纯化,得到1种分子量均一的多糖组分F2-A,该多糖主要由葡萄糖(Glc)组成,其糖含量为97.6%,分子量为270 8kDa,是一种以α-(1(4)-Glc为主链并含有少量β-(1(3,4)分支的海星内脏来源葡聚糖。结论从多棘海盘车内脏中纯化得到1种高分子量、结构独特的葡聚糖,为将来从事其结构和生物活性关系的研究提供了有用信息。