阿托伐他汀钙对甲状腺功能减退大鼠甲状腺功能、免疫应答及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对甲状腺功能减退大鼠甲状腺功能、免疫应答及c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路的影响。方法将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组(control组)、甲状腺功能减退组(PTU组)以及阿托伐他汀钙治疗组(ACT组),每组10只。PTU组及ACT组大鼠每天颈背皮下注射PTU,连续28 d;control组每只大鼠皮下注射0.3 mL生理盐水代替PTU。PTU处理2周后,ACT组大鼠灌胃阿托伐他汀钙生理盐水溶液3 mL(含阿托伐他汀钙5 mg/kg),每天给药1次;对照组按相同方法灌胃等量生理盐水。每周测量大鼠体质量、进食及饮水量的变化。通过组织病理切片观察各组大鼠甲状腺组织病理变化。酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IFN-γ、IL-10、Foxp3和IL-4的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-JNK/JNK和p-p38/p38 MAPK水平。结果与control相比,PTU诱导的甲状腺功能减退大鼠体质量降低,食物和水消耗减少,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗2周后,PTU大鼠体质量损失受到抑制,食物和水的消耗改善,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙可提高甲状腺功能减退大鼠血清T3、T4水平,降低血清TSH水平,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗可减轻PTU诱导的滤泡细胞增生及相关肥厚变化等组织病理学改变,增加卵泡大小,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗后增加了PTU大鼠的脾脏质量,降低了甲减大鼠IFN-γmRNA的表达,但增加了IL-10 mRNA、Foxp3 mRNA和IL-4 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗后,甲状腺功能减退大鼠甲状腺组织中p-JNK/JNK和p-p38/p38 MAPK水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙治疗甲状腺功能减退症具有促使甲状腺激素失衡正常化、平衡Th1/Th2细胞因子、抑制JNK/p38 MAPK信号通路活化的功能。

新辅助化疗联合复方苦参注射液对乳腺癌Ki67表达的临床疗效观察

目的 探讨新辅助化疗(neoadjuvant therapy,NAT)联合复方苦参注射液(compound kushen injection,CKI)对乳腺癌Ki67表达的临床疗效。方法 选取2018年1月1日至2020年12月31日河北工程大学附属医院乳腺外二科接受NAT的原发性乳腺癌患者80例,随机分为对照组和治疗组,每组40例。对照组采用NAT治疗,治疗组采用NAT联合CKI治疗。比较两组临床有效率及稳定率、病理分期及Ki67表达强度。结果 80例患者中,年龄33~67岁,平均47.9岁。治疗组有效率和稳定率高于对照组(87.50%比67.50%,95.00%比80.00%),治疗后两组病理分期(Ⅲ期)例数及Ki67表达强度均低于治疗前,且治疗组病理分期(Ⅲ期)例数低于对照组(6例比14例),差异均有统计学意义(P <0.05);治疗后两组Ki67表达强度的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NAT联合CKI可增强乳腺癌患者临床疗效、降低其病理分期和Ki67表达强度。

siRNA沉默水通道蛋白5基因抑制人肝癌细胞的生长作用

目的通过采用小干扰RNA(siRNA)靶向作用人肝癌细胞Bel-7402中的水通道蛋白5(AQP5)基因,观察其对Bel-7402的增殖及凋亡的作用。方法体外孵育Bel-7402,采用阴性对照siRNA(siRNA-NC)、siRNA-AQP5#1、siRNA-AQP5#2转染细胞。实验设置细胞为对照组、siRNA-NC组、sliRNA-AQP5#1组、siRNA-AQP5#2组。噻唑蓝染色检测细胞的增殖能力;流式细胞技术测定细胞的凋亡情况;蛋白免疫印迹技术和Real time-PCR测量细胞中AQP5蛋白和mRNA的含量。结果siRNA-NC组与对照组相比,细胞的增殖、凋亡及AQP5蛋白和mRNA的含量无明显差异(P>0.05)。与对照组相比,siRNA-AQP5#1组、siRNA-AQP5#2组的细胞的增殖力降低、凋亡率升高、AQP5蛋白和mRNA的含量均降低(均P<0.05)。结论siRNA靶向作用人肝癌细胞AQP5基因通过降低其增殖和升高其凋亡率达到抑制癌细胞的生长作用。

枸杞多糖增强人树突状细胞抗肿瘤的机制

目的观察枸杞多糖对树突状细胞抗肿瘤的增强作用。方法分离人外周血单核细胞,体外培养其成为未成熟树突状细胞和成熟树突状细胞。用冻融法制备肝癌细胞的全抗原并致敏未成熟树突状细胞;通过混合淋巴细胞实验,获取成熟树突状细胞激活的特异性效应T细胞。用MTT法测定效应T细胞对肝癌细胞的杀伤率。观察枸杞多糖在树突状细胞的成熟及T细胞的激活、增殖和杀瘤过程中的作用。结果枸杞多糖能促进树突状细胞的成熟,转染了人肝癌细胞的全抗原的mDC可特异地激活T细胞为效应T细胞。效应T细胞可特异性地杀伤人肝癌细胞,而对不相关的MG-63细胞无特异性的杀伤作用。结论枸杞多糖能促进树突状细胞成熟和增强效应T细胞的增殖和杀伤肿瘤的活性。

枸杞多糖对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及凋亡的研究

目的研究枸杞多糖诱导人肝癌细胞Bel-7402的凋亡作用及其作用机制。方法体外培养的人肝癌细胞Bel-7402,细胞经不同剂量枸杞多糖(LBP)处理后,采用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪分析LBP对Bel-7402细胞周期和凋亡的影响,用RT-PCR技术检测Bel-7402细胞SurvivinmRNA的表达。结果 LBP可明显抑制人肝癌细胞Bel-7402的生长,并能诱导Bel-7402细胞凋亡,凋亡率(%)分别为(6.20±0.62),(12.80±0.47)和(18.10±0.70),与对照组比较,差异有非常显著性(P<0.01);各剂量药物处理组的肿瘤细胞Survivin mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。结论枸杞多糖可抑制Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,该作用可能与下调细胞Survivin表达有关。

枸杞多糖对人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响

目的:研究枸杞多糖(lycium bararum polysaccharides,LBPs)对正常人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响。方法:无菌分离人外周血淋巴细胞,加入植物凝集素(PHA)和不同质量浓度的LBPs,MTT法检测其对淋巴细胞增殖的影响;RT-PCR法检测LBP对γ-干扰素(INF-γ)mRNA表达的影响;ELISA法检测LBPs作用后淋巴细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)分泌的变化。结果:50～100μg/mLLBPs能明显增强PHA活化的人外周血淋巴细胞的增殖(P<0.01);80、100μg/mL的LBPs能使淋巴细胞IFN-γmRNA的表达水平明显升高(P<0.01);LBPs能促进淋巴细胞产生IL-2和TNF-α,并呈现浓度依赖性(P<0.01)。结论:LBPs能增强人外周血淋巴细胞的免疫功能从而加强抗肿瘤作用。

枸杞多糖对实验性脑胶质瘤大鼠免疫功能的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对C6脑胶质瘤细胞株诱导的脑胶质瘤大鼠免疫功能的影响。方法将40只大鼠随机分为正常对照组、模型组、LBP组和顺铂组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均制备大鼠脑胶质瘤动物模型。LBP组用LBP灌胃1次/d,顺铂组用顺铂灌胃1次/d,正常对照组和模型组用生理盐水灌胃1次/d,治疗时间共16周。ELISA法检测各组大鼠血清细胞因子中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)的水平;用流式细胞术检测各组大鼠外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞(Tr)和CD8^+T细胞数量。结果与正常对照组相比,模型组大鼠外周血CD4^+CD25^+Tr数量增加而CD8^+T细胞的数量减少,血清IL-10水平增加而TNF-α水平降低(P<0.05);与模型组比较,LBP组和顺铂组大鼠外周血CD4^+CD25^+Tr数量减少而CD8^+T细胞数量增加,血清IL-10水平降低而TNF-α水平增加(P<0.05)。各组所测指标在8周与16周之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论脑胶质瘤大鼠免疫功能降低,而LBP可增强实验性脑胶质瘤大鼠免疫功能,从而达到抗肿瘤的作用。

6种中药多糖对诱导树突状细胞成熟及刺激T细胞抗肿瘤作用的比较

目的:比较6种中药多糖对树突状细胞(DC)诱导成熟及刺激T细胞活化、杀伤肿瘤的能力。方法:分离人外周血单核细胞,经体外诱导培养为未成熟DC。用冻融法制备肝癌细胞完全抗原并致敏未成熟DC,成熟DC进一步激活特异性效应T细胞。用MTT法测定效应T细胞对肝癌细胞的杀伤率。观察枸杞子多糖、猪苓多糖、茯苓多糖、灵芝多糖、黄芪多糖和当归多糖6味中药多糖对人树突状细胞成熟、刺激T细胞增殖能力和对肿瘤细胞的杀伤能力。结果:经6种中药多糖诱导的DC分子表达有明显变化,MHCⅡ+、CD86+、CD83+(P<0.05,P<0.01),而经RPMI-1640培养的DC分子表达与培养前无明显变化。经6种中药多糖诱导的DC均能促进效应T细胞的增殖能力(P<0.01),效应T细胞能有效地杀伤肝癌细胞(P<0.05),而对MG-63细胞不能有效杀伤(P﹥0.05)。其中枸杞多糖对上述功能的作用最为明显(P<0.05)。结论:上述6种中药多糖均可诱导DC分化与成熟,刺激T细胞增殖和肿瘤杀伤活性,枸杞多糖与其余5种多糖比较,对上述功能的作用最为明显。

枸杞多糖对实验性食管癌大鼠外周血细胞免疫功能的影响

目的探讨枸杞多糖对甲基苄基亚硝胺诱导食管癌大鼠外周血细胞免疫功能的影响及其意义。方法健康雄性F344大鼠40只,随机分为模型组(10只)、治疗组(10只)、生理盐水对照组(10只)和正常对照组(10只)。正常对照组常规饲养,其余两组以甲基苄基亚硝胺(NMBA)0.5 mg/kg皮下注射于大鼠诱导食管癌模型,治疗组在诱癌同时预防性给予枸杞多糖10 mg/kg灌胃治疗,生理盐水对照组给予生理盐水1ml/kg灌胃。在诱癌9周、15周每组分别取5只大鼠抽取外周血,EDTA抗凝,用流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4+T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞(Tr细胞)的细胞数,另留取血清ELISA法检测大鼠外周血IL-10的含量。结果甲基苄基亚硝胺诱导大鼠食管癌后大鼠外周血中CD4+T细胞比例显著下降,CD4+CD25+Tr细胞比例显著升高;此过程随诱癌时间而加重,各时间点与对照组比较差异均有显著性(P均<0.05);用药后9周、15周枸杞多糖治疗组CD4+CD25+Tr细胞占淋巴细胞百分比显著低于模型组(P<0.05),CD4+T细胞比例显著高于模型组(P<0.05);模型组大鼠血清IL-10水平显著高于正常对照组,经枸杞多糖治疗后显著下降。结论甲基苄基亚硝胺诱导大鼠食管癌后外周血中CD4+CD25+Tr细胞表达增强,IL-10分泌显著增加,枸杞多糖可有效抑制其表达,显著改善实验性食管癌大鼠细胞免疫功能障碍。

枸杞多糖诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的实验研究

目的研究枸杞多糖诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡作用及其作用机制。方法利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测枸杞多糖对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人食管癌细胞Eca-109凋亡率、细胞周期变化;DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测肿瘤细胞凋亡的DNA水平变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内钙离子浓度变化。结果经枸杞多糖作用后的人食管癌细胞Eca-109出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量LBP组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性,1000μg/mlLBP处理组的抑制率达96.02%。DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的梯形电泳条带。药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达21.3%。各剂量药物处理组的肿瘤细胞内的Ca2+浓度明显高于对照组(P<0.01)。结论枸杞多糖可明显抑制人食管癌细胞Eca-109的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布,阻止细胞周期于G2/M期。

直肠癌组织中Id-2和MMP-9的表达与临床病理学指标的关系

目的观察在人直肠癌组织中分化抑制因子-2(Id-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况,分析两者表达水平的相关性,探讨直肠癌临床病理学指标与两者的表达水平的关系。方法收集直肠癌组织和癌旁正常组织标本56例,采用免疫组织化学方法观察Id-2和MMP-9在直肠癌和癌旁正常组织中的表达水平,Spearman相关分析法分析Id-2与MMP-9表达有无相关性,分析Id-2与MMP-9表达与直肠癌临床病理学指标之间的关系。结果 Id-2在直肠癌组织的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(73.21%vs.48.21%,P<0.05),MMP-9在直肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织(71.43%vs.44.64%,P<0.05)。Spearman相关分析检测Id-2与MMP-9表达水平存在正相关性(r=0.393,P=0.003);Id-2和MMP-9表达水平与直肠癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05);而与年龄和性别无关(P>0.05)。结论 Id-2和MMP-9的表达水平与直肠癌的发生发展存在着密切的关系,直肠癌组织中Id-2高表达可能是通过MMP-9途径来促进肿瘤的侵袭转移。

转化生长因子-β_1对子宫内膜上皮细胞增殖和转分化的影响

目的探究转化生长因子-β_1(TGF-β_1)对子宫内膜组织上皮细胞数目和转分化的影响。方法收集2017年6月1日—12月1日河北工程大学附属医院手术获取的正常子宫内膜组织并分离其上皮细胞。将细胞分为正常对照组(只加培养液)和实验组(培养液和不同浓度的TGF-β_1),采用噻唑蓝染色检测活细胞的数量;用酶联免疫法检测各组细胞悬液中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)和纤黏连蛋白(FN)的分泌情况;免疫印迹法比较各组细胞胞质中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏附蛋白-E(E-cadherin)的含量。结果经TGF-β_1作用后,子宫内膜上皮细胞增殖明显,且浓度越大,时间越长,增殖率越高;5 ng/ml TGF-β_1组细胞悬液中Col-Ⅰ和FN的分泌量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(t=10.784、16.974,P<0.01);与正常对照组比较,实验组胞质中表达的E-cadherin含量降低,而α-SMA含量增高,且随TGF-β_1浓度增高,E-cadherin、α-SMA含量呈梯度降低/升高,差异有统计学意义(F=171.149、204.618、P<0.01)。结论 TGF-β_1能刺激子宫内膜组织上皮细胞数目增加,诱导其向肌成纤维细胞转变。

三种中药多糖对脑胶质瘤大鼠外周血中CD4^+ CD25^+ T细胞和TGF-β_1水平的影响

目的分析枸杞子多糖(LBP)、黄芪多糖(APS)和当归多糖(ASP)3种中药多糖对脑胶质瘤大鼠外周血中免疫抑制细胞数量及抑制因子水平的影响。方法除正常对照组(不造模,以生理盐水灌胃灌胃)外采用立体定向技术接种C6细胞制备大鼠脑胶质瘤动物模型,造模动物分为模型组、LBP组、APS组和ASP组,分别以生理盐水、LBP、APS和ASP灌胃。测量每组的肿瘤重量并计算抑瘤率;用流式细胞术检测各组大鼠外周血CD4^+CD25^+T细胞数量;ELISA法检测各组大鼠血清细胞因子中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的水平。结果模型组大鼠肿瘤重量最大,外周血CD4^+CD25^+T细胞的细胞数目增加血清TGF-β_1水平升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);LBP组、APS组和ASP组的肿瘤重量均较小,大鼠外周血CD4^+CD25^+T细胞的细胞数减少血清中TGF-β_1水平降低与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在3个多糖组中LBP组的上述作用最显著。结论 LBP、APS和ASP均可抑制大鼠脑胶质瘤的生长,改善大鼠机体的免疫抑制状态,提高免疫功能,其中以LBP的作用最显著。

芪归健脑颗粒抑制老年性痴呆大鼠脑海马组织COX-2和iNOS基因表达

目的观察芪归健脑颗粒对老年性痴呆(AD)大鼠学习记忆能力的保护作用,并探讨其作用机制。方法 SD大鼠海马内注射Aβ25-35制备AD大鼠模型,在造模前3 d和造模后18 d予芪归健脑颗粒灌胃12 mg·kg-1·d-1,2次/d,共21d。用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力,Western blot测定大鼠海马COX-2和iNOS蛋白表达。结果 AD大鼠在定位航行实验中,逃避潜伏期延长,单位时间内跨越原平台次数减少,空间记忆力受损,与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05);实验第2,3,4天给药组的逃避潜伏期较模型组均显著缩短,与正常对照组接近(P>0.05)。模型组海马COX-2和iNOS基因表达较正常对照组显著升高,给药组COX-2和iNOS基因表达较模型组显著下降(P<0.05)。结论芪归健脑颗粒对Aβ25-35所致AD模型大鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用,其机制可能是芪归健脑颗粒通过COX-2,nNOS等信号转导途径,减轻Aβ25-35毒性作用所致脑组织神经元损伤,从而改善学习记忆障碍,起到防治AD的作用。

枸杞多糖对人食管癌细胞增殖的抑制作用及与Rb蛋白表达的关系

目的分析中药枸杞多糖(LBP)对食管癌细胞株TE-13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞凋亡和周期阻滞与Rb蛋白表达的关系。方法取对数生长期的人食管癌细胞TE-13,接种于96孔培养板,分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组各孔加入不同浓度的LBP,阴性对照孔加入完全培养基,阳性对照孔加入化疗药物羟甲基喜树碱,应用MTT法检测LBP对TE-13细胞的抑制作用;光镜下观察TE-13细胞的形态学变化;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组化法检测TE-13细胞经药物处理前后去磷酸化Rb蛋白表达的变化。结果 LBP对TE-13细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),其药物浓度越大,作用时间越长,抑制效应越强;LBP作用48h时,对TE-13细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.61μg/ml。出现亚二倍体和凋亡峰(Ap);LBP能提高TE-13细胞中Rb蛋白的表达(P<0.01)。结论 LBP能显著抑制TE-13细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与CPP提高Rb蛋白的表达有关。

枸杞多糖对人树突状细胞成熟的影响

目的:研究枸杞多糖对人树突状细胞(DC)表面标志及功能成熟的影响。方法:通过密度离心法分离人外周血单核细胞,采用细胞因子体外培养7d后,实验组加入枸杞多糖(100ug/ml),空白对照组加等量RPMI1640,两组分别同时作用48h,观察细胞的形态变化及用免疫细胞化学法检测其表面标志的表达。通过混合淋巴细胞反应检测细胞提呈抗原的能力。结果:用枸杞多糖刺激的人DC表达MHC-Ⅱ、CD83、CD86和促进T细胞的增殖的能力比空白对照组增加。结论:枸杞多糖可以促进体外培养的人DC的成熟,促进DC诱导的免疫应答启动。

河北省某市大学生结核感染的预防性治疗

目的：探讨预防性治疗在大学生结核病防治中的效果。方法：对该市5所大学2000-2001年入学新生18950人进行PPD试验，PPD试验阳性且胸部X线检查正常的学生进行预防性治疗。将学生分为治疗组和对照组，治疗组给予利福喷汀和力克肺疾每周2次；肝泰乐每日3次，连续3个月。观察3年的发病情况。分别计算发病率。结果：参加学生3457人，其中有1875名学生参加了治疗，完成率92．96％，不良反应率1．22％。三年中治疗组发生结核3例，年均发病率53．33／10万；对照组1582名发生结核11例，年均发病率231．77／10万。两组的年发病率有显著性。结论：大学生中进行的该结核感染预防性治疗有效、可行。

电穿孔法转染人树突状细胞条件的优化

目的:通过电穿孔法将带有增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent proteinEGFP)的真核表达载体pIRES2-EGFP(IRES2 internal ribosome entrysite 2内部核糖体进入位点2)质粒导入未成熟树突状细胞(Immature Dendritic Cell,i mDC),探讨不同电穿孔条件对i mDC电转染率和存活率的影响。方法:通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,采用细胞因子体外培养诱导其成为i mDC。在大肠杆菌中扩增pIRES2-EGFP质粒,选择不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、DNA剂量等。应用电穿孔仪将pIRES2-EGFP质粒导入未成熟树突状细胞,荧光显微镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数。0.4%锥虫蓝(trypan blue)染色,计数电转染后细胞存活率。结果:当i mDC浓度为5×106/mL与6μg DNA质粒混合,设定电转染仪电压为300 V、脉冲时间为500μs时,其电转染率到最高,细胞存活率最高,转染后24 h明显表达,48 h后表达最强。结论:在适当的电压、脉冲时间下,选择适当的细胞浓度、DNA剂量,在转染后的一定时间范围内,电穿孔法转染i mDC可使目的基因获得较高的转染率,且细胞死亡最少。电转染提供了外源基因转染i mDC的可行技术。

P16基因产物在人类肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨P16蛋白在肝细胞癌中的表达,并推测P16基因在肝细胞癌发生、发展过程中的作用及临床意义。方法采用免疫组化SP法测定26例肝细胞癌及癌旁肝细胞中P16蛋白表达进行对比研究。结果26例肝细胞癌P16蛋白表达量明显低于癌旁肝组织。P16蛋白表达量随病理分级增高而降低。部分肝细胞癌组织存在P16蛋白的表达缺失现象。结论P16蛋白表达障碍可能与肝细胞癌的发生和组织分化有关。可考虑将P16蛋白作为本病预后分析的参考指标值。