4种重要功能性低聚糖的研究进展

对低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、低聚果糖和低聚木糖4种功能性低聚糖的化学组成、分布及生理功效进行了阐述,并分析了功能性低聚糖研究中存在的问题,最后对其应用前景作了展望。

泛素样小蛋白4(SUMO4)的克隆、原核表达、纯化及鉴定

【目的】为人类泛素样小蛋白4(SUMO4)多克隆抗体制备和疾病研究奠定基础。【方法】根据Gen-Bank提供的核酸序列,设计7条单链DNA,采用重叠延伸PCR方法,合成SUMO4基因编码区。基因片段经限制性内切酶双酶切,构建到表达载体pGEX-4T-1中。酶切、测序鉴定后,将重组子转染BL21 RIL菌株,表达及纯化融合蛋白。用SDS-PAGE和Western blot检测纯化效果,鉴定表达产物。【结果】成功合成了长度约为280 bp的SUMO4基因,经双酶切鉴定,SUMO4原核表达载体构建成功,插入片段测序正确。GST-SUMO4融合蛋白在终浓度1mmol/L IPTG、28℃诱导5 h后产量达到高峰,SDS-PAGE证实表达产物以可溶形式存在,分子量约为37 ku,GST亲和层析的纯化效果良好,Western blot验证融合蛋白分子量与预期值相符。【结论】SUMO4蛋白在大肠杆菌中高效表达,并以可溶性蛋白形式存在。

大豆副产物中生物活性物质的生理保健功能

本文对大豆副产物中的大豆多肽、大豆低聚糖、大豆异黄酮、大豆皂甙,大豆膳食纤维等活性成分与生理功能作了较系统地阐述。

转录因子Sox2 SUMO修饰位点突变体的构建及真核表达

目的:构建Sox2及突变体Sox2 K247R的真核表达载体,并在293FT细胞中表达。方法:以含有Sox2基因全长的馈赠质粒为模板,用循环延伸PCR法得到该基因的突变体Sox2 K247R,并将野生型及突变型基因定向亚克隆到真核表达载体pCMV-HA上。得到的重组质粒经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定。其后用脂质体包埋法将pCMV-HA-Sox2及pCMV-HA-Sox2 K247R分别单独转染或与pCMV-Myc-SUMO1共转染293FT细胞。采用Western blot分析蛋白表达情况及SUMO修饰情况。结果:经酶切和DNA序列测定,重组子序列正确,突变体第247位密码子由AAG转变为CGG。West-ern blot结果显示野生型及突变型的Sox2都在细胞内得到了很好的表达,SUMO修饰位点突变后,Sox2不能与SUMO蛋白结合。结论:Sox2野生型及突变型真核表达载体构建成功,在蛋白水平体现了SUMO修饰的差异性。

人SUMO1基因的真核表达载体构建及其RNA干扰靶点筛选

[目的]构建人SUMO1的真核表达载体,筛选SUMO1的有效干涉靶点。[方法]将SUMO1亚克隆至载体pCMV-HA中。寻找可能的干涉位点,合成上下游引物,退火后直接克隆入GFP-HU双启动子载体。用WesternBlot和细胞荧光的方法检测各载体对外源性SUMO融合蛋白表达的影响,其后检测对内源性SUMO1表达的敲降效果。[结果]构建的人SUMO1真核表达载体pCMV-HA-SUMO1测序正确。针对267、279、293、309、342、386等不同干涉靶点构建双启动子干扰载体,其中293位点的干涉载体在WesternBlot和荧光检测试验中均表现出稳定的敲降效果,抑制了SUMO1的表达。[结论]该研究成功构建了SUMO1的真核表达载体及具有明显敲降效果的干涉载体,可为后续研究奠定基础。