我国结核分枝杆菌现代北京基因型菌株Rv3303c~Rv3304的多态性及生理意义研究

目的分析我国141株结核分枝杆菌现代北京基因型菌株Rv3303c~Rv3304基因间隔区的多态性,探讨Rv3303c~Rv3304基因间隔区的生理意义。方法通过聚合酶链式反应(PCR)及测序技术分析141株结核分枝杆菌现代北京基因型菌株中Rv3303c~Rv3304基因间隔区序列,构建Rv3303c~Rv3304基因间隔区的重组质粒,将重组质粒及空载质粒电转入耻垢分枝杆菌mc2155中,β-半乳糖苷酶(报告基因lacZ表达产物)活性试验检测报告基因lacZ的表达水平;使用SPSS 25.0软件进行单因素方差分析。结果141株现代北京基因型菌株中Rv3303c~Rv3304基因间隔区存在376 bp、260 bp和144 bp 3种不同长度序列,分别含有4、2和0个拷贝重复序列,以2个拷贝重复序列为主,占比约95.74%;基于这3种不同拷贝重复序列,构建重组质粒pSD5B-334、pSD5B-332、pSD5B-330,并将重组质粒及空载质粒转入耻垢分枝杆菌中;β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,与菌株MSMEG-pSD5B相比,重组菌株MSMEG-334、MSMEG-332、MSMEG-330的β-半乳糖苷酶活性均上升,菌株间的β半乳糖苷酶活性的差异有统计学意义(P<0.001)。结论我国结核分枝杆菌现代北京基因型菌株Rv3303c~Rv3304基因间隔区具有多态性,通过模式菌株验证发现其能显著影响报告基因lacZ的转录。

两种常见非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌基因同源抗原、B细胞抗原表位和抗体交叉反应研究

目的探讨我国常见两种非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌蛋白抗原的交叉免疫反应状况,为以非结核分枝杆菌研制新型结核疫苗提供参考依据。方法平均核酸一致性计算器计算胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和结核分枝杆菌的基因组同源性,OrthorFinder软件分析3种菌的同源基因,与结核分枝杆菌B细胞抗原表位编码基因进行比对。分别制备3种菌的灭活菌体抗原和全菌蛋白抗原,对新西兰大白兔进行皮下注射免疫。采用间接酶联免疫吸附试验技术,分别检测3种免疫兔血清抗体Ig G水平及交叉免疫的血清抗体Ig G水平。结果脓肿分枝杆菌、胞内分枝杆菌与结核分枝杆菌同源基因分别为2350个和2740个,其同源基因中分别有479个和521个富含B细胞抗原表位。结核分枝杆菌、胞内分枝杆菌和脓肿分枝杆菌的蛋白抗原均能刺激兔产生较高水平的抗体滴度,分别达到1∶320000、1∶160000和1∶80000。胞内分枝杆菌和脓肿分枝杆菌免疫兔血清均可与结核分枝杆菌抗原产生高水平的交叉反应,抗体滴度分别达到1∶40000和1∶80000。结论胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌与结核分枝杆菌之间均存在高水平的抗体交叉免疫反应,提示上述非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌具有较多共同抗原,具有研制新型结核疫苗较好的潜在应用价值。