西安市先天性肾上腺皮质增生症新生儿末梢血17α-羟孕酮筛查切值研究

目的初步探讨西安市不同性别、孕周及出生体重新生儿先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia,CAH)筛查切值。方法回顾性分析2019年1月~2020年12月西安市新生儿疾病筛查中心170949例新生儿,出生体重为3.245±2.735 kg,孕周为34.05±9.05周,采用全自动荧光免疫分析仪检测足跟血17α-羟孕酮(17α-hydroxyprogesterone,17α-OHP)水平,其中初筛阳性2678例,筛查阳性391例,确诊14例。按照性别、出生孕周和体重进行分组,组间差异有统计学意义(P<0.05),并以99%百分位数确定切值。结果不同性别、出生孕周及体重新生儿17α-OHP浓度99%百分位数在9.40~24.47 nmol/L之间,组间差异具有统计学意义(Z=22.50~104.31,均P=0.000)。不同性别、出生孕周及体重新生儿17α-OHP初筛阳性率及筛查阳性率组间差异具有统计学意义(χ^(2)=20.578~7152.872,均P=0.000)。性别、出生孕周和体重与17α-OHP水平呈负相关,Beta系数分别为-0.077,-0.282和-0.147。早产或低体重新生儿以22.00 nmol/L为切值时,初筛阳性病例由2678例减少至1649例。结论不同孕周及出生体重新生儿17α-OHP水平有差异,应将西安地区新生儿17α-OHP筛查切值修改为正常体重足月儿为11.00 nmol/L,早产或低体重新生儿为22.00 nmol/L。

尿液外泌体提取优化及冷冻对外泌体RNA含量的影响

目的对现有沉淀法提取尿液外泌体进行优化,并探讨不同的储存条件对尿液外泌体RNA含量的影响。方法分别用先浓缩后沉淀法和直接沉淀法提取人尿液标本中的外泌体,比较两种方法的分离效率和成本;采用ExoQuick-TCTM沉淀试剂盒提取外泌体;纳米粒子跟踪分析技术(NTA)检测外泌体浓度及粒径分布;动态光散射技术(DLS)检测外泌体电位;透射电镜(TEM)观察外泌体形态;western blot检测外泌体标记分子CD63及Alix蛋白的表达;另取10例临床尿液标本验证先浓缩后沉淀的提取方法,以证实优化方法的可靠性。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测20例前列腺癌患者尿液外泌体经过反复冻融(新鲜、1、3、5次)及9例前列腺癌患者尿液外泌体在-80℃冷冻不同时间(新鲜、1周、2周、1个月)时外泌体RNA标志物let-7c和PSA mRNA的表达量,并采用Wilcoxon秩和检验进行统计学分析。结果 NTA检测两种方法提取的外泌体粒径分布为30~150 nm,均为单峰;DLS结果显示,两种方法提取的外泌体电位均呈负值;透射电镜观察两种方法提取的外泌体大小较为一致,直径分布为30~150 nm;western blot检测证实优化方法存在外泌体标记分子CD63及Alix蛋白;10例尿液标本提取的外泌体浓度约为109~1011 particles/mL。外泌体经过5次冻融后let-7c和PSA mRNA含量明显下降,Z值分别为-1.69、-1.73(P均<0.05)。而外泌体在-80℃冷冻1个月后其RNA含量保持稳定。结论优化后的外泌体提取方法在保证外泌体浓度和质量的前提下极大地降低成本,分离得到的外泌体在-80℃短时间冷冻后其RNA含量保持稳定,但不能反复冻融超过5次。