抗肿瘤多肽M1-21的剂型优化

通过去溶剂化方法,将单体抗肿瘤多肽M1-21纳米化,形成50 nm左右大小的多肽纳米颗粒(Nano-M1-21).运用动态光色散技术(DLS)和低压透射电镜(TEM)对Nano-M1-21进行表征,并进行体外37℃条件下颗粒稳定性测试.运用乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7和4T1细胞验证Nano-M1-21的抗肿瘤效果,结果表明Nano-M1-21更容易被细胞摄取;相比单体多肽,达到抑制肿瘤细胞的浓度更低.运用小鼠乳腺癌4T1细胞活体肿瘤移植模型,发现Nano-M1-21展示出良好的抑瘤效果.总之,单体肽M1-21经纳米剂型优化后,有利于改善细胞的摄取,显示出更好的抑瘤效果.

肿瘤抗原肽M1-10的抑瘤活性研究

基于生物信息学分析筛选出一段源于转录因子FOXM1的肿瘤抗原肽M1-10。通过淋巴细胞增殖、干扰素γ释放及细胞杀伤等试验,证实M1-10肽段可在小鼠体内诱导有效的免疫记忆,与HJURP、MELK、VEGFR1、VEGFR2来源的四种抗原肽联用可产生更好的效果。运用小鼠乳腺癌移植瘤模型和MMTV-PyMT原发乳腺癌模型开展M1-10单独或联合四种抗原肽的肿瘤预免疫试验,发现M1-10单独使用可发挥显著的抑瘤效果,联合四种抗原肽的抑瘤效果更强。总之,本研究开发了一种肿瘤抗原肽,该肽免疫原性强,单独或与其他肿瘤抗原肽联用时可实现有效的肿瘤免疫。该结论为FOXM1的抗肿瘤机制提供了进一步的见解。

基于CRISPR/Cas9系统构建FOXA2表达示踪体系

利用CRISPR/Cas9系统在基因FOXA2蛋白质编码区后插入绿色荧光蛋白核酸序列,实现对FOXA2基因开启和关闭的示踪。通过靶向序列选择、Cas9靶向质粒及Donor片段的克隆、细胞转染并进行流式细胞荧光分选、阳性细胞有限稀释、富集培养及单克隆细胞的鉴定和转录翻译水平验证等5个方面,进行实验研究。在编辑的乳腺肿瘤细胞MCF-7中,绿色荧光蛋白有效表达;乳腺癌细胞内绿色荧光蛋白的表达水平同FOXA2蛋白的表达水平正相关,且经肿瘤细胞上皮间质转化进程诱导因子EGF的诱导,绿色荧光蛋白和FOXA2表达水平同步降低。方法学上CRISPR/Cas9靶向FOXA2并利用细胞内同源性定向修复插入绿色荧光蛋白序列成功;利用报告基因蛋白表达水平示踪目的基因的开启、关闭及表达量高低结果准确、方法简单,效果明显。