胶原纤维的酶解液中羟脯氨酸含量测定方法的优化

针对文献报道的测定蛋白水解液中羟脯氨酸含量的氯胺T显色法(比色法)中的操作条件不一致的问题,对该方法的关键条件进行了优化。用优化后的方法和氨基酸分析仪法(AA法)对系列皮粉和皮块蛋白酶水解液中的羟脯氨酸的含量进行了测定和比较。结果表明:优化后比色法的最适测定条件是:氧化时间5 min、显色时间15 min、消解时间4 h、样品pH 6.0～6.5;优化后的比色法的测定结果具有较好的重复性(RSD小于1.17%);比色法与AA法测定相同样品的结果比值在0.97～1.09之间,测定结果基本一致。与AA法相比,比色法具有快速、简便、成本低、易实现等优点,可以用于表征酶对胶原纤维的作用性能。

不同来源胰蛋白酶的性能及软化效果

研究了2种微生物胰蛋白酶(NB115和JD8)的基本酶学特性及其对酪蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白等底物的作用性能,考察了它们对脱灰裸皮的软化效果,并与2种典型的动物胰蛋白酶(DY300和PTN110)进行了比较。结果表明:四种胰蛋白酶在pH值7~9之间有较高的活力,在25~45℃范围,它们的酪蛋白和胶原蛋白活力均随温度的升高而增加;NB115和PTN110具有较高的耐温性能,JD18和DY300的耐温性能较差。它们对不同底物的作用性能有较大的差异,在相同的酪蛋白活力下,JD18有更高的胶原蛋白活力,但其无弹性蛋白活力;DY300具有相对较高的弹性蛋白活力。由于它们对皮结构蛋白的作用性能的差异,其软化皮革的柔软度和粒面紧实度有一定的差异,适合不同类型皮革的软化。